薄層色譜法鑒定芙蓉散中的主要成分

趙偉峰 車曉平 錢 珊 周明學 曾祖平

(1北京市中醫研究所，北京，100010;2首都醫科大學附屬北京中醫醫院，北京，100010;3北京中醫藥大學東方學院09級，廊坊，065001)

芙蓉散為北京市醫療機構制劑法定制劑，收載于《醫療單位制劑規程》中，主要成分有芙蓉葉、生大黃、黃連、關黃柏、澤蘭、黃芩、冰片，具有清熱解毒、消腫止痛之功效。用于瘡瘍腫毒，紅腫作痛，癥見紅、腫、熱、痛。舌紅、苔白、脈數;乳腺炎、各種軟組織損傷、關節炎見上述證候者[1]。方中芙蓉葉有涼血解毒、消腫止痛作用，生大黃清熱解毒、祛瘀生新，在方中芙蓉葉、生大黃共為君藥解毒消腫;黃連、黃芩、黃柏清熱解毒，燥濕消炎，助君藥清熱解毒，在方中行臣藥的功能;澤蘭活血行水為佐藥;冰片化腐生肌，清熱涼血，行使藥之功。

芙蓉散作為外用藥，使用時用黃酒調成稀糊外敷或用凡士林制成軟膏，涂敷患處;同時也作為原料藥，用于制備芙蓉軟膏，在北京中醫醫院皮外科廣泛使用[2]。作為法定制劑，芙蓉散和芙蓉膏在北京市多家醫療機構使用多年，但一直以來只用簡單的試管反應控制制劑質量，缺乏專屬性強的鑒別手段。為了保證臨床療效，控制制劑質量，本研究采用薄層色譜法對芙蓉散處方中主要藥味進行鑒別。

1 儀器、試藥和樣品

1.1 儀器 AJ150L電子精密天平(上海梅特勒－托利多儀器有限公司)，SK7210HP型KUDOS超聲波清洗機(上海科導超聲儀器有限公司)，YOKO－ZS紫外線分析攝影儀(武漢藥科新技術開發公司)。

1.2 飲片 芙蓉散處方飲片由北京杏林藥業有限責任公司提供。經鑒定，芙蓉葉符合《北京市中藥飲片標準》2008版“芙蓉葉”項下的有關規定;其余飲片均符合《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《中國藥典》)2010年版(一部)各項下的質量要求。

1.3 試藥 熊果酸(110742－200516，中國藥品生物制品檢定所)，掌葉大黃對照藥材(120904－200914，中國藥品生物制品檢定所)，黃連對照藥材(913－9905，中國藥品生物制品檢定所)，黃芩對照藥材(120955－200607，中國藥品生物制品檢定所)，關黃柏對照藥材(120937－200506，中國藥品生物制品檢定所)。

硅膠 G預制板(20110508，青島海洋化工廠分廠);聚酰胺薄膜;所用試劑均為分析純(北京化學試劑公司)。

1.4 實驗樣品 芙蓉散(20110929，20120107，20120710，首都醫科大學附屬北京中醫醫院)。

2 方法與結果

2.1 大黃的鑒別[3]取芙蓉散2 g，加乙醚20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL溶解，作為供試品溶液。稱取除大黃外的處方其他飲片，照供試品溶液制備方法制備大黃陰性對照液。另取掌葉大黃對照藥材0.1 g，加乙醚20 mL，超聲提取20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL溶解，作為大黃陽性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版(一部)附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液、大黃陰性對照液各10 μL、大黃陽性對照溶液5 μL，分別點于同一硅膠G預制板上，以甲酸乙酯－石油醚(30－60℃)－甲酸(5∶15∶1)溶液分層后的上層為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm的紫外燈下檢視。供試品色譜與大黃陽性對照有對應的橙色熒光斑點;陰性對照無干擾，見圖1。

圖1 大黃薄層色譜圖

圖2 黃芩薄層色譜圖

2.2 黃芩的鑒別[3－4]上述1中乙醚提取后的殘渣揮盡溶劑，加乙酸乙酯與甲醇按3∶1比例混合的溶液20 mL，超聲提取20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL溶解，作為供試品溶液。稱取除黃芩的處方其他飲片，照供試品溶液制備方法制備黃芩陰性對照液。另取黃芩對照藥材1 g，加上述混合溶液30 mL，超聲提取30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL溶解，作為黃芩陽性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版(一部)附錄附錄ⅥB)試驗，吸取供試品溶液、黃芩陰性對照液各10 μL、黃芩陽性對照溶液5 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(5∶3∶1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置365 nm的紫外燈下檢視。供試品色譜與黃芩陽性對照色譜有對應的暗色斑點;陰性對照無干擾，見圖2。

