干燥溫度和采收時(shí)間對(duì)畬藥地稔中沒(méi)食子酸及槲皮素含量的影響△

劉敏，劉帥英，余樂(lè)，李水福

(麗水市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 麗水 323000)

干燥溫度和采收時(shí)間對(duì)畬藥地稔中沒(méi)食子酸及槲皮素含量的影響△

劉敏，劉帥英，余樂(lè)，李水福*

(麗水市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江 麗水 323000)

目的比較不同干燥溫度和采收時(shí)間對(duì)畬藥地稔中沒(méi)食子酸、槲皮素含量的影響，確定地稔最佳干燥溫度和最佳采收時(shí)間。方法應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定，色譜柱為Agilent-SB C18(4.6 mm×250 mm，5μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸溶液，梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm。結(jié)果畬藥地稔中沒(méi)食子酸、槲皮素含量隨干燥溫度降低而顯著升高，以室內(nèi)陰干效果為最好。5月份初采收的地稔兩成分總含量最高。結(jié)論干燥溫度和采收時(shí)間是影響地稔沒(méi)食子酸和槲皮素含量的重要因素。以?xún)沙煞趾繛橹笜?biāo)，最佳采收時(shí)間在5月初，花未開(kāi)時(shí)。

地稔；沒(méi)食子酸；槲皮素；干燥溫度；采收時(shí)間

畬藥地稔，為野牡丹科植物地稔MelastomadodecandrumLour.的全草，畬民多稱(chēng)“嘎狗嚕”或“糞桶板”，又名山地稔、地葡萄、金頭石榴、鋪地錦、落地稔、地茄等，分布于長(zhǎng)江以南的江西、福建、浙江、廣西、廣東、貴州、云南等省區(qū)，漢族、瑤族、畬族等各少數(shù)民族民間使用較廣泛[1-2]。臨床用于治療高熱、腫痛、咽喉腫痛、牙痛、赤白血痢疾、黃疸、水腫、痛經(jīng)、崩漏、帶下、疔瘡、毒蛇咬傷等癥[3]。地稔含有多糖、黃酮類(lèi)、氨基酸、酚類(lèi)、常量和微量元素、色素等多種化學(xué)成分，具有止血、抗氧化、抑制糖基化佟末產(chǎn)物(AGE)的生成、鎮(zhèn)痛抗炎、降糖、抗炎、抗病毒等作用[4-6]。地稔中的沒(méi)食子酸具有抗菌、抗病毒等作用，槲皮素具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，此外還有降血壓、增強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、減少毛細(xì)血管脆性、降血脂、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠脈血流量等作用。因此，以此兩種成分同時(shí)控制其藥材、飲片、提取物及其制劑的質(zhì)量有較大的意義。初步研究發(fā)現(xiàn)，干燥溫度、采收時(shí)間對(duì)地稔中這兩種活性成分含量影響較大，目前市場(chǎng)上的地稔飲片顏色泛黃，含量低，多為陽(yáng)光下暴曬所致。本試驗(yàn)采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定不同采收時(shí)間地稔經(jīng)不同溫度干燥后，其沒(méi)食子酸和槲皮素含量，為確定地稔最佳干燥溫度及采收時(shí)間提供參考，為藥材的儲(chǔ)存、飲片的制備、制劑的工藝提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)；電子天平(XS104，上海恒剛衡器天平有限公司)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9140A，上海賀德實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)地稔藥材(采自麗水市蓮都區(qū)，經(jīng)我所李水福主任中藥師鑒定為野牡丹科植物地稔MelastomadodeccandrumLour，根據(jù)采集時(shí)間確定批號(hào)分別為130501，130617，130720，130825，130925，131015，131116)；沒(méi)食子酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110831-201204，含量為89.9%)、槲皮素對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100081-200907，含量為96.5%)。甲醇為色譜純，磷酸為色譜純，水為哇哈哈純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材的干燥

