HPLC法測(cè)定注射用頭孢唑林鈉中頭孢唑林的含量

鄭風(fēng)敏

河南省鶴壁市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 鶴壁 458030

頭孢唑林為第一代頭孢菌素，抗菌譜廣，適用于治療敏感細(xì)菌所致的呼吸道感染，尿路感染，皮膚軟組織感染，骨和關(guān)節(jié)感染，敗血癥、感染性心內(nèi)膜炎等疾病［1］。本文采用HPLC法測(cè)定頭孢唑林的含量，準(zhǔn)確可靠，簡(jiǎn)便;同時(shí)，通過HPLC色譜圖可以直觀地判斷注射用頭孢唑林鈉的質(zhì)量控制水平，為臨床用藥提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀 (Waters 2695 HPLC PumP;Waters 2998二級(jí)管陣列檢測(cè)器;Epower化學(xué)工作站);賽多利斯CPA225D電子分析天平。

1.2 試藥 頭孢唑啉對(duì)照品 (批號(hào):0421-9603，中國食品藥品檢定研究院)。注射用頭孢唑林鈉 (批號(hào):1211A001，中諾藥業(yè) (石家莊)有限公司;批號(hào):02530303，悅康藥業(yè)集團(tuán)有限公司)。水為純化水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件［2］色譜柱:Waters Sunfire C18柱 (4.6 ×150mm，5μm);流動(dòng)相為乙腈-磷酸氫二鈉、枸櫞酸溶液(取無水磷酸氫二鈉1.33g與枸櫞酸1.12g，加水溶解并稀釋制成1000ml)(13:87);流速為1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)254nm;柱溫25℃;進(jìn)樣量10μl。

2.2 溶液的制備［2］

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取頭孢唑啉對(duì)照品適量，加磷酸鹽緩沖液 (pH 7.0)5ml，再用流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取供試品適量，加流動(dòng)相溶解并定量稀釋制成每1ml中含0.1mg的供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取對(duì)照品21mg，置50ml容量瓶中，加磷酸鹽緩沖液 (pH 7.0)10ml，再用流動(dòng)相定量稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取 1.0、2.0、5.0、3.0、5.0ml，分別置10、10、20、10、10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件下準(zhǔn)確進(jìn)樣10μl測(cè)定，以各溶液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，其回歸方程為 Y=14902X+5104.1(r=0.9999)，頭孢唑啉在40～200μg/ml濃度范圍有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，準(zhǔn)確進(jìn)樣10μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，計(jì)算頭孢唑啉峰面積的RSD為0.2%。結(jié)果表明:本實(shí)驗(yàn)進(jìn)樣精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，照含量測(cè)定方法測(cè)定，依法平行測(cè)定6次，以峰面積計(jì)算，RSD為0.5%。表明該方法重現(xiàn)性好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取同一供試品溶液，于0、1、3、5、7、9h分別準(zhǔn)確進(jìn)樣10μl，在上述色譜條件下，記錄色譜圖，計(jì)算頭孢唑林峰面積的RSD為0.7%。結(jié)果表明，注射用頭孢唑林鈉在9h內(nèi)比較穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密稱取供試品15mg，置200ml量瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，配成低、中、高三種不同濃度的溶液，按色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，測(cè)得供試品在三個(gè)不同濃度的回收率平均值分別為103.5%、99.7%、102.1%。

2.8 供試品的測(cè)定 分別取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和“2.2.2”項(xiàng)下的供試品溶液，各準(zhǔn)確進(jìn)樣10μl，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果見表1。

表1 供試品測(cè)定結(jié)果

3 討論

磷酸氫二鈉作為流動(dòng)相有很好的緩沖能力，并且頭孢唑林鈉在磷酸氫二鈉溶液中溶解性能很好，但是頭孢唑林鈉的酸度值為5.5左右，磷酸氫二鈉作為主要的緩沖液其溶液顯堿性，所以要加入一定量的枸櫞酸來調(diào)節(jié)其pH值，這樣使其緩沖能力更強(qiáng)，在測(cè)定過程中頭孢唑林鈉可以達(dá)到更好的分離純化效果，使得測(cè)定結(jié)果更準(zhǔn)確，故選擇磷酸氫二鈉、枸櫞酸溶液同時(shí)作為頭孢唑林鈉的流動(dòng)相。

本實(shí)驗(yàn)建立的HPLC法測(cè)定頭孢唑林的含量，方法準(zhǔn)確，快速，重現(xiàn)性良好。從供試品的含量測(cè)定結(jié)果可以看出，此方法可以準(zhǔn)確的測(cè)定注射用頭孢唑林鈉中頭孢唑林的含量，從而為實(shí)際工作中對(duì)藥品質(zhì)量的控制提供科學(xué)的依據(jù)。

［1］劉俊田.藥理學(xué)［M］.鄭州:鄭州大學(xué)出版社，2004:382-383.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典 (二部) ［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:206-207.