2.3 黃連的鑒別[3，5－6]稱取除黃連外的處方其他飲片，照上述2中供試品溶液制備方法制備黃連陰性對照液。另取黃連對照藥材0.1 g，加甲醇5 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液作為黃連陽性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版(一部)附錄附錄ⅥB)試驗，吸取上述2中供試品溶液、黃連陰性對照液各5 μL、黃連陽性對照溶液2 μL，分別點于同一硅膠G預制板上，以乙酸乙酯－環己烷－異丙醇－甲醇－三乙胺－ 水(3.5∶3∶1∶1.5∶1∶0.5)為展開劑，展開缸另一側加入等體積的濃氨試液，預平衡20 min，展開，取出，晾干，置365nm的紫外光燈下檢視。供試品色譜與黃連陽性對照有對應的亮黃色熒光斑點;陰性對照無干擾，見圖3。

圖3 黃連薄層色譜圖

2.4 關黃柏的鑒別[3]稱取除關黃柏外的處方其他飲片，照上述2中供試品溶液制備方法制備關黃柏陰性對照液。另取關黃柏對照藥材0.2 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲提取30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，作為關黃柏陽性對照溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版(一部)附錄附錄ⅥB)試驗，吸取上述2中供試品溶液、黃柏陰性對照液各10 μL、關黃柏陽性對照溶液5 μL，分別點于同一硅膠G預制板上，以環己烷－甲苯－乙酸乙酯(3∶3∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜與關黃柏陽性對照有對應斑點;陰性對照無干擾，見圖4。

圖4 關黃柏薄層色譜圖

2.5 熊果酸的鑒別[3，7－8]稱取除澤蘭的處方其他飲片，照上述2中供試品溶液制備方法制備澤蘭陰性對照液。另取熊果酸對照品，加無水乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版(一部)附錄附錄ⅥB)試驗，吸取上述(2)中供試品溶液、澤蘭陰性對照液各10 μL、對照品溶液2 μL，分別點于同一硅膠G預制板上，以環己烷－丙酮－乙酸乙酯(5∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置365nm的紫外光燈下檢視。供試品色譜與對照品色譜有對應的相同顏色的熒光斑點;陰性對照無干擾，見圖5。

圖5 澤蘭薄層色譜圖

3 討論

1)鑒別黃芩時，首先嘗試藥典收載的色譜條件，結果層析效果不佳;經過摸索，調整展開劑比例為甲苯－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(5∶3∶1∶2)，供試品色譜斑點清晰，陰性對照無干擾。

2)鑒別黃連、關黃柏時，考慮到二者均含有生物堿類成分，其中小檗堿和巴馬汀為二者共有成分，而黃連還含有其他生物堿成分如表小檗堿、黃連堿;若將黃連、關黃柏合并鑒別，則對關黃柏的薄層鑒別會產生干擾，無法體現關黃柏的存在。因此，本研究中黃連的鑒別是針對其特有的生物堿類成分表小檗堿、黃連堿，而關黃柏的鑒別是針對其含有的黃柏酮。關黃柏的鑒別是參考藥典中鑒別黃柏酮的方法進行的。

3)藥材芙蓉葉《中國藥典》中未收載。研究中采用乙醇提取藥材并制備芙蓉葉陰性;根據文獻[9]曾經針對芙蓉葉中的蘆丁等黃酮類成分進行了薄層層析鑒別，但陰性對照有干擾，高效液相色譜也顯示陰性對照液中含有蘆丁，與澤蘭中含有蘆丁成分的文獻記載相符[10];也曾嘗試鑒別芙蓉葉中的其他弱極性成分，多次改變供試液制備方法、柱層析除雜及變換展開劑種類等，結果陰性對照仍有干擾，故放棄。

4)冰片在芙蓉散中所占比例很小(0.4%)。曾經按藥典方法鑒別，結果供試品色譜與對照藥材色譜無明顯對應斑點，故放棄。

5)現代藥理研究顯示，芙蓉散對角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹和醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高具有顯著抑制作用，能夠抑制和滅活常見淺表感染致病菌，表明芙蓉散具有抗炎消腫作用[11]。處方中黃連、關黃柏中主要藥效成分為生物堿類，具有顯著的抗菌、抗炎、抗病毒作用[12];黃芩中有效成分為黃酮類化合物，現代藥理研究證明具有明顯的抗菌、抗炎、抗過敏、抗氧化、抗致癌和抗病毒等作用[13];大黃主要化學成分為蒽醌衍生物，其中游離型蒽醌衍生物主要有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚和大黃酚，是大黃中主要的抗菌成分[14];澤蘭中含有的熊果酸具有抗病毒和抗菌作用，也是芙蓉散中的藥效成分[15]。因此，本研究制定的芙蓉散質量控制方法可以有效地鑒別芙蓉散中的藥效成分，從而保證臨床療效。

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