熒光分光光度法測定水產品中的石油烴

馬瑞欣　蘇歡歡　梁艷紅　孫偉彬　安志業　張勇

石油是一種成份復雜的混合物，主要包括飽和烴、芳香烴類化合物、瀝青、樹脂類等。隨著石油工業的發展，石油烴已成為造成海洋污染的主要物質之一，特別是其中的芳香烴類化合物是對水生生物構成危害的主要部分。水中的石油烴能被吸附于水體中的懸浮顆粒和膠體顆粒，魚類通過體膚滲透、呼吸代謝蓄積在體內，造成魚類體型彎曲畸形，影響魚類的生長繁殖。雙殼貝類由于從水中攝食懸浮顆粒和膠體顆粒，對石油烴的富集能力很強，石油烴可抑制雙殼類的免疫力，增強疾病的易感性；水中的石油烴被魚貝富集后，通過食物鏈危害人體健康。目前生物體內的石油烴測定方法主要有紫外法[1]、熒光分光光度法[2-5]。GB17378.6-2007中石油烴的測定采用熒光分光光度法，但該方法檢測批量樣品時，可操作性差。因此本文對實驗條件進行了研究和改進，以適用于批量樣品的檢測，并對實驗應注意的問題進行了總結。

1材料與方法

1.1儀器與設備

熒光分光光度計（日本日立，F-7000）、 渦旋混合振蕩器（Ms3，廣州儀科）、數顯恒溫振蕩器（上海梅香，SHY-2）、千分之一電子天平（賽多利斯CP323S）、 萬分之一電子天平（賽多利斯，BT224S）、超純水儀（millipore）、離心機（湖南湘儀，TDZ5-WS）。

1.2主要試劑與材料

脫芳石油醚（色譜純或分光純，沸點60～90 ℃）；無水乙醇（色譜純）；氫氧化鈉（優級純），氯化鈉（優級純），二氯甲烷（色譜純）；

標準貯備溶液：購自國家海洋環境監測中心，濃度1 000 μg/mL，采用20號重柴油和潤滑油為原料配制而成。

實驗所用水為超純水。

2實驗方法

2.1樣品預處理

貝類：用蒸餾水洗凈貝殼外部附著物，取軟體組織和體液勻漿后放入磨口玻璃瓶中，-20 ℃保存備用。

4討論

4.1堿解條件

實驗比較了兩種條件下的堿解結果，（1）35 ℃恒溫水浴振蕩11 h；（2）35 ℃烘箱中放置11 h，每隔1 h 渦旋振蕩60 min。實驗發現，兩種情況下的標準工作曲線的線性、回收率和相對標準偏差相差無幾，但由于烘箱水解每隔1 h渦旋振蕩一次，比較浪費人力，因此選用35 ℃恒溫水浴振蕩堿解條件。

4.2本方法相對于GB17378.6-2007中的石油烴測定做了以下改進

堿解溫度由室溫、每隔1 h振蕩一次，改為35 ℃恒溫水浴振蕩，避免了溫度變化的影響，同時節省了人力。

由50 ℃旋轉蒸發濃縮萃取液后再氮吹至干改為40 ℃旋轉蒸發至干，縮短了操作時間，增強了方法的可操作性。

由于定容后的溶液不一定澄清，定容后增加了離心過程。

4.3實驗中應注意的問題

樣品的制備過程中避免接觸塑料器具，尤其是對于定容后的渾濁溶液，應離心而不能用過濾膜。

樣品稱量時注意不要沾到皂化瓶口，否則會造成堿解不完全。

樣品的均勻性對數據的影響非常大，由于魚貝的不同部位富集石油烴的能力不同[6]，因此樣品預處理和稱樣時均要注意保證樣品的均勻性。

石油醚、無水乙醇、二氯甲烷的熒光強度：本實驗選用了色譜純或分光純的試劑，其熒光強度在360 nm處無吸收，對檢測結果不會造成影響。

所用分液漏斗為聚四氟乙烯活塞，不能使用涂抹了凡士林的磨口塞分液漏斗。

5結論

應用該法檢測貝類中的石油烴含量，有的樣品最終得到的上機液中會出現凝膠狀物質，造成測定結果不準確；魚蝦檢測的最終上機溶液澄清，回收率好。因此該法不完全適用于貝類等物質中石油烴的測定，但能很好地應用于魚蝦中石油烴的檢測。

