PBEF在體外循環術后肺血管內皮通透性中的機制研究

楊威　董嘯　周建良　龔藝　徐建軍

【摘要】目的：探討PBEF在體外循環術后肺血管內皮通透性增加中的機制，為提出更好的體外循環期間肺保護措施提供依據。方法：建立動物模型并進行分組，A組僅行病毒轉染；B組僅行30min深低溫停循環；C組行病毒轉染后，再行30min深低溫停循環。應用Western blot檢測各組大鼠肺組織。結果：C組的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達明顯高于A、B組和對照組。結論：PBEF通過P38MAPK、ERK等途徑改變內皮細胞和平滑肌細胞中MLC的磷酸化狀態，VE-cadherin和FAK也參與了肺血管內皮通透性增加的過程。

【關鍵詞】前B細胞克隆增強因子；體外循環；肺血管內皮；通透性

【中圖分類號】R654.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）19-0024-02

體外循環（cardiopulmonary bypass， CPB）技術是心臟外科手術的必備條件，但其帶來的術后肺損傷等并發癥一直威脅著行心臟手術的患者，重者發展為呼吸窘迫綜合癥，甚至死亡，嚴重威脅到患者的生存和預后。前B細胞克隆增強因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作為一種具有生長因子、細胞因子和煙酰胺磷酸核糖基轉移酶作用的分子，認為PBEF在急性肺損傷中起到非常重要的作用。并參與調控炎癥、氧化應激、細胞凋亡、內皮血管形成、心臟保護效應和免疫應答等多種作用。但具體機制仍不清楚，因此通過建立大鼠模型分析PBEF的作用機制，結果現報告如下。

1資料和方法

1.1一般資料選擇體重在25～30g之間的成熟雄性昆明種小鼠進行動物實驗（南昌大學心血管病研究所提供），按不同處理方法分4組，每組10只，所有小鼠均在室溫（24±2）℃，濕度（55±5）%環境中飼養，自由飲水、攝食，如在實驗過程中動物死亡，選取新小鼠進行補充。對照組動物在麻醉后建立體外循環，不行體外循環轉流；A組動物行慢病毒AD-PBEFshRNA轉染，在麻醉后建立體外循環，不行體外循環轉流；B組動物在建立體外循環后進行30min深低溫停循環；C組動物行同種病毒轉染后，再進行30min深低溫停循環。Western blot和免疫組化試劑盒購自美國Sigma公司。

1.2方法大鼠處死后取右肺前葉用于肺組織濕干重比的測定，右肺中后葉留待Western blot、ELISA和免疫組化檢測。按試劑盒說明分別進行Western blot和ELISA檢測，Western blot檢測磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達。免疫組化檢測PBEF，鏡檢以出現棕黃色顆粒為陽性反應[1]。

1.3統計學分析應用SPSS13.0統計分析軟件進行處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1Western blot檢測結果各組Western blot檢測結果見表1，C組磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達與A組、B組和對照組的差異顯著，具有統計學意義，P<0.05。見表1。

2.2免疫組化檢測結果A、B、C組在肺泡上皮細胞、肺血管內皮細胞胞核及氣管粘膜上皮細胞均有廣泛的棕黃色顆粒，PBEF高表達。C組PBEF的表達明顯高于A、B組和對照組，表達差異顯著，具有統計學意義，（P<0.05）；C組的PBEF表達與對照組的差異顯著，具有統計學意義，P<0.05。見表2。

【摘要】目的：探討PBEF在體外循環術后肺血管內皮通透性增加中的機制，為提出更好的體外循環期間肺保護措施提供依據。方法：建立動物模型并進行分組，A組僅行病毒轉染；B組僅行30min深低溫停循環；C組行病毒轉染后，再行30min深低溫停循環。應用Western blot檢測各組大鼠肺組織。結果：C組的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達明顯高于A、B組和對照組。結論：PBEF通過P38MAPK、ERK等途徑改變內皮細胞和平滑肌細胞中MLC的磷酸化狀態，VE-cadherin和FAK也參與了肺血管內皮通透性增加的過程。

【關鍵詞】前B細胞克隆增強因子；體外循環；肺血管內皮；通透性

【中圖分類號】R654.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）19-0024-02

體外循環（cardiopulmonary bypass， CPB）技術是心臟外科手術的必備條件，但其帶來的術后肺損傷等并發癥一直威脅著行心臟手術的患者，重者發展為呼吸窘迫綜合癥，甚至死亡，嚴重威脅到患者的生存和預后。前B細胞克隆增強因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作為一種具有生長因子、細胞因子和煙酰胺磷酸核糖基轉移酶作用的分子，認為PBEF在急性肺損傷中起到非常重要的作用。并參與調控炎癥、氧化應激、細胞凋亡、內皮血管形成、心臟保護效應和免疫應答等多種作用。但具體機制仍不清楚，因此通過建立大鼠模型分析PBEF的作用機制，結果現報告如下。

