大黃魚中硫磺素T殘留的HPLC分析

沙鷗等

摘要：建立了反相高效液相色譜法測定染色大黃魚（Pseudosciaena crocea）中非法添加色素硫磺素T含量的方法。樣品經超聲水溶液提取，采用Eclipse XDB-C18色譜柱，以甲醇-0.05%（V/V）甲酸為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為410 nm，外標法測定硫磺素T。結果表明，硫磺素T在0.40～65.0 mg/L范圍內線性關系良好（R2=0.9 994），檢出限為0.02 mg/L（S/N=3），3個濃度水平下的加標回收率為91.0%～98.1%，相對標準偏差（n=6）為1.21%～2.26%。

關鍵詞：大黃魚（Pseudosciaena crocea）；硫磺素T；高效液相色譜法；測定

中圖分類號：O652.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）16-3910-02

Abstract： A HPLC method was developed for detecting thioflavin T in Pseudosciaena crocea. Sample was added in water and treated with ultrasonic extraction. The thioflavin T was analyzed with Eclipse XDB-C18 column and detected at 410 nm， with a mobile phase of methanol-0.05%（V/V） formic acid solution at a flow rate of 1.0 mL/min. The linearity was obtained in the range of 0.40～65.0 mg/L （R2=0.9 994）. The determination limit （S/N=3） was 0.02 mg/L. The recovery of three different concentration were in the range of 91.0%～98.6%. RSD （n=6） was in the range of 1.12%～2.26%.

Key words： Pseudosciaena crocea； thioflavin T； HPLC； determination

黃魚有大黃魚（Pseudosciaena crocea）與小黃魚（Psendosciaena polyactis）之分，又名黃花魚。黃魚中含有豐富的微量元素、蛋白質和維生素，深受消費者青睞。由于黃魚的保鮮期短，其產量遠遠低于需求量，因此黃魚價格一直居高不下，尤其是大黃魚，價格都在幾十元1 kg，這導致“黃魚造假”情況時有發生。目前市售黃魚造假主要以染色黃魚為主，如染色白姑魚和三牙魚等，也有不法商販將品質較差的黃魚染色后冒充野生黃魚，以獲得高額利潤。據市場調研及報紙報道，目前向“偽黃魚”或黃魚中添加的染料主要為黃色化工染料或人工黃色合成色素[1-6]。

硫磺素T又稱堿性黃1，為芳香胺類堿性工業染料[7]，常用于生化研究中生物組織學染色，該類染料水溶性好，水溶液呈黃色，對生物染色快且效果好，但嚴禁將其作為食品添加劑使用，部分商販以硫磺素T對黃魚染色。目前，硫磺素T的高效液相色譜檢測分析方法少見報道。市售“偽黃魚”中非法添加的硫磺素T，作為一個新型潛在食品安全風險點，建立和完善相應的分析方法，可為該類產品質量控制、食品安全執法管理提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

市購大黃魚；硫磺素T（純度：95.8%），購于國藥集團化學有限公司。

1.2 儀器與試劑

1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫），配紫外-可見可變波長檢測器，色譜柱：Eclipse XDB-C18色譜柱（4.6×150 mm，5 μm）；UV-2501紫外可見分光光度計（日本島津）；MiliQ Biocel超純水機（美國默克密理博）。

甲醇（色譜純）；其他試劑均為分析純，去離子水；所用玻璃器皿均在使用前用稀HNO3溶液浸泡24 h，并用去離子水洗滌3次以上，晾干。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理 由于硫磺素T為水溶性色素，因此直接向染色黃魚中加入蒸餾水，進行超聲提取，30 ℃提取10 min，再加甲醇稀釋，經醇沉淀蛋白，提取液過 0.45 μm 微孔濾膜過濾，待測。

1.3.2 色譜條件 色譜柱為Eclipse XDB-C18；流動相A為0.05%（V/V）甲酸溶液，流動相B為甲醇，梯度洗脫，洗脫條件為：0～4 min流動相A由70%降至50%，4～6 min流動相A 50%保持2 min，6～10 min 流動相A由50%升至70%，柱溫30 ℃；紫外檢測波長410 nm；進樣量20 μL；流速1.0 mL/min。

2 結果與分析

2.1 檢測波長

在200～600 nm測定硫磺素T的吸光度，結果如圖2所示。硫磺素T的最大吸收波長為410 nm處，在該條件下，干擾較小，且可獲得較高的靈敏度，故選擇410 nm作為硫磺素T的檢測波長。

2.2 樣品分析

在上述色譜條件下，標準溶液的保留時間為6.1 min，出峰時間較快，峰形對稱（圖3），樣品中硫磺素T的拖尾因子符合規定，分離度大于1.5。

取0.4～45.0 mg/L范圍內的硫磺素T標準溶液，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積對溶液質量濃度進行線性回歸，得回歸方程y=54.29x-153.7，在0.4～45.0 mg/L范圍內呈良好線性關系，R2= 0.999 4，檢出限為0.02 mg/L（S/N=3）。endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黃魚浸提液，定量添加硫磺素T標準溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每個濃度測定6個平行樣品，測定結果見表1。表1結果表明，硫磺素T在3個添加水平下的加標回收率在91.0%～98.4%之間，RSD在1.21%～2.26%之間，滿足定量分析要求。

