絨毛和胎盤中Jagged-1/Jagged-2的表達與蛻膜中CD56+NK表達相關性探討

于 哲 蔣春林

廣州中醫藥大學祈福醫院婦產科，廣東廣州 511495

流產是婦女妊娠過程中的一個過程，妊娠期流產和免疫系統有著密切的關系[1]。該研究2013年3月—2014年2月間通過對該院妊娠期流產病例臨床資料分析，觀察流產病例胎盤中Notch配體Jagged-1、Jagged-2和CD56+NK細胞定位和表達情況，從而分析妊娠期脫膜中CD56+NK細胞表達水平和Notch配體Jagged-1、Jagged-2之間的關系，為分析流產原因，給予相應的措施以相應的理論依據。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院2013年3月—2014年2月收治的妊娠期流產對象42例和30例正常剖宮產對象臨床資料進行分析，其中依據流產方式對42例妊娠期流產對象進行分組，人工流產組22例，年齡 22～36歲，平均年齡（25.6±5.4）歲，孕周 5～11周，平均孕周（7.5±2.0）周，自然流產組 20例，年齡 23～37 歲，平均年齡（25.2±5.1）歲，孕周 6～10 周，平均孕周（7.3±2.1）周。另外取 42例流產對象的絨毛組織標本作為絨毛組，剖宮產對象取其胎盤作為胎盤組，年齡23～37歲，平均年齡（26.5±4.4）歲。人工流產組和自然流產組、絨毛組和胎盤組研究對象的資料差異無統計學意義，具有可比性。

1.2 方法

Jagged-1、Jagged-2和CD56+NK細胞均采用免疫組化方法進行測定。首先進行固定標本、對其進行脫水、透明、浸蠟然后包埋，將其切至厚度為3～5μm。染色之前37℃烤箱過夜，脫蠟，水化，酒精、水進行清洗，制成玻片放在濕盒內，加入3%過氧化氫，蒸餾水沖洗，緩沖液浸泡振蕩，進行抗原修復。分別滴加鼠抗人單克隆抗體CD56和CD16，兔抗人多克隆抗體Jagged-2、Jagged-1在組織上，通過PBS沖洗切片，加酶標抗鼠/兔聚合物，37℃孵育30 min，沖洗切片，緩沖液浸潤、振蕩，加入DAB進行顯色，1min通過蒸餾水終止顯色，通過蘇木素進行復染。通過高倍顯微鏡進行觀察，隨機選擇15個高倍視野，計算每隔視野陽性細胞面積和視野總面積的比值，呈現黃色或者棕黃色為陽性反應。

1.3 觀察指標

①觀察絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達情況；②觀察自然流產組和人工流產組絨毛中的CD56+、Jagged-1及Jagged-2的表達情況；③觀察CD56+、Jagged-1及Jagged-2表達的相關情況。

1.4 統計方法

通過采用統計學軟件SPSS 19.0建立數據庫進行統計學分析，通過t檢驗主要對計量資料進行分析，運用直線相關性的分析。

2 結果

2.1 絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達情況

絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達情況，見表1。胎盤組Jagged-1高于絨毛組，Jagged-2低于絨毛組，差異有統計學意義（P<0.05）。

表1 絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達情況（）

表1 絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達情況（）

組別Jagged-1 Jagged-2絨毛組(n=42)胎盤組(n=30)t值P值13.5±1.015.3±1.17.22<0.0527.6±1.216.7±1.435.44<0.05

2.2 人工流產組和自然流產組絨毛中 Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表達情況

自然流產組和人工流產組絨毛中CD56+、Jagged-1及Jagged-2的表達情況，見表2。自然流產組Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表達均低于人工流產組，差異有統計學意義（P<0.05）。

表2 人工流產組和自然流產組絨毛中Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表達情況（）

表2 人工流產組和自然流產組絨毛中Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表達情況（）

組別Jagged-1Jagged-2 CD56+人工流產組(n=22)自然流產組(n=20)t值P值13.6±1.111.0±1.010.26<0.0527.3±1.113.7±1.053.69<0.059.6±1.26.7±1.010.82<0.05

2.3 Jagged-1陽性細胞和Jagged-2陽性細胞的表達水平

CD56+NK細胞和絨毛組織中的Jagged-1陽性細胞表達水平、Jagged-2陽性細胞表達水平均呈現明顯正相關，差異有統計學意義（r=0.91,0.95，P<0.05）。

3 討論

胚胎與母體之間接觸的界面稱為母胎界面，它包含了胎兒滋養層和母體子宮蛻膜。由當蛻膜化誘導因子對子宮的內膜間質刺激時導致增殖分化從而形成了異質性組織，這種組織叫做脫膜組織。脫膜組織由多種細胞組成[2]。胚胎及其附屬物的主要營養來源是蛻膜，其不僅具有很好的營養作用，同時也是一種局部的免疫器官，對于妊娠有著重要的作用。免疫細胞的入侵和蛻膜化是妊娠早期的主要過程，蛻膜中的B淋巴細胞和T淋巴細胞的在早期妊娠中的數有所減少，大約占蛻膜組織中20%左右的免疫細胞，子宮蛻膜自然殺傷細胞占子宮淋巴細胞的70%，主要分布在受精卵著床部位的周圍。Notch信號通路主要包括Notch受體、Notch配體、CSL DNA結合蛋白，其中Notch受體在T細胞、B細胞、干細胞、巨噬細胞等多種細胞表面分布，其包括五種配體，主要是 Jagged-1、Jagged-2、Delta-like1、Delta-like3、Delta-like4.Jagged-1在胎盤、心臟、肺、腎均有廣泛的表達，其主要是對組織發育進行調控，對造血前體細胞發育有效的維持，并且參與增殖分化[3]。有研究表明[4]，Notch信號在人胎盤中有重要的調節作用，Notch信號和配體Jagged-1參與了血管的塑性和穩定。Jagged-1通過Notch信號系統參與T/NK細胞的更新和發育。以往資料顯示[5]，人體侵襲性胃癌和Notch配體Jagged-1有著密切的關系。經過實驗證實Jagged-1對Notch型號途徑介導，從而誘發多發性骨髓瘤發生增殖。有資料顯示[6]，Jagged-2在造血干細胞上表達豐富，提高了造血祖細胞的增生能力。在正常的妊娠絨毛組織中，有四種Notch受體進行表達，其中第一期絨毛組織中的Jagged-1表達遠遠低于在妊娠第三期的胎盤組織中的Jagged-1表達，而Jagged-2的表達和 Jagged-1正好相反，Jagged-2、Jagged-1、對妊娠成功起著顯著的重要的作用[7]。在早期妊娠中，有不同功能的NK細胞和外周血表型在蛻膜中，其主要是CD56brightCD16dim，此類因子在滋養層細胞和受精卵著床周圍浸潤。資料顯示[8]，自然流產蛻膜中的表達量遠遠低于人工流產蛻膜中CD56+NK細胞表達量，通過研究顯示，當自然流CD56+NK細胞的數量下降，可以導致母胎界面細胞因子中的GM-CSF和TGF-β表達的降低，進一步的對胎兒的生長發育環境造成了影響，最終導致流產。Jagged-1會刺激造血祖細胞發生分化，形成NK細胞Jagged-2可以誘導臍帶血 CD34+細胞表達 CD56brightCD16-、CD94-和CD117+NK細胞，并且表達NKG2D表達，對于K256細胞有一定的殺傷活性。綜上所述，Jagged-1、Jagged-2可能共同參與了NK細胞表型的變化，從而對妊娠結局造成影響，并且形成妊娠免疫耐受。

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