無花果葉中補骨脂素含量測定

鄭 巖 王紅霞 陳隨清

河南中醫學院，河南 鄭州 450008

無花果為桑科榕屬植物無花果 (Ficus carica L.)，為藥食兼優的植物。原產地中海及西南亞，現我國各地均有栽培[1]，主要分布于新疆、江蘇、浙江、福建、山東、上海、四川、陜西、甘肅、江西、廣東、河南等省，有悠久的栽培歷史，是開發應用較廣的經濟植物。其果實營養價值高，富含糖、蛋白質、氨基酸、維生素和礦物元素，除食果外，其葉、根又俱含藥用成份，為藥食同源果品樹種[2]。我國應用其葉、根入藥，治療腸炎，腹瀉;外用治癰腫。現代醫學研究證明，無花果葉中含有多種化學成分，包括香豆素、黃酮、揮發油、多糖、微量元素、氨基酸、維生素等[3]，其藥理作用包括抗菌、抗病毒、抗腫瘤、降血脂、降血糖、治療白癜風、痔瘡等，藥效顯著[4]。無花果葉中所含的補骨脂素經體外抑瘤率活性測試，表明對表皮癌、膀朧癌、肝癌均有顯著療效，并有較好的抗菌活性和降低血糖、血脂的作用。

為進一步開發利用無花果葉，采用高效液相色譜法對無花果葉中補骨脂素的含量進行測定，并對不同提取方法進行了初步探索，為建立無花果葉中有效成分的含量測定方法提供了科學依據。

1 儀器與試劑

1.1 實驗儀器 高效液相色譜儀 (LC-20AT，日本島津公司)，紫外檢測器 (SPD-20A，日本島津公司)，色譜工作站 (CBM-102，日本島津公司);無油真空泵 (HP-01，天津市恒奧科技發展有限公司);溶劑過濾器 (HL，天津市恒奧科技發展有限公司);數控超聲波清洗器 (KQ-500DV，昆山市超聲儀器有限公司);十萬分之一天平(梅特勒，MettlerToledoAB 135-S);分析天平(BS2242S，北京賽多利斯儀器系統有限公司);自動雙重純水蒸餾器 (SZ-93，上海亞榮生化儀器廠);電子天平(JJ5000，常熟市雙杰測試儀器廠);粉碎機 (FW200，北京中興偉業儀器有限公司);循環水式多用真空泵 (SHZ-95B，鞏義市予華儀器有限責任公司)。

1.2 試劑 乙腈 (色譜純，天津四友精細化學品有限公司);甲醇 (分析純，北京化工廠);雙蒸水為自制。

1.3 對照品 補骨脂素為中國生物制品檢定所提供，批號110739-200814，經HPLC檢測含量＞99%。

1.4 樣品 樣品均采于河南中醫學院，由河南中醫學院陳隨清教授鑒定為桑科榕屬植物無花果 (Ficus carica L.)的干燥葉。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取補骨脂素5.0mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(0.5mg/ml)。

2.2 供試品溶液的制備 取無花果葉適量研細。精密稱取0.5g置50ml量瓶中，加50%甲醇約50ml超聲提取30min。放置至室溫，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品。

2.3 色譜條件 色譜柱:phenomenex hydro ODS C18(250mm ×4.6mm，4μm)色譜柱，流動相:乙腈 -水(55:45)，流速:1.0ml/min，檢測波長:290 nm，進樣量:10μl，柱溫:32℃。在上述色譜條件下，補骨脂素與其他成分分離良好，見圖1。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性關系考察 取補骨脂素對照品溶液，分別進樣4、6、8、10、15、20μl，以補骨脂素的進樣量 (μg)為橫坐標，峰面積 (×106)為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為:y=0.9297x+0.0671，R2=0.9996，表明補骨脂素的進樣量2～10μg時與峰面積呈良好線性關系。

2.4.2 穩定性試驗 取無花果葉粉末0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，按同樣的色譜條件進行HPLC分析，進樣6次，時間間隔為0、2、4、8、12、24小時，分別測定補骨脂素峰面積，計算RSD=1.00%。表明補骨脂素在本實驗條件下至少48小時內較穩定。

2.4.3 精密度試驗 取補骨脂素標準品溶液，按同樣的色譜條件進行HPLC分析，連續進樣6次，分別測定補骨脂素峰面積，計算RSD=0.76%。表明此方法精密度良好。

2.4.4 重現性試驗 取無花果葉粉末6份，各0.5g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，按同樣的色譜條件進行HPLC分析，分別測定補骨脂素峰面積，計算RSD=0.34%，表明此方法重現性良好。

2.4.5 加樣回收率試驗 取無花果葉粉末6份，各0.5g，精密稱定，于每份樣品中加入適量補骨脂素對照品溶液，按供試品溶液制備方法制備供試液，進樣分析，計算回收率，平均回收率為102.2%，RSD=1.80%，表明本試驗方法回收良好。

2.4.6 樣品含量測定 取六份無花果葉粉末各0.5g，分別精密稱定后，按上述制備方法制備，精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀進行測定，計算補骨脂素的含量，結果見表1。

表1 無花果葉含量測定結果

3 結果與討論

3.1 提取溶劑的考察 分別用50%甲醇、75%甲醇、及甲醇超聲提取無花果葉，結果表明，用50%的甲醇提取補骨脂素效率最高。

3.2 提取時間的考察 用50%的甲醇作為溶劑提取無花果葉，分別超聲提取10、20、30min，結果表明，超聲提取30min的補骨脂素峰面積最大。

3.3 流動相的考察 考察甲醇-水及乙腈-水作為流動相，結果表明用乙腈-水=55:45做流動相時，補骨脂素吸收峰能與其他成分有效分離，且基線較平穩，雜質峰較少，峰形好，因此選用乙腈-水=55:45作為流動相進行含量測定。

3.4 測定結果表明，本實驗建立的高效液相色譜法測定無花果葉中補骨脂素的含量方法，方法準確、靈敏、簡便、快速、重現性好，可作為其補骨脂素的含量測定的主要方法，并為今后無花果葉的質量控制研究提供一定科學依據。

[1]中國藥材公司.中國中藥資源志要[M].北京:科學出版社，1994:186.

[2]車久玲.無花果的栽培歷史生態特性及藥用價值[J].山東林業科技，1995，26(5):19.

[3]劉弘，趙麗婭.無花果葉的化學及藥理研究進展 [J].華夏醫學，2006，19(5):1049-1051.

[4]葉華，謝紹詩，張文清.無花果葉、根的藥用研究進展[J].海峽藥學，2006，18(6):3-7.