妊娠及非妊娠婦女宮頸感染人乳頭瘤病毒的基因亞型檢測及分析

王新忠 趙俊紅

(復旦大學附屬金山醫院婦產科，上海 201508)

宮頸癌是女性發病率居第二的常見腫瘤，全球每年有超過48萬例宮頸癌新發病例，約25萬人死于宮頸癌，其中80%發生于發展中國家，28%發生于中國。子宮頸癌是目前唯一有明確病因的癌癥，已證實，高危型人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)的持續感染是發生宮頸癌的必要條件。近年來，孕婦發生宮頸癌屢見報道，HPV可在孕期及分娩過程中通過臍血、羊水以及胎盤傳播給胎兒，導致嬰幼兒乳頭狀瘤［1］。本研究通過對我院婦產科門診就診的非妊娠婦女以及妊娠婦女進行HPV基因分型檢測，探討HPV感染率及分型差異。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年2月—2013年5月在我院婦科門診就診的684例未孕育齡期女性(非妊娠婦女)和產科門診就診的857例孕15～18周初診孕婦(妊娠婦女)的宮頸上皮細胞標本，檢測23個HPV 基因分型(6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4)。

1.2 標本采集 用窺器使宮頸暴露，擦凈宮頸分泌物，以特制的宮頸刷在宮頸外口處旋轉3圈，停留1 min，收集宮頸及宮頸管上皮細胞，將毛刷放入加有細胞保存液的洗脫管中，待測。

1.3 HPV基因分型方法 采用廣東省深圳亞能生物科技有限公司提供的HPV基因分型檢測試劑盒，HPV基因分型檢測采用 PCR-反向點雜交法，用HPV基因組中的特異性引物，對待測樣品中可能存在的HPV基因型進行PCR擴增并進行生物學標記，再將PCR擴增產物與固定在芯片上的23個特異性探針進行特異性的分子雜交，通過化學顯色法分析結果。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0軟件進行數據分析，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組患者的一般資料比較 684例非妊娠婦女年齡18～47歲，平均年齡(38.35±9.76)歲;857例妊娠婦女年齡16～48歲，平均年齡(26.17±4.34)歲，差異無統計學意義(P ＞0.05)。

2.2 兩組患者HPV感染率比較 684例非妊娠婦女中HPV陽性感染者195例，HPV感染率28.5%，檢測到20種HPV基因型;857例妊娠婦女中HPV陽性感染者102例，HPV感染率11.9%，檢測到19種HPV基因型;非妊娠婦女感染率高于妊娠婦女，差異有統計學意義(P＜0.05)。非妊娠婦女中單一型別HPV感染127例，感染率18.6%;妊娠婦女中單一型別HPV感染66例，感染率7.7%，非妊娠婦女感染率高于妊娠婦女。非妊娠婦女中混合型別HPV感染68例，感染率9.9%;妊娠婦女中混合型別HPV感染36例，感染率4.2%;非妊娠婦女感染率高于妊娠婦女。見表1。

表1 兩組患者HPV感染狀況比較 (n，%)

2.3 兩組患者HPV感染型別比較 兩組患者HPV感染前7位感染型別相同，且前3位感染型別排序相同。前7位感染型別在妊娠婦女中感染率為9.65%，占陽性患者的81.4%(83/102)，而前7位感染型別在非妊娠婦女中感染率為27.07%，占陽性患者的 95.4%(186/195);非妊娠婦女 HPV43、16、58、52、6、18 等感染率高于妊娠婦女(P ＜0.05)，兩組HPV11感染率差異無統計學意義(P＞0.05)，見表2。在前7位HPV感染型別中，妊娠婦女低危型病毒感染率4.8%，明顯低于非妊娠婦女(14.8%);妊娠婦女高危型病毒感染率(4.9%)也明顯低于非妊娠婦女(11.0%)，見表 3。

表2 兩組患者主要HPV型別比較 (n，%)

表3 兩組患者感染HPV低危型與高危型狀況的比較 (n，%)

2.4 兩組患者感染HPV的年齡分布情況 妊娠婦女中，＜30歲患者的HPV感染率明顯低于30～40歲組，差異有統計學意義(P＜0.05);非妊娠婦女中，＜30歲組感染率與30～40歲組感染率相比，差異無統計學意義(P＞0.05)，而＞40歲非妊娠婦女感染率則明顯上升，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表4。

