Vitek2Compact和MicroScan WalkAway40SI檢測(cè)MRSA的性能評(píng)價(jià)

魏丹丹，劉洋，萬(wàn)臘根

(南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌 330006)

金黃色葡萄球菌是醫(yī)院和社區(qū)獲得性感染的常見(jiàn)病原菌之一,可引起皮膚軟組織感染和身體其他部位的廣泛感染以及食物中毒[1]。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用,自1961年英國(guó)出現(xiàn)了第一株對(duì)甲氧西林耐藥且mecA基因陽(yáng)性的金黃色葡萄球菌 (MRSA)以來(lái)[2],MRSA的感染率迅速猛增,MRSA對(duì)所有β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素的固有耐藥性及其多重耐藥性已嚴(yán)重影響了臨床抗感染的治療[3],因而對(duì)MRSA準(zhǔn)確鑒定以指導(dǎo)臨床醫(yī)生合理使用抗生素顯得尤為重要。本研究旨在通過(guò)對(duì)Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺(tái)全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)的檢出性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期更好地指導(dǎo)臨床合理使用抗生素。

1 材料與方法

1.1 菌株來(lái)源 收集2011年11月至2012年11月南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床各種標(biāo)本分離的124株非重復(fù)的金黃色葡萄球菌作為實(shí)驗(yàn)菌株，其中痰液43株，分泌物33株，血液24株，膿液9株，尿液6株，其他9株。

1.2 主要儀器和試劑 法國(guó)梅里埃生物公司的Vitek 2 Compact全自動(dòng)微生物鑒定儀、西門(mén)子公司的MicroScan WalkAway 40 SI全自動(dòng)微生物鑒定儀、德國(guó)Eppendorf公司的MyGenie96/384型PCR儀、美國(guó)BIO.RAD公司的DYY-6D型電泳儀、北京六一公司的凝膠成像儀。PCR試劑和DNA Marker I購(gòu)于TaKaRa大連寶生物公司，相關(guān)擴(kuò)增引物參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)，由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。

1.3 MRSA的表型鑒定方法 將臨床分離株金黃色葡萄球菌隨機(jī)分兩組分別采用Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺(tái)全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)細(xì)菌進(jìn)行鑒定，其中Vitek 2 Compact采用頭孢西丁肉湯稀釋法，MicroScan WalkAway 40 SI采用苯唑西林肉湯稀釋法，質(zhì)控菌株為ATCC25923和ATCC29213，均為本實(shí)驗(yàn)室保存菌株。

1.4 mecA及mecC基因檢測(cè) 溶菌酶煮沸法提取金黃色葡萄球菌基因組DNA，采用PCR法根據(jù)引物進(jìn)行擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠電泳后，紫外線(xiàn)投射凝膠成像系統(tǒng)拍攝觀(guān)察結(jié)果。

1.5 細(xì)菌鑒定儀的性能評(píng)價(jià) 以PCR檢測(cè)mecA及mecC基因確定為MRSA作為標(biāo)準(zhǔn),采用四格表法統(tǒng)計(jì) Vitek 2 Compact和 MicroScan WalkAway 40 SI兩臺(tái)全自動(dòng)微生物鑒定儀檢測(cè)MRSA的靈敏度、特異度和符合率。然后用數(shù)據(jù)分析軟件IBM SPSS Statistics 20對(duì) PCR 法、Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI兩臺(tái)全自動(dòng)微生物鑒定儀對(duì)MRSA的檢出率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MRSA的表型鑒定檢出結(jié)果 39株金黃色葡萄球菌經(jīng)Vitek 2 Compact鑒定,有22株對(duì)頭孢西丁耐藥,17株對(duì)頭孢西丁敏感,檢出率56.41%；85株金黃色葡萄球菌經(jīng)MicroScan WalkAway 40 SI鑒定,有44株對(duì)苯唑西林耐藥,41株對(duì)苯唑西林敏感,檢出率51.76%。

2.2 mecA及mecC基因檢測(cè)結(jié)果 用PCR方法進(jìn)行mecA及mecC基因檢測(cè),結(jié)果顯示:124株菌株均未檢出mecC基因陽(yáng)性菌株，經(jīng)Vitek 2 Compact鑒定的39株金黃色葡萄球菌中有22株菌呈mecA基因陽(yáng)性,檢出率為56.41%；經(jīng)MicroScan WalkAway 40 SI鑒定的85株金黃色葡萄球菌中有44株mecA基因陽(yáng)性，檢出率為51.76%。

