樣品保存條件對DHI測定中乳成分、體細胞和尿素氮的影響

文∕劉 琴 成玉梅 周亞平 張利坤 李 春 施開平

（1云南省昆明市動物衛生監督所；2云南省昆明市奶業協會）

近年來，我國奶牛生產性能（DHI）測定工作不斷深入，參測牛只數量每年呈上升的趨勢，這一方面是由于國家對該項工作的重視，不斷加大投入；另一方面是奶牛場（奶農）對DHI測定工作的重要性認識不斷加強，自覺參加測定。DHI測定工作的意義不僅體現在全國層面上種公牛的選育上，而且體現在為奶牛場奶牛飼養管理提供理論依據和數據支撐，因此數據的準確性意義重大。云南省昆明市自2009年開展DHI測定工作以來，參測奶牛累計達到3 萬余頭，成效顯著。但是由于奶牛場分布較廣，送樣時間較長，數據的準確性會受到樣品保存條件（溫度）和時間的影響。為探討生鮮乳樣品保存條件對DHI測定結果的影響，為DHI采樣工作提供依據，昆明市動物衛生監督所與昆明市奶業協會通過對樣品在常溫和冷藏條件下連續測定，研究了不同保存條件和時間對DHI測定結果的影響。具體結果如下。

1 儀器和材料

1.1 儀器

CombiFoss? FT+牛奶體細胞成分聯機分析儀（FOSS中國），水浴鍋（北京中興）。

1.2 樣品采集與處理

在昆明市晉寧縣6 個奶牛場共采集6 份樣品，每份樣品1 000 mL，加入防腐劑（每50 mL加入1 粒專用防腐劑，其主要成分為溴硝基丙二醇）。樣品采集后分成2 份，1 份存于4 ℃，1 份存于常溫。測定前水浴至42 ℃，分別檢測脂肪含量、蛋白質含量、乳糖含量、體細胞數、尿素氮值，連續測定7或8 天。

2 方法

2.1 儀器校準

脂肪含量、蛋白質含量、乳糖含量采用全國畜牧總站DHI標準物質制備實驗室提供的標準品定標，每月1 次，每次檢測前清洗調零，并用校核樣檢測；體細胞數用FOSS中國的FMA校核；尿素氮自校準。

2.2 樣品測定

樣品42 ℃水浴加熱25～30 min，測定脂肪含量、蛋白質含量、乳糖含量、體細胞數、尿素氮值5 個指標。常溫保存的樣品連續測定7 天，冷藏保存的樣品連續測定8 天。

2.3 數據分析

用EXCEL 2007 進行數據處理，用SPSS 16.0 進行配對T檢驗，以0.05為顯著性判定標準。

3 結果

3.1 保存條件對脂肪含量的影響

不同保存條件對脂肪含量的影響均不明顯。6 個樣品連續測定7 天脂肪含量情況見表1、表2，連續測定值與第1天測定結果的T值見表3。從表3可以看出，2 種保存條件連續測定結果與第1天的T值均大于0.05，表明差異不顯著。常溫條件下，脂肪含量的變化幅度較大，6 個樣品7 天的測定值，與第一天的絕對差均值為-0.03～0.06；而冷藏條件下，連續測定8 天，絕對差均值為-0.01～0.02，差異很小。

3.2 保存條件對蛋白質含量的影響

不同保存條件下蛋白質含量的情況見表4、表5，T值見表6。可以看出，常溫保存條件下，T值均大于0.05，但檢測值絕對差較大，如1號樣品第7天與第1天的差值達到0.09 個百分點，4號樣品第6天與第1天的差值較大，達到0.23 個百分點。而在冷藏條件下，第4天、第6天的結果與第1天有顯著差異，T值分別為0.025和0.01，而其它日期的T值均大于0.05，但絕對差值較小，均在-0.01～0.03 個百分點以內。常溫保存條件下，在4 天之內，6 個樣品的絕對差均值在0.03 個百分點以內，而第5天之后，樣品的絕對差均值都超過了0.04 個百分點。

表1 常溫條件下連續7 天測定的脂肪含量 單位：%

表2 4 ℃冷藏條件下連續8 天測定的脂肪含量 單位：%

表3 保存條件對脂肪含量的影響（T值）

表4 常溫條件下連續7 天測定的蛋白質含量 單位：%

表5 4 ℃冷藏條件下連續8 天測定的蛋白質含量 單位：%

表6 保存條件對蛋白質含量的影響（T值）

3.3 保存條件對乳糖含量的影響

不同保存條件下乳糖含量的情況見表7、表8，T值見表9。常溫保存條件下，T值均大于0.05，差異不顯著，但從數值上來看，乳糖含量差異較大，且呈降低的趨勢。如1號樣品第1天與第3天相差0.06 個百分點，與第7天相差0.14 個百分點；而4號樣品第1天與第2天相差達到0.1 個百分點，與第6天相差0.45 個百分點，這可能與樣品本身有關。在冷藏條件下，乳糖含量值變化較小，6 個樣品連續測定8 天，檢測值與第1天的絕對差均值在-0.01～0.02 個百分點。上述數據說明，冷藏條件下，乳糖含量值較穩定。

