GC法測定丁香羅勒油中丁香酚的含量

曾譯文

摘要：目的 建立用GC法測定丁香羅勒油中丁香酚的含量。方法 OV-1彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30m×0.32mm×0.25μm）為固定相，F(xiàn)ID檢測器，進(jìn)樣口溫度230℃， 檢測器溫度250℃， 采用程序升溫，柱溫100℃， 保持1min，然后以15℃/min的速率升至220℃保持8min； 載氣為氮?dú)猓哉送闉閮?nèi)標(biāo)，按內(nèi)標(biāo)法計算丁香酚含量。結(jié)果 丁香酚進(jìn)樣量在0.5～4.5 mg /ml 范圍內(nèi)其峰面積與進(jìn)樣量呈良好線性關(guān)系。y=0.1311x-0.054，（r=0.9994）；加樣回收率為100.96%，RSD為0.74%（n=9）。結(jié)論 該方法靈敏、簡便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為控制丁香羅勒油質(zhì)量的方法。

關(guān)鍵詞：GC法；丁香羅勒油；丁香酚

丁香羅勒油為唇形科植物丁香羅勒Ocimum gratissimum L. 的全草經(jīng)水蒸氣蒸餾提取的揮發(fā)油[1]。

參照《中國藥典》2010年版一部丁香羅勒油標(biāo)準(zhǔn)，考慮到生產(chǎn)和檢驗實(shí)際，我們在方法中使用了毛細(xì)管柱，測定法為內(nèi)標(biāo)法。丁香羅勒油中成分復(fù)雜，成分有三十多種以上[2]，使用了毛細(xì)管柱相對填充柱更能有效分離丁香酚，更具專屬性，有效縮短了檢驗時間。

經(jīng)實(shí)驗證明該毛細(xì)管柱內(nèi)標(biāo)法的峰分離度、理論塔板數(shù)都符合《中國藥典》2010年版要求，且優(yōu)于（藥典）填充柱法，本毛細(xì)管柱內(nèi)標(biāo)法的準(zhǔn)確度、重復(fù)性、精密度、線性均符合要求；兩方法相比：采用毛細(xì)管柱方法提高了準(zhǔn)確度和工作效率，分析時間短、專屬性強(qiáng)、色譜峰形良好。

1 儀器與材料

Agilent GC1790F 氣相色譜儀，氫離子火焰檢測器（FID）；sartorius BP211D電子天平，丁香酚對照品批號：110725-200610，購于中國藥品生物制品檢定所；正己烷為分析純（廣州市化學(xué)試劑廠），正十八烷內(nèi)標(biāo)物[東京化成工業(yè)株式會社（TCI）]，丁香羅勒油（佛山市南海中南藥化廠提供，批號：060701、060702、060703）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

氣相色譜條件：30m×0.32mm×0.25μm OV-1石英毛細(xì)管柱；程序升溫：起始溫度100℃，保持1min，15℃/min升溫至220℃，保持8min，F(xiàn)ID檢測器溫度250℃，進(jìn)樣器溫度230℃。理論板數(shù)按丁香酚峰計算應(yīng)不低于30000（見圖1）。

圖1 丁香羅勒油空白溶劑、系統(tǒng)適用性、對照品GC圖譜、供試品GC圖譜

A.空白溶劑色譜圖； B.系統(tǒng)適用性色譜圖；

C.丁香酚對照品和內(nèi)標(biāo)正十八烷色譜圖； D.丁香羅勒油供試品色譜圖

2.2 內(nèi)標(biāo)液的制備

取正十八烷適量，精密稱定，加正己烷溶解并稀釋成每1ml含25mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 對照品溶液的制備

取丁香酚對照品約50mg，精密稱定，置10ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，取1μl注入氣相色譜儀。

2.4 供試品溶液的制備

取供試品約60mg，精密稱定，置10ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml，用正己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取1μl注入氣相色譜儀，測定，即得。

2.5 線性關(guān)系考察

分別取丁香酚5.00mg、15.00mg、25.0mg、35.0mg、45.0mg于10ml量瓶，并按本標(biāo)準(zhǔn)加入2ml內(nèi)標(biāo)液，用正己烷定容至10ml作供試品，取1μl注入氣相色譜儀，計算丁香酚與正十八烷峰面積比值。以丁香酚濃度（C）為橫坐標(biāo)，丁香酚與正十八烷峰面積比值（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，結(jié)果得回歸方程：y=0.1311x-0.054（r=0.9994）。結(jié)果表明，丁香酚進(jìn)樣量在0.5～4.5 mg /ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 重復(fù)性試驗

