氟苯尼考制劑中磺胺二甲嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶檢測方法的研究

徐恩民　張穎　劉少寧等

摘要：為建立測定氟苯尼考制劑中非法添加的磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）高效液相色譜分析方法，本研究使用C18色譜柱，以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（27∶73）作為流動相進行等度洗脫（流速1.0 mL/min）；采用二極管陣列檢測器，檢測波長270 nm；進樣量20 μL。結果表明，磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）分別在進樣濃度為31.25～500.00 μg/mL和12.50～200.00 μg/mL范圍內呈良好線性關系（r2分別為0.9996和1.0000）；平均回收率分別為98.6%（SM2）和99.8%（SMM）；檢出限分別為0.125 μg/mL（SM2）和0.225 μg/mL（SMM）。建立的方法簡便、準確、可行，適用于氟苯尼考制劑中非法添加的磺胺二甲嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的檢測。

關鍵詞：氟苯尼考制劑；磺胺二甲嘧啶；磺胺間甲氧嘧啶

中圖分類號：S859文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2014）07-0129-03

AbstractA detection method of SM2 and SMM illegally adulterated in florfenicol preparations were established by high performance liquid chromatography （HPLC）. The chromatography was performed with C18 column at 270 nm using PDAD. The mobile phase consisted of a mixture of acetonitrile-0.2%acetic acid （27∶73） at a constant flow rate of 1.0 mL/min. The injection volume was 20 μL. The results showed that there were good linear relations （with r2 as 0.9996 and 1.0000 respectively） when the injection concentration was 31.25～500.00 μg/mL （SM2） and 12.50～200.00 μg/mL （SMM） repectively. The average recovery rate was 98.6% （SM2） and 99.8% （SMM）. The detection limit was 0.125 μg/mL（SM2） and 0.225 μg/mL（SMM） respectively. This method was simple， accurate and feasible and was suitable for detection of SM2 and SMM illegally adulterated in florfenicol preparations.

Key wordsFlorfenicol preparations； SM2； SMM

氟苯尼考是20世紀80年代研制的一種獸醫專用氯霉素類廣譜抗菌藥，為氯霉素的結構同系物，在作用機理及抗菌譜方面與氯霉素和甲砜霉素相似，但卻不會產生類似氯霉素和甲砜霉素質粒介導的耐藥性，而且對許多氯霉素耐藥菌株仍然敏感，因此在我國當前獸藥市場具有很好的應用前景[5]。然而近年來，獸藥中非法添加的現象愈演愈烈，農業部針對此現象調研并展開了系列非法添加物檢查方法的研究工作[4]。本試驗就氟苯尼考制劑中非法添加磺胺二甲嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的檢測標準進行了研究。

1材料與方法

1.1儀器

Waters e2695高效液相色譜儀，Waters 2998 二極管陣列檢測器，AE240梅特勒電子天平。

1.2試藥

磺胺間甲氧嘧啶（SMM）對照品，中國獸醫藥品監察所，批號C0031007，含量99.4%；磺胺二甲嘧啶（SM2）對照品，中國獸醫藥品監察所，批號H0371008，含量99.8%；甲醇為色譜純；冰醋酸為優級純。

1.3試驗方法

1.3.1色譜條件Waters Atlantis T3 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.2%冰醋酸溶液（27∶73）；流速1.0 mL/min；檢測波長270 nm；進樣量20 μL。

1.3.2溶液的制備 ①對照品溶液的制備：分別稱取SM2、SMM對照品適量，用0.1 mol/L NaOH溶液超聲處理溶解后，加27%乙腈水溶液分別制成每1 mL含1.0、0.5 mg的溶液，再分別取適量以27%乙腈水溶液稀釋10倍，作為對照品溶液。

②空白溶液的制備：取氟苯尼考制劑適量，用流動相稀釋成含氟苯尼考50 μg/mL的溶液，作為空白溶液。

③供試品溶液的制備：在氟苯尼考制劑中添加SM2、SMM，用流動相配制成含氟苯尼考50 μg/mL、SM2 100 μg/mL、SMM 50 μg/mL的溶液。

1.3.3專屬性考察按上述色譜條件，對供試品溶液和空白溶液進行分析比對，以確定氟苯尼考是否對SM2、SMM峰有影響。

1.3.4最低檢測限按上述色譜條件，對對照品溶液進一步稀釋，同時記錄色譜圖及光譜圖。報告溶液光譜圖失真的最大濃度為檢測限。

1.3.5線性關系考察精密量取對照品溶液，加27%乙腈水溶液稀釋分別制成含SM2 31.25、62.50、125.00、250.00、500.00 μg/mL的溶液，按上述色譜條件分析，以峰面積對進樣濃度進行回歸，求SM2的回歸方程；同法稀釋分別制成含SMM 12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 μg/mL的溶液，求SMM的回歸方程。

