上海市成人靜脈血淋巴細胞絕對值參考范圍調查與探討

劉曼嬌，岳 波，唐大海，黃國其

淋巴細胞是構成機體免疫系統(tǒng)的主要細胞群，在機體免疫應答中起重要作用，淋巴細胞的數(shù)量和功能的變化與超敏反應、免疫缺陷病、自身免疫性疾病、持續(xù)性病毒感染、腫瘤等關系密切，因此研究淋巴細胞絕對值與相關疾病的關系具有重要意義。淋巴細胞絕對值是血常規(guī)中的一項參數(shù)，很多醫(yī)院的正常參考范圍都是直接引用《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版的標準，這樣顯然欠妥。筆者認為，該參考范圍應用前需加以驗證，有條件的臨床實驗室應根據(jù)自身不同檢測系統(tǒng)建立各自人群特征的參考區(qū)間［1]。

1 對象與方法

1.1 對象 選取2012年3－11月來我院體檢的上海地區(qū)各企事業(yè)單位職工(包括部隊、傳媒、醫(yī)療、工廠、公安系統(tǒng)等)作為研究對象，年齡18～60歲，所有選取對象經(jīng)我院各項檢查(肝功能、腎功能、血脂、血糖、B超、胸透、心電圖等)排除異常者。檢驗結果以均數(shù)±3倍標準差±3s)標準進行剔除，統(tǒng)計有效人數(shù)共3 081人，其中男1 778人，女1303人;按年齡分組，18～39歲為青年組，40～60歲為中年組，其中男青年組988人，男中年組790人，女青年組732人，女中年組571人。

1.2 標本采集 檢測對象空腹，坐位，由檢驗科人員使用真空管采血法采集。

1.3 儀器與試劑 日本Sysmex公司XT-1800i五分類全自動血液分析儀和配套原裝試劑。

1.4 檢測項目 白細胞計數(shù)(WBC)、淋巴細胞百分比(LY%)、淋巴細胞絕對值等24個項目。淋巴細胞絕對值采用激光流式細胞檢測結合核酸熒光染色技術。

1.5 檢測方法 Sysmex XT-1800i五分類全自動血液分析儀每半年由廠家進行1次校準，并進行校準驗證。在校準有效期內參加上海市臨床檢驗中心的室間質量評價，結果均合格，確保檢測數(shù)據(jù)的準確度。每日標本檢測前采用高、低2個濃度水平質控品進行室內質量控制，確保結果在控后才開始檢測。

1.6 統(tǒng)計學處理 使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包對數(shù)據(jù)進行正態(tài)性檢驗，各組數(shù)據(jù)均符合正態(tài)性分布，統(tǒng)計各組均值)和標準差(s)，使用參數(shù)法x±1.96s確定95%可信區(qū)間(CI，即參考范圍)，按照NCCLS指南，各組間比較采用Z檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 按性別分組 男女2組均符合正態(tài)分布，男性淋巴細胞絕對值分布見圖1。男性為(2.18±0.59)×109/L，女性為(2.06±0.57)×109/L。采用Z 檢驗進行組間比較，男性高于女性，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。由±1.96s分別得出 95%CI:男性為(1.02～3.35)×109/L，女性為(0.94 ～3.18)×109/L。

圖1 男性淋巴細胞分布直方圖

2.2 按年齡分組 各年齡組均符合正態(tài)分布，見表1。采用Z檢驗分別進行同性別組間比較，男青年組略高于男中年組，女青年組略高于女中年組，但差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

表1 上海市不同性別不同年齡組間淋巴細胞絕對值比較

2.3 95%CI 將本次調查的95%CI與其他文獻和《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第3版比較，見表2。由于淋巴細胞絕對值符合正態(tài)分布，所以可以由x±1.96s算出95%CI，反過來，可以由95%CI推出均值和標準差。先計算出每個參考范圍的均值和標準差，然后采用Z檢驗分別與本結果進行比較。除了南充地區(qū)女性和本地區(qū)的差異無統(tǒng)計學意義外，其他地區(qū)和本地區(qū)的差異都有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。由于操作規(guī)程中的參考范圍來源的樣本量未知，無法進行Z檢驗，故將本次調查的均值作為樣本均數(shù)，操作規(guī)程的均值作為總體均數(shù)，采用t檢驗進行比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

表2 上海市成人淋巴細胞絕對值調查結果與其他文獻比較(×109/L)