2.4 重復性試驗

重復性是方法可靠性評價指標之一，是指在重復性條件下，測定的試驗結果之間的符合程度。取6份硫磺素T染色的黃魚1號樣品浸提液，平行6次，測定結果分別為1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值為1.66 mg/L，RSD為3.73%。

2.5 樣品分析

按上述分析方法，對市場上購買的3個批次染色黃魚樣品進行高效液相色譜分析，通過標準曲線計算黃魚浸泡液中硫磺素T的含量分別為1.66，2.45與2.17 mg/L。

3 結論

本研究建立了染色黃魚浸泡液中硫磺素T的高效液相色譜定性定量方法，其色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱；以0.05%甲酸溶液與甲醇為流動性，梯度洗脫；柱溫30 ℃；紫外檢測波長410 nm；進樣量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法對樣品的前處理只需超聲提取，簡單快速，出峰時間短，準確度，精密度符合要求，可用于染色黃魚中硫磺素T的測定。

參考文獻：

[1] 張 倩. 怎么鑒別黃魚染沒染色[J]. 吉林農業（下半月）2012 （2）：29.

[2] 寧德市質監局. 寧德市質監局打擊“對大黃魚注水，染色”行為[J]. 福建質量技術監督，2009（3）： 33.

[3] 李永剛， 劉 瀟， 陳 明， 等. 液質聯用法檢測黃魚中的堿性橙、堿性嫩黃和酸性橙Ⅱ[J]. 公共衛生與預防醫學，2013，24（2）： 97-98.

[4] 郝鳳桐. 魚“被美容”[J]. 飲食科學，2011（5）：11.

[5] GUI WJ， XU Y， SHOU L F， et al. Liquid chromatography-tandem mass spectrometry for the determination of chrysoidine in yellow n tuna[J]. Food Chemistry，2010，122（4）：1230-1234.

[6] 薛仔改. 淺談食用色素的安全問題[J].現代經濟信息，2009（21）： 355，336.

[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮熱·依布拉音，吐爾洪·買買提.食品中堿性黃Ⅱ的提取和檢測方法[J]. 安徽農業科學，2012，40（32）： 15908-15910.

（責任編輯 周有祥）endprint

2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黃魚浸提液，定量添加硫磺素T標準溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每個濃度測定6個平行樣品，測定結果見表1。表1結果表明，硫磺素T在3個添加水平下的加標回收率在91.0%～98.4%之間，RSD在1.21%～2.26%之間，滿足定量分析要求。

2.4 重復性試驗

重復性是方法可靠性評價指標之一，是指在重復性條件下，測定的試驗結果之間的符合程度。取6份硫磺素T染色的黃魚1號樣品浸提液，平行6次，測定結果分別為1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值為1.66 mg/L，RSD為3.73%。

2.5 樣品分析

按上述分析方法，對市場上購買的3個批次染色黃魚樣品進行高效液相色譜分析，通過標準曲線計算黃魚浸泡液中硫磺素T的含量分別為1.66，2.45與2.17 mg/L。

3 結論

本研究建立了染色黃魚浸泡液中硫磺素T的高效液相色譜定性定量方法，其色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱；以0.05%甲酸溶液與甲醇為流動性，梯度洗脫；柱溫30 ℃；紫外檢測波長410 nm；進樣量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法對樣品的前處理只需超聲提取，簡單快速，出峰時間短，準確度，精密度符合要求，可用于染色黃魚中硫磺素T的測定。

參考文獻：

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[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮熱·依布拉音，吐爾洪·買買提.食品中堿性黃Ⅱ的提取和檢測方法[J]. 安徽農業科學，2012，40（32）： 15908-15910.

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2.3 回收率分析

取不含硫磺素T染色黃魚浸提液，定量添加硫磺素T標準溶液至1.0，5.0，10.0 mg/L，每個濃度測定6個平行樣品，測定結果見表1。表1結果表明，硫磺素T在3個添加水平下的加標回收率在91.0%～98.4%之間，RSD在1.21%～2.26%之間，滿足定量分析要求。

2.4 重復性試驗

重復性是方法可靠性評價指標之一，是指在重復性條件下，測定的試驗結果之間的符合程度。取6份硫磺素T染色的黃魚1號樣品浸提液，平行6次，測定結果分別為1.68，1.64，1.56，1.72，1.73，1.65 mg/L，平均值為1.66 mg/L，RSD為3.73%。

2.5 樣品分析

按上述分析方法，對市場上購買的3個批次染色黃魚樣品進行高效液相色譜分析，通過標準曲線計算黃魚浸泡液中硫磺素T的含量分別為1.66，2.45與2.17 mg/L。

3 結論

本研究建立了染色黃魚浸泡液中硫磺素T的高效液相色譜定性定量方法，其色譜條件為：Eclipse XDB-C18色譜柱；以0.05%甲酸溶液與甲醇為流動性，梯度洗脫；柱溫30 ℃；紫外檢測波長410 nm；進樣量20 μL；流速1.0 mL/min。本方法對樣品的前處理只需超聲提取，簡單快速，出峰時間短，準確度，精密度符合要求，可用于染色黃魚中硫磺素T的測定。

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[7] 尤努斯江·吐拉洪， 木妮熱·依布拉音，吐爾洪·買買提.食品中堿性黃Ⅱ的提取和檢測方法[J]. 安徽農業科學，2012，40（32）： 15908-15910.

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