1資料和方法

1.1一般資料選擇體重在25～30g之間的成熟雄性昆明種小鼠進行動物實驗（南昌大學心血管病研究所提供），按不同處理方法分4組，每組10只，所有小鼠均在室溫（24±2）℃，濕度（55±5）%環境中飼養，自由飲水、攝食，如在實驗過程中動物死亡，選取新小鼠進行補充。對照組動物在麻醉后建立體外循環，不行體外循環轉流；A組動物行慢病毒AD-PBEFshRNA轉染，在麻醉后建立體外循環，不行體外循環轉流；B組動物在建立體外循環后進行30min深低溫停循環；C組動物行同種病毒轉染后，再進行30min深低溫停循環。Western blot和免疫組化試劑盒購自美國Sigma公司。

1.2方法大鼠處死后取右肺前葉用于肺組織濕干重比的測定，右肺中后葉留待Western blot、ELISA和免疫組化檢測。按試劑盒說明分別進行Western blot和ELISA檢測，Western blot檢測磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達。免疫組化檢測PBEF，鏡檢以出現棕黃色顆粒為陽性反應[1]。

1.3統計學分析應用SPSS13.0統計分析軟件進行處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1Western blot檢測結果各組Western blot檢測結果見表1，C組磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達與A組、B組和對照組的差異顯著，具有統計學意義，P<0.05。見表1。

2.2免疫組化檢測結果A、B、C組在肺泡上皮細胞、肺血管內皮細胞胞核及氣管粘膜上皮細胞均有廣泛的棕黃色顆粒，PBEF高表達。C組PBEF的表達明顯高于A、B組和對照組，表達差異顯著，具有統計學意義，（P<0.05）；C組的PBEF表達與對照組的差異顯著，具有統計學意義，P<0.05。見表2。

【摘要】目的：探討PBEF在體外循環術后肺血管內皮通透性增加中的機制，為提出更好的體外循環期間肺保護措施提供依據。方法：建立動物模型并進行分組，A組僅行病毒轉染；B組僅行30min深低溫停循環；C組行病毒轉染后，再行30min深低溫停循環。應用Western blot檢測各組大鼠肺組織。結果：C組的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達明顯高于A、B組和對照組。結論：PBEF通過P38MAPK、ERK等途徑改變內皮細胞和平滑肌細胞中MLC的磷酸化狀態，VE-cadherin和FAK也參與了肺血管內皮通透性增加的過程。

【關鍵詞】前B細胞克隆增強因子；體外循環；肺血管內皮；通透性

【中圖分類號】R654.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）19-0024-02

體外循環（cardiopulmonary bypass， CPB）技術是心臟外科手術的必備條件，但其帶來的術后肺損傷等并發癥一直威脅著行心臟手術的患者，重者發展為呼吸窘迫綜合癥，甚至死亡，嚴重威脅到患者的生存和預后。前B細胞克隆增強因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作為一種具有生長因子、細胞因子和煙酰胺磷酸核糖基轉移酶作用的分子，認為PBEF在急性肺損傷中起到非常重要的作用。并參與調控炎癥、氧化應激、細胞凋亡、內皮血管形成、心臟保護效應和免疫應答等多種作用。但具體機制仍不清楚，因此通過建立大鼠模型分析PBEF的作用機制，結果現報告如下。

1資料和方法

1.1一般資料選擇體重在25～30g之間的成熟雄性昆明種小鼠進行動物實驗（南昌大學心血管病研究所提供），按不同處理方法分4組，每組10只，所有小鼠均在室溫（24±2）℃，濕度（55±5）%環境中飼養，自由飲水、攝食，如在實驗過程中動物死亡，選取新小鼠進行補充。對照組動物在麻醉后建立體外循環，不行體外循環轉流；A組動物行慢病毒AD-PBEFshRNA轉染，在麻醉后建立體外循環，不行體外循環轉流；B組動物在建立體外循環后進行30min深低溫停循環；C組動物行同種病毒轉染后，再進行30min深低溫停循環。Western blot和免疫組化試劑盒購自美國Sigma公司。

1.2方法大鼠處死后取右肺前葉用于肺組織濕干重比的測定，右肺中后葉留待Western blot、ELISA和免疫組化檢測。按試劑盒說明分別進行Western blot和ELISA檢測，Western blot檢測磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達。免疫組化檢測PBEF，鏡檢以出現棕黃色顆粒為陽性反應[1]。

1.3統計學分析應用SPSS13.0統計分析軟件進行處理，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1Western blot檢測結果各組Western blot檢測結果見表1，C組磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表達與A組、B組和對照組的差異顯著，具有統計學意義，P<0.05。見表1。

2.2免疫組化檢測結果A、B、C組在肺泡上皮細胞、肺血管內皮細胞胞核及氣管粘膜上皮細胞均有廣泛的棕黃色顆粒，PBEF高表達。C組PBEF的表達明顯高于A、B組和對照組，表達差異顯著，具有統計學意義，（P<0.05）；C組的PBEF表達與對照組的差異顯著，具有統計學意義，P<0.05。見表2。