3.4 保存條件對體細胞數的影響

保存條件對體細胞數的影響較大，結果見表10、表11，T值見表12。常溫條件下，在前3 天之內，6 個樣品體細胞數絕對差均值在10 萬個/mL以內；第4天以后，絕對差均值則超過了10 萬個/mL；第5天后，體細胞數與第1天的結果差異極顯著（T值小于0.05），體細胞數隨保存時間的延長持續下降，在第7天時下降幅度接近50%。而在冷藏條件下，體細胞數相對穩定，在試驗期內T值均大于0.05，表明差異不顯著；連續測定8 天，6 個樣品絕對差值都在15 萬個/mL以內，而絕對差均值在4 萬個/mL以內。

表7 常溫條件下連續7 天測定的乳糖含量 單位：%

表8 冷藏條件下連續8 天測定的乳糖含量

表9 保存條件對乳糖含量的影響（T值）

表10 常溫條件下連續7 天測定的體細胞數 單位：萬個/mL

表11 冷藏條件下連續8 天測定的體細胞數 單位：萬個/mL

表12 保存條件對體細胞數的影響（T值）

3.5 保存條件對尿素氮的影響

保存條件對尿素氮的影響見表13、表14，T值見表15。常溫條件下，T值均大于0.05，表明差異不顯著，但是尿素氮值忽高忽低，差異較大（1號和5號樣品第1天和第3天差異達到1.4 mg/100 mL，6號樣品第1天和第3天的差異達到2.5 mg/100 mL）。而冷藏條件下，第1天和第4天，第1天和第7天尿素氮測定值的T值均小于0.05，表明差異顯著，但規律性不強。總體上來說，不論是常溫或是冷藏條件，尿素氮指標值均不穩定，采樣后要及時檢測。

4 討論

4.1 脂肪含量

常溫保存時，樣品脂肪含量在第2天升高，6 個樣品絕對差均值最高達到0.06 個百分點，然后脂肪含量檢測值逐漸下降，但規律性不強，差異不顯著，可能是樣品本身的問題所致。冷藏保存對樣品脂肪含量的影響不大，7 天之內對檢測結果的影響在0.02 個百分點之內。

4.2 蛋白質含量

常溫保存情況下，連續測定7 天，樣品的蛋白質含量與第1天的T值都在0.05以上；第5天時，6 個樣品的絕對差均值為0.06 個百分點，說明保存期超過5 天時，差異較大。而冷藏保存條件下，第4天、第6天的結果與第1天有顯著差異，T值分別為0.025和0.01，但由于第5天、第7天和第8天的差異不顯著，連續測定8天，絕對差均值都在0.03 個百分點以內，說明差異可以忽略不計。

表13 常溫條件下連續7 天測定的尿素氮值 單位：mg/100 mL

表14 冷藏條件下連續測定8 天的尿素氮值 單位：mg/100 mL

表15 保存條件對尿素氮的影響（T值）

4.3 乳糖含量

常溫保存時，連續測定7 天乳糖含量T值都在0.05以上，但是第5天之后6 個樣品的絕對差均值達到0.05 個百分點。而冷藏保存條件下，雖然在第3天時差異極顯著（T值為0.01），但隨后的幾天內，T值均大于0.05，連續測定8 天，6 個樣品絕對差均值都在0.02 個百分點以內，說明差異主要來自樣品本身。

4.4 體細胞數

常溫保存時，在第2天和第3天，測定的體細胞數的絕對差均值在10 萬個/mL以內，第4 天后，6 個樣品的絕對差均值都在10 萬個/mL以上，且在第5天后檢測值的T值都小于0.05，說明體細胞數變化顯著。而冷藏條件下，連續測定8 天，6 個樣品的絕對差均值都在5 萬個/mL以內，說明冷藏條件下樣品可以保存7天以上。

4.5 尿素氮

不論是常溫或冷藏保存，尿素氮測定值均不穩定，規律性不強，忽高忽低，原因尚不明確。常溫條件下，保存至第7天，尿素氮測定值的絕對差均值超過了2.0 mg/mL；冷藏條件下，保存至第8天，尿素氮測定值的絕對差均值也達到了2.0 mg/mL。

5 結論

5.1 常溫保存條件下，樣品穩定性不如冷藏條件保存，因此樣品采集后應盡量冷藏保存。檢測脂肪含量、蛋白質含量、乳糖含量時，如果常溫保存，最好在4 天之內測定完畢，如果需要長途運輸，要有冷鏈措施；如果冷藏保存，至少可以保存8 天以上。

5.2 保存條件對體細胞數的影響較大。常溫條件下，隨時間的延長，體細胞數下降，冷藏條件下也如此，但下降幅度較小。檢測體細胞數時，常溫保存樣品要在3天之內檢測，冷藏條件下可以保存至少7 天。

5.3 測定尿素氮時，由于其很不穩定，樣品采集以后最好能在2 天內測定完畢；超過3 天，尿素氮指標變化可能會較大，導致結果不準確。C