1.3.6中間精密度試驗于不同時間制備3批樣品，由不同人員進行檢測，每份樣品至少進樣兩次，取平均值。

1.3.7回收率試驗用對照品分別配制相當SM2、SMM測試濃度的80%、100%、120%的系列溶液，進樣分析并計算回收率。

2結果與分析

2.1專屬性考察結果

供試品溶液和空白溶液色譜圖對比結果見圖1～2，表明空白溶液中無SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰與SM2、SMM色譜峰分離度符合要求。

3判定依據

在相同試驗條件下，供試品色譜圖中如出現色譜峰與相應對照品峰保留時間一致（差異小于等于±5%）；并且在200～400 nm波長范圍內，如供試品色譜圖中與對照品相應保留時間處有色譜峰檢出，分別提取相同保留時間的色譜峰峰頂點的光譜圖，二者的光譜圖無明顯差異且最大吸收波長一致（差異小于等于±2 nm），判為檢出各測試藥物。

若峰形和測定數值結果無法判定，用重疊色譜法判定，即將對照品溶液與供試品溶液按1∶1比例混合進樣，按如下兩種方式進行判定：①如果供試品色譜峰在與對照品保留時間相同處有色譜峰，且色譜峰半峰寬變化不大于10%，峰高或峰面積成比例變化，判為檢出各測試藥物；②如果供試品色譜峰峰面積小于對照品檢測限峰面積，則判為未檢出各測試藥物。

4小結

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）同屬于磺胺類藥物，是一種廣譜抗菌藥，其不合理使用會引起在動物性食品中殘留等進而危害到人類健康[2，3]。目前，我國還沒有關于氟苯尼考制劑中添加磺胺類藥物的檢測標準，類似于此種的非法添加現象就給獸藥監管帶來了困難。本試驗對色譜條件、專屬性、最低檢測限、線性關系、回收率等方面進行考察，建立了高效液相色譜法測定氟苯尼考制劑中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相對于以往測定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重現性好、影響因素少、引入物質少等優點，大大提高了檢測效率[1]。試驗結果也表明，本研究建立的方法精密度、線性、回收率試驗均符合《中國獸藥典》要求，能有效檢測氟苯尼考制劑中是否添加SM2、SMM及其添加量。

參考文獻：

[1]中國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典一部[M].2010年版.北京：中國農業出版社，2011.

[2]孫雷，畢言鋒，李丹，等. 豬肉中磺胺類藥物殘留檢測能力驗證分析[J].中國獸藥雜志， 2012，46（2）：23-26.

[3]王云龍，閔紅巖. 磺胺類藥物在養豬生產中的正確使用[J].中國獸藥雜志， 2004， 38（9）：52.

[4]農業部.關于組織開展中獸藥非法添加禁用藥物和其他藥物成分檢測查處工作的通知[Z].2009.

[5]朱力軍，趙暉.高效液相色譜法測定氟苯尼考及其制劑的含量[J].中國獸藥雜志， 2000， 34（6）：19-20.

1.3.6中間精密度試驗于不同時間制備3批樣品，由不同人員進行檢測，每份樣品至少進樣兩次，取平均值。

1.3.7回收率試驗用對照品分別配制相當SM2、SMM測試濃度的80%、100%、120%的系列溶液，進樣分析并計算回收率。

2結果與分析

2.1專屬性考察結果

供試品溶液和空白溶液色譜圖對比結果見圖1～2，表明空白溶液中無SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰與SM2、SMM色譜峰分離度符合要求。

3判定依據

在相同試驗條件下，供試品色譜圖中如出現色譜峰與相應對照品峰保留時間一致（差異小于等于±5%）；并且在200～400 nm波長范圍內，如供試品色譜圖中與對照品相應保留時間處有色譜峰檢出，分別提取相同保留時間的色譜峰峰頂點的光譜圖，二者的光譜圖無明顯差異且最大吸收波長一致（差異小于等于±2 nm），判為檢出各測試藥物。

若峰形和測定數值結果無法判定，用重疊色譜法判定，即將對照品溶液與供試品溶液按1∶1比例混合進樣，按如下兩種方式進行判定：①如果供試品色譜峰在與對照品保留時間相同處有色譜峰，且色譜峰半峰寬變化不大于10%，峰高或峰面積成比例變化，判為檢出各測試藥物；②如果供試品色譜峰峰面積小于對照品檢測限峰面積，則判為未檢出各測試藥物。