研究發(fā)現(xiàn)，地稔不同部位沒(méi)食子酸和槲皮素成分含量差別顯著，而畬民多以全草入藥，因此取不同月份、不同部位地稔按以下不同干燥方法處理后測(cè)定兩成分含量[7-10]。

陰干：取新鮮、洗凈的地稔藥材，置于室內(nèi)通風(fēng)陰涼處，待其自然干燥。

60 ℃烘干：取新鮮、洗凈的地稔藥材，置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，恒溫60 ℃烘烤至干燥。

80 ℃烘干：取新鮮、洗凈的地稔藥材，置于電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，恒溫80 ℃烘烤至干燥。

所得各干燥藥材樣品在進(jìn)行分析前置于干燥器中貯存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 沒(méi)食子酸、槲皮素的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件 色譜柱為Agilent-SB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相為甲醇-0.4%磷酸溶液，梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1，柱溫30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取沒(méi)食子酸和槲皮素對(duì)照品適量，加80%甲醇制成每1 mL含沒(méi)食子酸234.8 μg、槲皮素151.1 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取經(jīng)不同干燥方法處理后，粉碎，過(guò)3號(hào)篩的地稔葉、莖、根藥材粉末各4.0 g(同時(shí)另取本品測(cè)定水分)置錐形瓶中，精密加入50 mL甲醇-15%鹽酸(4∶1)，密塞，稱(chēng)定重量，加熱回流提取3 h，放冷至室溫，再稱(chēng)定重量，用提取溶劑補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，分別精密量取5 mL濾液置20 mL容量瓶(葉)、10 mL容量瓶(莖)、10 mL容量瓶(根)中，用提取溶劑稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜過(guò)濾，濾液即為供試品溶液。

2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別精密吸取2.2.2、2.2.3項(xiàng)下溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。

由圖1可見(jiàn)，在該色譜條件下，沒(méi)食子酸、槲皮素與其他成分可達(dá)到基線(xiàn)分離，分離度均大于1.5。對(duì)照品色譜峰與供試品色譜峰中相對(duì)應(yīng)色譜峰的紫外光譜吸收均一致。結(jié)果表明在上述色譜條件下沒(méi)食子酸和槲皮素具有良好的分離效果。

2.2.5 線(xiàn)性關(guān)系考察 取沒(méi)食子酸和槲皮素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，分別置50 mL量瓶中，加80%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成含沒(méi)食子酸234.8 μg·mL-1、槲皮素151.1 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。分別精密吸取兩對(duì)照品溶液適量于同一25 mL量瓶中，制成沒(méi)食子酸濃度為18.786、28.178、37.571、46.964、56.357 μg·mL-1，槲皮素濃度為3.022、9.067、15.110、21.157、27.201 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，準(zhǔn)確吸取5 μL，按上述確定的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分別以對(duì)照品的含量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，得沒(méi)食子酸回歸方程為Y=1 724.7X+2.574 5，r=0.999 9，槲皮素回歸方程為Y=4 256.7X-2.054 8，r=1.000。結(jié)果表明：沒(méi)食子酸和槲皮素分別在0.093 9～0.282 μg、0.015 1～0.136 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

1.沒(méi)食子酸 2.槲皮素 A.對(duì)照品 B.葉 C.莖 D.根 圖1 地稔不同部位中沒(méi)食子酸、槲皮素含量測(cè)定HPLC圖譜

2.2.6 方法學(xué)考察 經(jīng)重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性及加樣回收率試驗(yàn)，結(jié)果均符合要求。

2.3 結(jié)果

按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別測(cè)定含量，并按葉、莖、根折算比例(1∶1∶1)計(jì)算總含量(按干燥品計(jì)算)。結(jié)果見(jiàn)表1、圖2。

采用Friedman M法統(tǒng)計(jì)分析不同采收時(shí)間地稔經(jīng)不同溫度干燥后沒(méi)食子酸及槲皮素的含量，由結(jié)果可知地稔經(jīng)不同溫度干燥處理后兩成分含量有差別(P﹤0.05，α=0.05)，室內(nèi)陰干樣品兩成分含量均高于經(jīng)不同溫度烘干的樣品，均具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩成分含量隨著干燥溫度降低而顯著升高，5月初采收的地稔兩成分總含量最高。