2.3 Vitek 2 Compact的性能 PCR法和Vitek 2 Compact檢測(cè)MRSA的結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 Vitek 2 COMPACT檢測(cè)MRSA的靈敏度、特異度和符合率

以PCR方法檢測(cè)耐藥基因mecA及mecC確定MRSA為標(biāo)準(zhǔn)，則Vitek 2 Compact檢測(cè)MRSA的敏感性為95.45%,特異性為94.12%,符合率為94.87%。

2.4 MicroScan WalkAway 40 SI的性能 PCR法和MicroScan WalkAway 40 SI檢測(cè)MRSA的結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 MicroScan WalkAway 40 SI檢測(cè)MRSA的靈敏度、特異度和符合率

以PCR方法檢測(cè)耐藥基因mecA及mecC確定MRSA為標(biāo)準(zhǔn),則MicroScan WalkAway 40 SI檢測(cè)MRSA的敏感性為93.18%,特異性為92.68%,符合率為92.94%。

2.5 兩臺(tái)鑒定儀性能的比較 用IBM SPSSStatistics 20軟件對(duì)兩臺(tái)鑒定儀性能進(jìn)行卡方檢驗(yàn),χ2=0.46,P>0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

MRSA的耐藥機(jī)制主要是產(chǎn)生了一種新的由mecA基因編碼的與β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素親和力低的PBP2a[4]，國(guó)外不斷研究報(bào)道檢出除mecA基因以外的新的基因型mecC[5],國(guó)內(nèi)還沒(méi)有相關(guān)的報(bào)道。PCR檢測(cè)MRSA不受藥敏試驗(yàn)條件的影響,特異性高,被公認(rèn)為是診斷MRSA的金標(biāo)準(zhǔn)[6]。本試驗(yàn)通過(guò)PCR方法檢測(cè)耐藥基因mecA及mecC基因以確定MRSA,得出Vitek 2 Compact檢測(cè)MRSA的靈敏度為95.45%,特異性為94.12%,符合率為94.87%；MicroScan WalkAway 40 SI檢測(cè)MRSA的敏感性為93.18%,特異性為92.68%,符合率為92.94%。上述結(jié)果表明Vitek 2 Compact檢測(cè)MRSA的敏感性、特異性和符合率均好于MicroScan WalkAway 40 SI。但雖然Vitek 2 Compact檢測(cè)MRSA準(zhǔn)確性高(符合率達(dá)94.87%)，還是會(huì)有漏檢 (敏感性95.45%)和出現(xiàn)誤診 (特異性94.12%)的情況，在臨床實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)引起關(guān)注，減少漏診、誤診；MicroScan WalkAway 40 SI檢測(cè)MRSA雖然在敏感性、特異性和符合率上較Vitek 2 Compact低，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)差異，也可用于臨床的檢測(cè)，在臨床實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)關(guān)注誤診和漏診的發(fā)生。

Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI分別出現(xiàn)了1株和3株對(duì)頭孢西丁和苯唑西林耐藥而mecA基因陰性的菌株，分析原因可能與菌株產(chǎn)生高水平的β-內(nèi)酰胺酶或存在PBP2a以外的低親和力PBP有關(guān)，還需進(jìn)一步證實(shí)。另外，還分別發(fā)現(xiàn)1株和3株mecA基因陽(yáng)性,但對(duì)頭孢西丁和苯唑西林敏感的臨床菌株,可能與mecA基因本身的表達(dá)受到抑制或其輔助基因失活有關(guān)，其機(jī)制還需要作進(jìn)一步研究。表型與基因型不一致的現(xiàn)象,可能還受環(huán)境因素的影響,如生長(zhǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、pH值、滲透壓、二價(jià)金屬離子等[7]，造成MRSA耐藥程度的差異,從而影響MRSA的檢測(cè)結(jié)果。

總之，PCR方法雖然是檢測(cè)MRSA方法的金標(biāo)準(zhǔn)，但是由于其對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和設(shè)施要求高、費(fèi)用比較昂貴以及操作復(fù)雜,不易在臨床實(shí)驗(yàn)室中常規(guī)開(kāi)展。Vitek 2 Compact和MicroScan WalkAway 40 SI全自動(dòng)微生物鑒定儀檢測(cè)MRSA具有較高的敏感性、特異性及符合率，且操作簡(jiǎn)單和快速,目前還是適合臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)MRSA的常用方法。

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