云南省昆明市某奶牛養殖小區乳房炎病原菌分離和藥敏試驗

文∕劉 琴 曾廣廳 謝麗韞 張任華 李惠瓊

（云南省昆明市動物衛生監督所）

奶牛乳房炎是目前危害奶牛養殖業的主要疾病之一，每年可造成巨大的經濟損失。目前已分離到與奶牛乳房炎有關的病原微生物共有150 多種。雖然有多種病原微生物可引起奶牛乳房炎，但國內外公認的最常見、最主要的病原微生物為金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、乳房鏈球菌、停乳鏈球菌和大腸桿菌等。受云南省昆明市某奶牛養殖小區的委托，本文對其小區內臨床型乳房炎進行了病原菌分離和藥敏試驗，以期對其治療提供指導。

1 試驗材料

普通瓊脂培養基；血瓊脂培養基；M-H培養基；革蘭氏染色液；藥敏紙片（康泰生物公司產品）：林可霉素（M124）、頭孢噻肟（NA16）、頭孢哌酮（NA08）、氨芐西林（NA11）、鏈霉素（M125）、丁胺卡那（NA11）。

選取奶牛養殖小區有乳房炎臨床癥狀的奶牛6 頭，無菌采集患病乳區乳樣6 個。

2 試驗方法

2.1 樣本采集

牛只按常規程序擠奶消毒后，用酒精棉球消毒乳頭和采樣者手指。每個乳頭擠去頭2～3 把乳后，無菌取乳樣約5 mL，盛于滅菌青霉素瓶內貼好標簽，于4 h內送檢。

2.2 細菌分離培養

將乳樣分別劃線接種于普通瓊脂培養基，置37 ℃溫箱培養24 h后觀察菌落形態特征，挑取典型菌落涂片，革蘭氏染色，鏡檢。根據菌體形態及染色特性初步判定細菌類屬，并進一步用血瓊脂培養基純化培養。

2.3 藥敏試驗

藥敏試驗采用紙片擴散法，即用滅菌棉拭子蘸取純培養菌液（濁度為0.5）均勻涂布在M-H平板上，加蓋后放置10 min 左右，待平板面稍干，用鑷子將藥敏紙片平放在瓊脂平板上，并輕壓使其緊貼平板表面。將貼好紙片的平板在37 ℃培養箱內培養24 h，觀察結果，測量抑菌圈直徑（包括藥敏紙片直徑），計算同一類菌不同菌株的平均抑菌直徑。直徑小于1.6 cm為不敏感；1.6～2.0 cm 為中度敏感；大于2.0 cm 為高度敏感。

3 結果

3.1 細菌培養結果

經培養和染色形態觀察，6 份乳樣確定分離到可疑菌株28 株（葡萄球菌16 株、鏈球菌5 株、雙球菌6 株、大腸桿菌1 株），其中具有溶血現象，即有致病性的菌株9 株。在致病性菌株中，鏈球菌4 株，革蘭氏染色陽性，菌落為露滴狀，圓形、隆起、半透明，呈α、β或γ溶血，染色鏡檢形態一致，呈雙或短鏈狀、長鏈狀排列；金黃色葡萄球菌4 株，革蘭氏染色陽性、平板上菌落較厚，灰白或灰黃色，有光澤、圓形、隆起、不透明，血平板菌落周圍形成透明的溶血環；雙球菌1 株，形態與鏈球菌菌落相似，呈α溶血。

由此看出，該牛場乳房炎病原菌主要為鏈球菌、金黃色葡萄球菌，其次為雙球菌。

表1 全部菌株藥敏試驗結果 單位：cm

表2 溶血性菌株藥敏試驗結果（抑菌圈） 單位：cm

3.2 藥敏試驗結果

對全部28 株細菌進行藥敏試驗，結果見表1，表2。大部分菌株已對常用的抗生素氨芐西林、林可霉素有很強的耐藥性。葡萄球菌對丁胺卡那、頭孢哌酮、頭孢噻肟高度敏感，對鏈霉素、氨芐西林、林可霉素不敏感。鏈球菌對丁胺卡那、頭孢噻肟、鏈霉素高度敏感，對頭孢哌酮中度敏感，對氨芐西林、林可霉素不敏感。大腸桿菌對6 種抗生素都不敏感。雙球菌對氨芐西林、丁胺卡那、頭孢噻肟、頭孢哌酮高度敏感，對鏈霉素和林可霉素不敏感。

4 結論

4.1 通過對該小區牛乳的采樣檢測，發現小區引起乳房炎的病原菌主要為鏈球菌和金黃色葡萄球菌，其次為雙球菌。為了預防此病的發生，要切實加強牛舍的環境衛生管理，要定期對環境進行消毒，避免疾病的互相傳播。擠奶操作要熟練，嚴格按照操作規程進行，每頭牛要固定一條毛巾，洗滌后用干凈毛巾擦干乳房。擠奶機每次用后均要清洗消毒，防止擠奶設備對牛只的交叉感染。

4.2 要加強對奶牛隱性乳房炎的監測。大多數養殖場（小區）已參加了DHI測定，牛場要高度重視DHI牧場管理報告的應用，對體細胞數超過20 萬個/mL的奶牛要進行隱性乳房炎監測，積極干預，避免發展成為臨床型乳房炎，在干奶期進行治療，保證下一個泌乳期乳房健康。

4.3 經對藥敏試驗結果進行綜合分析，確定治療乳房炎應主要選用丁胺卡那、鏈霉素、頭孢哌酮、頭孢噻肟。引起乳房炎的主要病原菌對氨芐西林、林可霉素已有很強的耐藥性。隨著新的抗菌藥物的廣泛使用，將會面臨新的耐藥性的問題，因此有必要在給藥途徑、藥物配合使用上做進一步研究，以達到有效控制本病的目的。