阿莫西林分散片人體生物等效性研究

李晉峰，沙 瑩，李佩瓊 ，王九輝，林明琴

(1．海口市制藥廠有限公司，海南 海口 570311;2．海南醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室，海南 海口 571101)

阿莫西林為半合成廣譜青霉素類抗生素，性質(zhì)穩(wěn)定，口服吸收快，體內(nèi)分布廣，價格便宜，臨床應(yīng)用廣泛。其口服制劑有片劑、膠囊劑、顆粒劑、咀嚼片、干混懸劑、分散片等多種劑型，與普通片劑相比，分散片具有崩解快、吸收快、生物利用度高等特點。本研究中旨在對海口市制藥廠有限公司研制的阿莫西林分散片進(jìn)行人體生物等效性評價，為臨床用藥提供參考。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀(1525泵，Waters 2487檢測器，Breeze色譜工作站);HH－1型漩渦混合器;TL－16型臺式高速冷凍離心機等。試驗制劑為海口市制藥廠有限公司研制的阿莫西林分散片(規(guī)格為0．25 g，批號為110701);參比制劑阿莫西林分散片(華北制藥集團(tuán)制劑有限公司，規(guī)格為0．25 g，批號為1202003);阿莫西林對照品(海口市制藥廠有限公司，含量為84．4%);甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀、氫氧化鈉為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 研究對象

受試者為健康男性志愿者，無煙酒嗜好，無藥物過敏史和藥物依賴史，無精神病史及其他慢性疾病史，試驗前經(jīng)病史詢問、體格檢查和實驗室檢查均無異常，試驗前2周內(nèi)未服用任何藥物。受試者服藥后避免劇烈運動，且不得長時間臥床。試驗期間統(tǒng)一進(jìn)清淡飲食。試驗經(jīng)倫理委員會批準(zhǔn)，受試者簽署知情同意書。

2．2 試驗設(shè)計

采用雙周期、隨機、交叉試驗設(shè)計，選擇20名受試者，隨機分為兩組，每組10人。一組先服用參比制劑，經(jīng)7 d洗脫后再服用試驗制劑;另一組給藥順序相反。給藥劑量均為0．75 g。試驗前禁食12 h，服藥2 h后可飲水，4 h后統(tǒng)一進(jìn)餐。于給藥前及給藥后0．25，0．50，0．75，1．00，1．50，2．00，2．50，3．00，3．50，4．00，5．00，6．00，8．00 h時抽取上肢靜脈血 5 mL，注入肝素試管中，分離血漿，于－20℃保存，待測。

2．3 血漿藥物濃度測定方法學(xué)

2．3．1 色譜條件

色譜柱:Kromasil C18柱(150 mm ×4．6 mm，5 μm);柱溫:室溫;流動相:0．05 mol/L磷酸二氫鉀溶液(用2 mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào) pH 至 5．5)－甲醇(89∶11);流速:1．0 mL/min;紫外檢測波長:230 nm;進(jìn)樣量 20 μL。

2．3．2 樣品處理

精密吸取血漿樣品100 μL，精密加入甲醇200 μL，渦旋混合1 min，以6 000 r/min的速率離心10 min，取上清液20 μL進(jìn)樣，以峰面積進(jìn)行定量分析。

2．3．3 方法考察

專屬性考察:取空白血漿、空白血漿加對照品、受試者服藥后血漿樣品，按2．3．2項下方法處理后測定，記錄高效液相色譜(HPLC)圖，考察方法專屬性。結(jié)果阿莫西林保留時間約為5．1 min，無內(nèi)源性物質(zhì)及其他雜質(zhì)干擾主成分的測定，方法專屬性強，見圖1。

圖1 阿莫西林含量測定方法高效液相色譜圖

標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量下限確定:配制質(zhì)量濃度為0．116，0．232，0．464，0．928，1．856，3．712，7．424，14．848 μg/mL的阿莫西林加空白血漿標(biāo)準(zhǔn)系列，按2．3．2項下方法處理后測定，以峰面積對質(zhì)量濃度進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=289．45X+0．2541，r=0．9998(n=8)。阿莫西林質(zhì)量濃度線性范圍為 0．116 ～14．848 μg/mL，最小可定量質(zhì)量濃度為0．116 μg/mL。