2.4 參考范圍的驗證 按照NCCLS指南，驗證參考范圍需要20例以上正常人群標本，假如受試者中不超過10%的觀測值落在起始報告的界限之外，試劑生產(chǎn)廠商或其他實驗室報告的95%參考限可以有效地應用于接收實驗室。將本次調查新建立的淋巴細胞絕對值參考范圍為參考范圍Ⅰ，操作規(guī)程中的參考范圍為參考范圍Ⅱ，用本次調查的3 081例樣本分別對2個參考范圍進行驗證，分別統(tǒng)計落在2個參考范圍之外的百分比，見表3。結果顯示兩者都可以有效地應用于本實驗室。

2.5 參考范圍的應用 分別用2個參考范圍對我院2012年5－9月住院患者的淋巴細胞絕對值結果進行判讀統(tǒng)計，共13 675例，其中男9 107例，女4 568例，結果超出參考范圍的視為陽性，分別統(tǒng)計2個參考范圍各自判讀的陽性率，見表4。參考范圍Ⅰ判讀的男性陽性率約為參考范圍Ⅱ的1.52倍，參考范圍Ⅰ判讀的女性陽性率約為參考范圍Ⅱ的1.52倍。

表3 2個參考范圍的驗證后差異比較

表4 2個參考范圍判讀13 675例標本的陽性率比較

3 討論

本次調查顯示，18～60歲之間的男性淋巴細胞絕對值高于女性，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。同性別之間，青年組淋巴細胞絕對值略高于中年組，這種現(xiàn)象和國外文獻報道的淋巴細胞絕對值有隨年齡的增高而遞減的趨勢相吻合［7]。本次調查中同性別2個年齡組間的差異無統(tǒng)計學意義，可能是由于在18～60歲這個年齡段中，淋巴細胞絕對值受年齡的影響比較小，因此可以把青年組和中年組合并作為1個年齡組來設立參考范圍。

由表2可以看出，上海地區(qū)淋巴細胞絕對值參考范圍與大部分地區(qū)存在差異。因此，不同地區(qū)、不同實驗室應該建立各自檢測系統(tǒng)的參考區(qū)間［8]。國際臨床化學與檢驗醫(yī)學聯(lián)合會(IFCC)建議，每個有條件的臨床實驗室應根據(jù)不同檢測系統(tǒng)建立各自人群特征的參考區(qū)間［9]。本次調查初步建立了本實驗室上海地區(qū)成人靜脈血淋巴細胞絕對值的參考范圍。

美國CLIA-88要求實驗室驗證廠家的參考區(qū)間是否適合實驗室患者的群體［6]。觀察2個參考范圍的驗證結果發(fā)現(xiàn)，兩者都符合落在參考范圍之外的觀測值不超過10%的條件，即2個參考范圍都可以有效地應用于本實驗室，2個參考范圍都可以在一定程度上減少假陽性。由表4可以看出，用參考范圍Ⅰ判讀淋巴細胞絕對值結果得到的陽性率約為參考范圍Ⅱ的1.52倍，即參考范圍Ⅰ比參考范圍Ⅱ多檢出了52%存在淋巴細胞絕對值異常的患者。但2個參考范圍都符合NCCLS指南，都可以有效減少假陽性，但參考范圍Ⅰ比參考范圍Ⅱ提高了檢測淋巴細胞絕對值異常的靈敏度，所以與操作規(guī)程比較，本次調查得到的淋巴細胞絕對值參考范圍更適合本實驗室。

本次調查新建立的參考范圍提高了檢測淋巴細胞絕對值異常的靈敏度，可以減少一部分患者的漏診和誤診。某些淋巴系的血液病(比如漿細胞白血病、慢淋等)在早期出現(xiàn)外周血淋巴細胞絕對值的輕微升高時，用操作規(guī)程中的參考范圍判讀可能就是陰性，未能引起臨床重視，導致延遲診斷或漏診;而用新的淋巴細胞絕對值參考范圍判讀可能就是陽性，能夠及時提醒臨床進行相關方面的排查。在某些病毒感染的病例中，淋巴細胞絕對值升高不明顯，用新參考范圍判讀是陽性，可以及時發(fā)現(xiàn)病毒感染，而用操作規(guī)程中的參考范圍判斷可能就是陰性，此時患者如果再伴隨疼痛、緊張等因素導致WBC生理性升高，那么臨床就很可能誤診為細菌感染。所以本次建立的新的淋巴細胞絕對值參考范圍或許可以減少一些細菌感染的誤診，降低抗生素的誤用。

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