取同批樣品6份（批號060701），按供試品溶液制備方法處理，在上述色譜條件下測定含量，測得丁香酚的平均值為86.73%，RSD=0.14%，結(jié)果表明本方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取批號060701丁香羅勒油供試品溶液在0、2、4、6、8、10小時進(jìn)樣，測得丁香酚與正十八烷峰面積比值，RSD為0.89%（n=6），結(jié)果表明樣品溶液在10小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗

精密稱取批號060701丁香羅勒油（本品已知丁香酚含量：86.7%）分別30.0mg于9只10ml容量瓶中，分別加入19.0mg、19.0mg、19.0mg、24.0mg、24.0mg、24.0mg、29.0mg、29.0mg、29.0mg丁香酚對照品，分別加入2ml內(nèi)標(biāo)溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果見表1。平均加樣回收率為100.96%，RSD為0.74%。

表1 回收率實(shí)驗測定結(jié)果（n=9）

取本品量mg 本品含丁香酚mg 加入丁香酚mg 實(shí)際測得總量mg 回收率% 平均回收率% RSD

%

1 29.78 25.82 18.87 44.68 99.95 100.96 0.74

2 29.67 25.72 19.15 44.94 100.37

3 29.89 25.91 19.06 45.14 100.89

4 30.43 26.38 24.43 50.81 100.00

5 30.68 26.60 24.30 51.24 101.40

6 30.78 26.69 24.28 51.36 101.61

7 29.62 25.68 28.99 54.91 100.83

8 29.58 25.65 29.38 55.60 101.94

9 29.70 25.75 29.03 55.26 101.65

2.9 樣品測定

分別取3個批號的丁香羅勒油適量，精密稱定制備供試品溶液，依法測定丁香酚含量，結(jié)果見表2。

表2 丁香油中丁香酚的含量

批號 含量（%）

060701 88.0

060702 86.8

060703 86.2

3 討論

3.1 分析方法的選擇

經(jīng)查閱文獻(xiàn)，目前測定丁香羅勒油中丁香酚含量的方法主要以氣相色譜法為主，氣相色譜法又可分內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法，固定相有采用PEG-20M [3] [4]、SE-30[1] [5]、FFAP[6]三種毛細(xì)管色譜柱，《中國藥典》2010年版丁香羅勒油方法為氣相色譜填充柱[1] [3] [4]法進(jìn)行分析。本實(shí)驗結(jié)合參考文獻(xiàn)及實(shí)際操作，選擇毛細(xì)管色譜柱的內(nèi)標(biāo)法測定丁香羅勒油中丁香酚含量，并進(jìn)行研究和考察。結(jié)果表明：選擇固定液為OV-1的毛細(xì)管柱色譜條件下，分析時間短，分離度好，專屬性強(qiáng)、色譜峰形良好。

3.2 內(nèi)標(biāo)物的選擇

選擇內(nèi)標(biāo)物的原則優(yōu)先選擇與被測成份的極性和沸點(diǎn)接近的物質(zhì)，從而使內(nèi)標(biāo)峰的保留時間與被測成份的保留時間相近的，但在實(shí)際檢測中發(fā)現(xiàn)，與被測成份的保留時間相近的位置已有很多成份，內(nèi)標(biāo)物不好選擇，據(jù)文獻(xiàn)資料報道，丁香羅勒油中含水楊酸甲酯[2]，但《中國藥典》2010年版中氣相色譜法中卻用水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)物，因此可能會影響含量測定的準(zhǔn)確性，本方法將水楊酸甲酯改為正十八烷作為內(nèi)標(biāo)物。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M]，一部.北京.中國醫(yī)藥科技出版社，2010：365.

[2] 李玲玲， 賴東美， 葉飛云.丁香羅勒油的氣相色譜與氣質(zhì)連用分析[J].福建分析測試研究報告，2000，9（2）：1222-1227.

[3] 王海英.氣相色譜法測定丁香油中丁香酚含量[J]. 哈爾濱醫(yī)藥.2009，29（4）：20-21.

[4] 李玲玲， 賴東美， 葉飛云.丁香羅勒油的氣相色譜分析[J].中國中藥雜志，2000，25（4）：229-230.

[5] 張春成，高海，沈小紅，等.丁香羅勒油中丁香酚的GC法測定[J].西北藥學(xué)雜志.1994，14（2）：56-57.

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