參考文獻：

[1] 尚龍生，孫茜，徐恒振，等.紫外分光光度法測定貽貝體內石油烴的方法研究[J].海洋環境科學，1998，17（1）：62-65

[2] 賈小平，林欽，呂曉瑜，等.熒光分光光度法測定海洋貝類總石油烴的方法研究[J].湛江海洋大學學報，1999，119（4）： 30-35

[3] 尚龍生，許乙烈，馬永安，等.熒光分光光度法測定海藻中的石油烴[J].分析化學研究簡報，1997，25： 205-207

[4] GB17378.6-2007，海洋生物監測[s] 第6部分：生物體分析.北京：中國標準出版社，2008

[5] 張海燕，周德慶.熒光分光光度法測定水產品中石油烴的方法研究[J].海洋水產研究，2008，29（4）：106-111

[6] 楊廣杏，萬軍明，麥志勤.魚類石油烴污染剖析[J].環境與開發，1995，10（3）：25-26

石油是一種成份復雜的混合物，主要包括飽和烴、芳香烴類化合物、瀝青、樹脂類等。隨著石油工業的發展，石油烴已成為造成海洋污染的主要物質之一，特別是其中的芳香烴類化合物是對水生生物構成危害的主要部分。水中的石油烴能被吸附于水體中的懸浮顆粒和膠體顆粒，魚類通過體膚滲透、呼吸代謝蓄積在體內，造成魚類體型彎曲畸形，影響魚類的生長繁殖。雙殼貝類由于從水中攝食懸浮顆粒和膠體顆粒，對石油烴的富集能力很強，石油烴可抑制雙殼類的免疫力，增強疾病的易感性；水中的石油烴被魚貝富集后，通過食物鏈危害人體健康。目前生物體內的石油烴測定方法主要有紫外法[1]、熒光分光光度法[2-5]。GB17378.6-2007中石油烴的測定采用熒光分光光度法，但該方法檢測批量樣品時，可操作性差。因此本文對實驗條件進行了研究和改進，以適用于批量樣品的檢測，并對實驗應注意的問題進行了總結。

1材料與方法

1.1儀器與設備

熒光分光光度計（日本日立，F-7000）、 渦旋混合振蕩器（Ms3，廣州儀科）、數顯恒溫振蕩器（上海梅香，SHY-2）、千分之一電子天平（賽多利斯CP323S）、 萬分之一電子天平（賽多利斯，BT224S）、超純水儀（millipore）、離心機（湖南湘儀，TDZ5-WS）。

1.2主要試劑與材料

脫芳石油醚（色譜純或分光純，沸點60～90 ℃）；無水乙醇（色譜純）；氫氧化鈉（優級純），氯化鈉（優級純），二氯甲烷（色譜純）；

標準貯備溶液：購自國家海洋環境監測中心，濃度1 000 μg/mL，采用20號重柴油和潤滑油為原料配制而成。

實驗所用水為超純水。

2實驗方法

2.1樣品預處理

貝類：用蒸餾水洗凈貝殼外部附著物，取軟體組織和體液勻漿后放入磨口玻璃瓶中，-20 ℃保存備用。

4討論

4.1堿解條件

實驗比較了兩種條件下的堿解結果，（1）35 ℃恒溫水浴振蕩11 h；（2）35 ℃烘箱中放置11 h，每隔1 h 渦旋振蕩60 min。實驗發現，兩種情況下的標準工作曲線的線性、回收率和相對標準偏差相差無幾，但由于烘箱水解每隔1 h渦旋振蕩一次，比較浪費人力，因此選用35 ℃恒溫水浴振蕩堿解條件。

4.2本方法相對于GB17378.6-2007中的石油烴測定做了以下改進

堿解溫度由室溫、每隔1 h振蕩一次，改為35 ℃恒溫水浴振蕩，避免了溫度變化的影響，同時節省了人力。

由50 ℃旋轉蒸發濃縮萃取液后再氮吹至干改為40 ℃旋轉蒸發至干，縮短了操作時間，增強了方法的可操作性。

由于定容后的溶液不一定澄清，定容后增加了離心過程。

4.3實驗中應注意的問題

樣品的制備過程中避免接觸塑料器具，尤其是對于定容后的渾濁溶液，應離心而不能用過濾膜。

樣品稱量時注意不要沾到皂化瓶口，否則會造成堿解不完全。

樣品的均勻性對數據的影響非常大，由于魚貝的不同部位富集石油烴的能力不同[6]，因此樣品預處理和稱樣時均要注意保證樣品的均勻性。

石油醚、無水乙醇、二氯甲烷的熒光強度：本實驗選用了色譜純或分光純的試劑，其熒光強度在360 nm處無吸收，對檢測結果不會造成影響。

所用分液漏斗為聚四氟乙烯活塞，不能使用涂抹了凡士林的磨口塞分液漏斗。

5結論

應用該法檢測貝類中的石油烴含量，有的樣品最終得到的上機液中會出現凝膠狀物質，造成測定結果不準確；魚蝦檢測的最終上機溶液澄清，回收率好。因此該法不完全適用于貝類等物質中石油烴的測定，但能很好地應用于魚蝦中石油烴的檢測。