表4 兩組患者感染HPV的年齡分布情況

3 討 論

HPV屬乳頭瘤病毒科微小共價雙鏈環狀DNA病毒，能特異性感染人類上皮細胞，現已發現HPV有200多種型別、亞型及變異體，已得到鑒定的有100多種［2］。持續HPV感染可導致宮頸病變，甚至發展為宮頸癌。妊娠期HPV感染可以垂直傳播，導致嬰兒感染，造成新生兒喉乳頭瘤等疾病［1］。HPV感染分為高危型和低危型，高危型與宮頸癌密切相關，而低危型主要與疣相關。目前尚未明確胎兒暴露于高危HPV時是否會引起新生兒疾病或長期感染［3］。HPV16、18等高危型乳頭瘤病毒容易導致婦女宮頸癌，低危型HPV6、11垂直傳播可能導致新生兒呼吸道乳頭瘤病［4］。

妊娠期HPV感染多呈潛伏性和隱匿性，常無明顯臨床癥狀，不易引起重視。本研究中妊娠婦女HPV感染率低于非妊娠婦女，妊娠婦女單一型別HPV感染率和混合型別HPV感染率也均低于非妊娠婦女。有研究［5］報告，孕期性激素水平的變化，如雌激素、絨毛膜促性腺激素和孕激素的大量分泌，能夠使HPV復制活躍。孕婦免疫功能下降、陰道分泌物增加，也有利于 HPV 生長［3］。有研究［6］報告，妊娠晚期 HPV感染率(32%)遠高于妊娠早期(19%)和中期(20%)。何玥等［7］報告，20% ～30%孕婦伴隨HPV或持續感染。本研究中妊娠婦女HPV感染率11.9%，低于非妊娠婦女，也低于部分文獻的報道，可能與選取的妊娠婦女均為妊娠中期有關，有待于進一步收集孕早期和孕晚期婦女的資料進行進一步分析。

在HPV基因分型方面，妊娠婦女和非妊娠婦女主要感染型別前 7 位(HPV43、16、58、52、6、18)相同，在前3位感染型別排序上也相同，與部分文獻報道［8］不同，可能與地域差別有關。本研究中感染的前7位HPV基因型別分別占妊娠與非妊娠婦女的81.4%和95.4%。在單一基因型別方面，除可以垂直傳播、可能導致新生兒呼吸道乳頭瘤病的低危型HPV6在妊娠婦女的感染率高于非妊娠婦女外，HPV43、16、58、52、18 等在非妊娠婦女感染率均高于妊娠婦女。另外，＞40歲的非妊娠婦女中，HPV感染率隨年齡的增加而升高，提示非妊娠婦女HPV感染率具有年齡相關性。妊娠婦女因年齡較輕，HPV感染率與年齡無相關性。

綜上所述，我院患者非妊娠婦女HPV感染率高于妊娠婦女，HPV43、16、58、52、6、18 是我院主要HPV感染型別，非妊娠婦女與妊娠婦女主要HPV感染型別及排序基本相同，＞40歲的非妊娠婦女感染率與年齡呈正相關。臨床上不僅應該重視非妊娠婦女中宮頸癌的防治，對于妊娠婦女中的HPV感染也應給予足夠重視。

［1］宋軍，孟慶琴，馬小玲.妊娠期人乳頭瘤病毒的感染狀況及母嬰傳播的研究進展［J］.國外醫學皮膚性病學分冊，2004，30(4):265-267.

［2］范文生，李亞里，楊怡卓，等.基因芯片技術檢測宮頸病變中HPV感染的臨床研究［J］.中華醫院感染雜志，2009，19(7):745-747.

［3］Charles JN Lacey.Therapy for genital human papillomavirus-related disease［J］.Journal of Clinical Virology，2005，32(s):82-90.

［4］Siverbeg MJ，Thorsen P，Lindeberg H，et al.Condyloma in pregnancy is strongly predictive of Juvenile–Onset recurrent respiratory papillomasis［J］.Obstet Gynecol，2003，101(4):645-652.

［5］Garozzo G，Nuciforo G，Rocchi CM，et al.Buschke-Lowenstein tumor in pregnancy［J］.E Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2003，111(1):88-90.

［6］王佐，張敏鳴，林曉華，等.妊娠期與非妊娠期人乳頭瘤病毒的感染率比較［J］.現代婦產科進展，2008，17(6):423-425.

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［8］周世媛，薄立偉，謝建生，等.人乳頭瘤病毒基因型與宮頸病變關系的研究［J］.中國計劃生育雜志，2012，20(11):765-768.