精密度和回收率試驗:配制質(zhì)量濃度為0．232，1．856，7．424μg/mL的低、中、高3組阿莫西林加空白血漿標(biāo)準(zhǔn)樣各5份并測定，以測定值與加入值之比計算回收率，并計算日內(nèi)精密度;連續(xù)3 d配制并測定阿莫西林濃度，考察日間精密度。結(jié)果見表1。

表1 精密度與回收率試驗結(jié)果(n=5)

穩(wěn)定性試驗:配制阿莫西林質(zhì)控樣品，分別于室溫放置12 h，－20℃冷凍保存1個月，－20℃反復(fù)凍融4次以考察室溫、冷凍、凍融3種條件下生物樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果不同條件下的測定結(jié)果偏差均小于15%，阿莫西林血漿樣品穩(wěn)定性良好。

2．4 藥代動力學(xué)

取受試者給藥前及給藥后各時間點的血漿樣品，按2．3．2項下方法測定，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算阿莫西林血藥濃度。20名受試者口服0．75g參比制劑和等劑量試驗制劑后阿莫西林的平均血藥濃度－時間曲線見圖2。

根據(jù)測得的20名健康受試者的血藥濃度，用DAS 2．0軟件計算阿莫西林在健康男性志愿者體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)。20名健康受試者口服參比制劑和試驗制劑后阿莫西林的主要藥代動力學(xué)參數(shù)見表2。

圖2 20名受試者平均血藥濃度－時間曲線

表2 試驗制劑與參比制劑的藥代動力學(xué)參數(shù)比較()

表2 試驗制劑與參比制劑的藥代動力學(xué)參數(shù)比較()

參數(shù)0 ～8 h藥時曲線下面積[AUC0→8，μg/(h·mL)]0 ～∞藥時曲線下面積[AUC0→∞，μg/(h·mL)]峰濃度(Cmax，μg/mL)達(dá)峰時間(tmax，h)半衰期(t1/2，h)相對生物利用度(F，%)試驗制劑25．10 ± 4．41 25．81 ± 4．48 10．031 ± 1．928 1．30 ± 0．25 1．22 ± 0．50 101．46 ± 11．42參比制劑24．85 ± 3．98 24．56 ± 4．24 9．83 ± 2．11 1．35 ± 0．24 1．29 ± 0．68

2．5 生物等效性評價

用DAS 2．0軟件對主要藥代動力學(xué)參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，tmax經(jīng)Mann－Whitney檢驗，試驗制劑與參比制劑無顯著性差異(U=1．102，P=0．919)。Cmax，AUC0→∞，AUC0→∞經(jīng)對數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，兩制劑在不同周期間差異無顯著性意義。試驗制劑AUC0→8和 AUC0→∞的 90%可信區(qū)間均未超出參比制劑相應(yīng)AUC0→8和 AUC0→∞的80% ～125%的范圍;試驗制劑 Cmax的90%可信區(qū)間也未超出參比制劑 Cmax的70% ～143%的范圍。結(jié)果表明，兩制劑在健康男性志愿者體內(nèi)的吸收速度和吸收量差異均無顯著性，二者均有生物等效性。

3 討論

阿莫西林血藥濃度的測定文獻(xiàn)大多采用HPLC－UV法，本研究在文獻(xiàn)[1]的基礎(chǔ)上對色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，當(dāng)流動相的磷酸二氫鉀溶液(0．05mol/L)用2mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)至 pH為5．5時，雜質(zhì)及主成分出峰均較快，主成分峰形較好，與雜質(zhì)峰分離良好，試驗分析周期短，適用于樣品量大的生物等效性研究。也有文獻(xiàn)采用液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(LC－MS/MS)法[2]，但檢測成本過高。在樣品處理中，采用了直接蛋白沉淀法，通過對比多種蛋白沉淀劑，發(fā)現(xiàn)在所建立的色譜條件下，用甲醇作沉淀劑雜質(zhì)最少。20名健康受試者在試驗過程中均未出現(xiàn)不良反應(yīng)。該廠生產(chǎn)的阿莫西林分散片的主要藥代動力學(xué)參數(shù)與文獻(xiàn)[3－5]報道相近，受試制劑與參比制劑生物學(xué)等效。

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