4小結

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）同屬于磺胺類藥物，是一種廣譜抗菌藥，其不合理使用會引起在動物性食品中殘留等進而危害到人類健康[2，3]。目前，我國還沒有關于氟苯尼考制劑中添加磺胺類藥物的檢測標準，類似于此種的非法添加現象就給獸藥監管帶來了困難。本試驗對色譜條件、專屬性、最低檢測限、線性關系、回收率等方面進行考察，建立了高效液相色譜法測定氟苯尼考制劑中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相對于以往測定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重現性好、影響因素少、引入物質少等優點，大大提高了檢測效率[1]。試驗結果也表明，本研究建立的方法精密度、線性、回收率試驗均符合《中國獸藥典》要求，能有效檢測氟苯尼考制劑中是否添加SM2、SMM及其添加量。

參考文獻：

[1]中國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典一部[M].2010年版.北京：中國農業出版社，2011.

[2]孫雷，畢言鋒，李丹，等. 豬肉中磺胺類藥物殘留檢測能力驗證分析[J].中國獸藥雜志， 2012，46（2）：23-26.

[3]王云龍，閔紅巖. 磺胺類藥物在養豬生產中的正確使用[J].中國獸藥雜志， 2004， 38（9）：52.

[4]農業部.關于組織開展中獸藥非法添加禁用藥物和其他藥物成分檢測查處工作的通知[Z].2009.

[5]朱力軍，趙暉.高效液相色譜法測定氟苯尼考及其制劑的含量[J].中國獸藥雜志， 2000， 34（6）：19-20.

1.3.6中間精密度試驗于不同時間制備3批樣品，由不同人員進行檢測，每份樣品至少進樣兩次，取平均值。

1.3.7回收率試驗用對照品分別配制相當SM2、SMM測試濃度的80%、100%、120%的系列溶液，進樣分析并計算回收率。

2結果與分析

2.1專屬性考察結果

供試品溶液和空白溶液色譜圖對比結果見圖1～2，表明空白溶液中無SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰與SM2、SMM色譜峰分離度符合要求。

3判定依據

在相同試驗條件下，供試品色譜圖中如出現色譜峰與相應對照品峰保留時間一致（差異小于等于±5%）；并且在200～400 nm波長范圍內，如供試品色譜圖中與對照品相應保留時間處有色譜峰檢出，分別提取相同保留時間的色譜峰峰頂點的光譜圖，二者的光譜圖無明顯差異且最大吸收波長一致（差異小于等于±2 nm），判為檢出各測試藥物。

若峰形和測定數值結果無法判定，用重疊色譜法判定，即將對照品溶液與供試品溶液按1∶1比例混合進樣，按如下兩種方式進行判定：①如果供試品色譜峰在與對照品保留時間相同處有色譜峰，且色譜峰半峰寬變化不大于10%，峰高或峰面積成比例變化，判為檢出各測試藥物；②如果供試品色譜峰峰面積小于對照品檢測限峰面積，則判為未檢出各測試藥物。

4小結

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）同屬于磺胺類藥物，是一種廣譜抗菌藥，其不合理使用會引起在動物性食品中殘留等進而危害到人類健康[2，3]。目前，我國還沒有關于氟苯尼考制劑中添加磺胺類藥物的檢測標準，類似于此種的非法添加現象就給獸藥監管帶來了困難。本試驗對色譜條件、專屬性、最低檢測限、線性關系、回收率等方面進行考察，建立了高效液相色譜法測定氟苯尼考制劑中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相對于以往測定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重現性好、影響因素少、引入物質少等優點，大大提高了檢測效率[1]。試驗結果也表明，本研究建立的方法精密度、線性、回收率試驗均符合《中國獸藥典》要求，能有效檢測氟苯尼考制劑中是否添加SM2、SMM及其添加量。

參考文獻：

[1]中國獸藥典委員會. 中華人民共和國獸藥典一部[M].2010年版.北京：中國農業出版社，2011.

[2]孫雷，畢言鋒，李丹，等. 豬肉中磺胺類藥物殘留檢測能力驗證分析[J].中國獸藥雜志， 2012，46（2）：23-26.

[3]王云龍，閔紅巖. 磺胺類藥物在養豬生產中的正確使用[J].中國獸藥雜志， 2004， 38（9）：52.

[4]農業部.關于組織開展中獸藥非法添加禁用藥物和其他藥物成分檢測查處工作的通知[Z].2009.

[5]朱力軍，趙暉.高效液相色譜法測定氟苯尼考及其制劑的含量[J].中國獸藥雜志， 2000， 34（6）：19-20.