血府逐瘀湯顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

狄永良，徐海波

(1．江蘇省溧陽(yáng)市中醫(yī)院，江蘇 常州 213300;2．江陰天江藥業(yè)有限公司，江蘇 無(wú)錫 214434)

血府逐瘀湯顆粒由桃仁、紅花、當(dāng)歸、生地、川芎等12味藥組方，具有活血祛瘀、行氣止痛的功效。為保證制劑質(zhì)量，本研究中采用薄層色譜(TLC)法對(duì)方中赤芍進(jìn)行了定性鑒別，采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)制劑中桃仁的主要活性成分苦杏仁苷進(jìn)行了含量測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明，方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，可作為本制劑的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

Agilent 1200 series型高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);超聲清洗機(jī)(無(wú)錫超聲電子設(shè)備廠);電子天平(瑞士Mettler公司);KQ－250B型超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器公司)。血府逐瘀湯顆粒(江陰天江藥業(yè)有限公司，批號(hào)為 200902，200903，201001);按處方，根據(jù)鑒別的藥味，去除該藥味，按制備工藝提取，制得陰性對(duì)照品;芍藥苷(批號(hào)為111700－200501)、苦杏仁苷(批號(hào)為 110820－200403)、赤芍(批號(hào)為 110713－200609)對(duì)照品，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 赤芍鑒別

取本品粉末2 g，加乙醇10 mL，振搖5 min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液。另取赤藥對(duì)照藥材及芍藥苷對(duì)照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，即為對(duì)照藥材和對(duì)照品溶液。再取不含赤芍的陰性對(duì)照提取物1 g，照供試品溶液制備方法制備，制得陰性對(duì)照品溶液。照TLC法[1]試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸(40 ∶5 ∶10 ∶0．2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此斑點(diǎn)，本鑒別方法具有專(zhuān)屬性，見(jiàn)圖1。

圖1 薄層色譜圖

2．2 苦杏仁苷含量測(cè)定[1－4]

2．2．1 色譜條件

色譜柱:Lichrospher C18柱(200 mm × 4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－0．1%磷酸溶液(20∶80);檢測(cè)波長(zhǎng):283 nm;柱溫:35℃;流速:1．0 mL/min;理論板數(shù):2 253;進(jìn)樣量:10 μL。

2．2．2 溶液制備

精密稱(chēng)取苦杏仁苷對(duì)照品1．95 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0．195 g/L的對(duì)照品溶液。取血府逐瘀湯顆粒(批號(hào)為200902)約0．5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，精密稱(chēng)定質(zhì)量，加甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，過(guò)微孔濾膜，即得供試品溶液。另按處方去除桃仁，制得不含桃仁的陰性對(duì)照品，同法制得不含桃仁的陰性對(duì)照品溶液。

2．2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):分別精密吸取對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μL，按擬訂色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖和峰面積，見(jiàn)圖2。可見(jiàn)，在供試品溶液色譜中，與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照品溶液無(wú)此色譜峰，表明在此試驗(yàn)條件下，其他成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，方法具有專(zhuān)屬性。

線性關(guān)系考察:分別精密吸取苦杏仁苷對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度為 0．195 g/L)2，4，6，8 mL，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度分別為 0．039，0．078，0．117，0．156 g/L的系列對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)、苦杏仁苷質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=9 137．85 X+4．23，r=0．999 89。結(jié)果表明，苦杏仁苷進(jìn)樣量在0．39～1．95 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):精密吸取 2．2．2項(xiàng)下對(duì)照品溶液 10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0．13%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取供試品溶液10 μL，按擬訂色譜條件測(cè)定，分別于 0，1，2，4，8 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定苦杏仁苷峰面積積分值。結(jié)果的 RSD為0．49%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖2 高效液相色譜圖

重復(fù)性試驗(yàn):取血府逐瘀湯顆粒約0．5 g，精密稱(chēng)定，平行6份，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積積分值并計(jì)算含量。結(jié)果含量為(10．21 ±0．05)mg/g，RSD 為 0．46%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品0．25 g，精密稱(chēng)定，分別加入苦杏仁苷對(duì)照品適量，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 苦杏仁苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2．2．4 樣品含量測(cè)定

取樣品約0．5 g，精密稱(chēng)定，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測(cè)定。結(jié)果批號(hào)為200902，200903，201001的3批血府逐瘀湯顆粒中苦杏仁苷的平均含量分別為 10．16，10．48，10．31 mg/g。考慮到不同批次含量的差異，在最低含量的基礎(chǔ)上下浮20%，暫訂本品每1 g含桃仁以苦杏仁苷(C20H27O11)計(jì)，不得少于8．0 mg。

3 討論

超聲提取時(shí)間考察:超聲提取 10，20，30，40 min，苦杏仁苷的含量分別為 9．99，10．18，10．18，10．17 mg/g。結(jié)果表明，處理20 min，苦杏仁苷含量基本不再增加，為保證提取完全，故確定超聲處理時(shí)間為30 min。

流動(dòng)相選擇:通過(guò)查閱文獻(xiàn)和現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)，選擇了3種流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了預(yù)試驗(yàn)，分別為1號(hào)[乙腈－冰醋酸－水(16∶1∶84)]、2 號(hào)[甲醇 －0．1%磷酸溶液(20 ∶80)]、3 號(hào)[甲醇 － 水(20 ∶80)]。經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，2號(hào)流動(dòng)相出峰較快且峰型好，適合本試驗(yàn)要求，故選擇2號(hào)流動(dòng)相。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄34－35．

[2]錢(qián) 平，劉志輝，錢(qián) 芳，等．桃仁定性鑒別與含量測(cè)定研究[J]．中國(guó)藥事，2008，24(4):351．

[3]顏永剛．桃仁質(zhì)量研究[D]．成都:成都中醫(yī)藥大學(xué)，2008．

[4]顏永剛，裴 瑾，萬(wàn)德光．HPLC法測(cè)定不同產(chǎn)地和品種桃仁中苦杏仁苷[J]．中草藥，2008，39(9):1 415．