表1 地稔(經(jīng)不同溫度干燥)中沒(méi)食子酸和槲皮素的含量測(cè)定結(jié)果(n=2)

圖2 干燥溫度和采收時(shí)間對(duì)地稔中沒(méi)食子酸、 槲皮素含量的影響曲線(xiàn)圖

3 討論

3.1 地稔最佳干燥溫度

2010年版《中國(guó)藥典》第二增補(bǔ)本中規(guī)定，飲片水分通常不得過(guò)13%，按照此標(biāo)準(zhǔn)要求，以沒(méi)食子酸、槲皮素含量為指標(biāo)，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)條件，考察不同干燥溫度對(duì)地稔中兩活性成分含量的影響。課題研究中發(fā)現(xiàn)，曬干和60 ℃烘干無(wú)顯著差別，而且受天氣影響、難以控制曬干的程度，因而選擇室內(nèi)陰干、低溫烘干(60 ℃)、高溫烘干(80 ℃)三個(gè)因素進(jìn)行研究。由試驗(yàn)結(jié)果可知，陰干的地稔藥材沒(méi)食子酸及槲皮素含量均高于低溫烘干(60 ℃)、高溫烘干(80 ℃)的樣品，且陰干藥材的水分含量均在12%以?xún)?nèi)，符合《中國(guó)藥典》要求。目前，市場(chǎng)上地稔飲片質(zhì)量參差不齊，多為葉黃、數(shù)量少，莖、根數(shù)量多，樣品中沒(méi)食子酸、槲皮素含量不高，而畬民一般在夏季挖取地稔全草，洗凈，除去雜質(zhì)，曬干或鮮用。本研究的結(jié)果對(duì)提高地稔飲片質(zhì)量、提高藥效具有一定的意義。

3.2 地稔最佳采收期

研究發(fā)現(xiàn)，以活性成分沒(méi)食子酸及槲皮素為指標(biāo)，沒(méi)食子酸以陰干、6月中旬采收的地稔含量最高，槲皮素以陰干、5月初采收的地稔含量最高，其兩者總量以5月初為高，故最佳采收期為5月初、花未開(kāi)時(shí)。地稔最佳采收期的確定還應(yīng)考慮產(chǎn)量和其他因素，實(shí)際大規(guī)模生產(chǎn)中地稔最佳采收期還有待進(jìn)一步研究。

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Study on the Influence of the Content of Gallic Acid and Quercetin in Traditional She Medicine-Melastoma dodecandrum by Drying Temperature and Harvest Time

LIU Min，LIU Shuaiying，YU Le，LI Shuifu*

(LishuiInstituteforFoodandDrugControl，Lishui323000，China)

Objective：Through comparing the influence of the contents of gallic acid and quercetin in Traditional She MedicineMelastomadodecandrumby different drying temperature and harvest time，to determine the optimal drying temperature and the best harvest time.MethodsHPLC was applied with the chromatographic condition as follows：the chromatographic column was Agilent-SB C18(4.6 mm×250 mm，5μm)at 30 ℃；methanol-0.4% phosphoric acid as the mobile phrase，gradient elution，flow rate 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was 254 nm.ResultsThe contents of gallic acid and quercetin inM.dodecandrumobviously elevated along with the reduce of dry temperature，and the best of them is dried in shade.The contents of total two components were higher in early May than other months.ConclusionDrying temperature and harvest time appeared to be the key factor to the contents of gallic acid and quercetin inM.dodecandrum.Taking the contents gallic acid and quercetin as the index，the optimal harvest time is in early May，when flowers are not open.

Melastomadodecandrum；Gallic acid；Quercetin；Drying temperature；Harvest time

浙江省常用畬藥質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)與規(guī)范化研究(20100410)

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李水福，主任中藥師，研究方向：中藥/畬藥質(zhì)量控制及分析；Tel：(0578)2155989，E-mail：lsf6789@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.07.010

2014-02-24)