參考文獻：

[1] 尚龍生，孫茜，徐恒振，等.紫外分光光度法測定貽貝體內石油烴的方法研究[J].海洋環境科學，1998，17（1）：62-65

[2] 賈小平，林欽，呂曉瑜，等.熒光分光光度法測定海洋貝類總石油烴的方法研究[J].湛江海洋大學學報，1999，119（4）： 30-35

[3] 尚龍生，許乙烈，馬永安，等.熒光分光光度法測定海藻中的石油烴[J].分析化學研究簡報，1997，25： 205-207

[4] GB17378.6-2007，海洋生物監測[s] 第6部分：生物體分析.北京：中國標準出版社，2008

[5] 張海燕，周德慶.熒光分光光度法測定水產品中石油烴的方法研究[J].海洋水產研究，2008，29（4）：106-111

[6] 楊廣杏，萬軍明，麥志勤.魚類石油烴污染剖析[J].環境與開發，1995，10（3）：25-26

石油是一種成份復雜的混合物，主要包括飽和烴、芳香烴類化合物、瀝青、樹脂類等。隨著石油工業的發展，石油烴已成為造成海洋污染的主要物質之一，特別是其中的芳香烴類化合物是對水生生物構成危害的主要部分。水中的石油烴能被吸附于水體中的懸浮顆粒和膠體顆粒，魚類通過體膚滲透、呼吸代謝蓄積在體內，造成魚類體型彎曲畸形，影響魚類的生長繁殖。雙殼貝類由于從水中攝食懸浮顆粒和膠體顆粒，對石油烴的富集能力很強，石油烴可抑制雙殼類的免疫力，增強疾病的易感性；水中的石油烴被魚貝富集后，通過食物鏈危害人體健康。目前生物體內的石油烴測定方法主要有紫外法[1]、熒光分光光度法[2-5]。GB17378.6-2007中石油烴的測定采用熒光分光光度法，但該方法檢測批量樣品時，可操作性差。因此本文對實驗條件進行了研究和改進，以適用于批量樣品的檢測，并對實驗應注意的問題進行了總結。

1材料與方法

1.1儀器與設備

熒光分光光度計（日本日立，F-7000）、 渦旋混合振蕩器（Ms3，廣州儀科）、數顯恒溫振蕩器（上海梅香，SHY-2）、千分之一電子天平（賽多利斯CP323S）、 萬分之一電子天平（賽多利斯，BT224S）、超純水儀（millipore）、離心機（湖南湘儀，TDZ5-WS）。

1.2主要試劑與材料

脫芳石油醚（色譜純或分光純，沸點60～90 ℃）；無水乙醇（色譜純）；氫氧化鈉（優級純），氯化鈉（優級純），二氯甲烷（色譜純）；

標準貯備溶液：購自國家海洋環境監測中心，濃度1 000 μg/mL，采用20號重柴油和潤滑油為原料配制而成。

實驗所用水為超純水。

2實驗方法

2.1樣品預處理

貝類：用蒸餾水洗凈貝殼外部附著物，取軟體組織和體液勻漿后放入磨口玻璃瓶中，-20 ℃保存備用。

4討論

4.1堿解條件

實驗比較了兩種條件下的堿解結果，（1）35 ℃恒溫水浴振蕩11 h；（2）35 ℃烘箱中放置11 h，每隔1 h 渦旋振蕩60 min。實驗發現，兩種情況下的標準工作曲線的線性、回收率和相對標準偏差相差無幾，但由于烘箱水解每隔1 h渦旋振蕩一次，比較浪費人力，因此選用35 ℃恒溫水浴振蕩堿解條件。

4.2本方法相對于GB17378.6-2007中的石油烴測定做了以下改進

堿解溫度由室溫、每隔1 h振蕩一次，改為35 ℃恒溫水浴振蕩，避免了溫度變化的影響，同時節省了人力。

由50 ℃旋轉蒸發濃縮萃取液后再氮吹至干改為40 ℃旋轉蒸發至干，縮短了操作時間，增強了方法的可操作性。

由于定容后的溶液不一定澄清，定容后增加了離心過程。

4.3實驗中應注意的問題

樣品的制備過程中避免接觸塑料器具，尤其是對于定容后的渾濁溶液，應離心而不能用過濾膜。

樣品稱量時注意不要沾到皂化瓶口，否則會造成堿解不完全。

樣品的均勻性對數據的影響非常大，由于魚貝的不同部位富集石油烴的能力不同[6]，因此樣品預處理和稱樣時均要注意保證樣品的均勻性。

石油醚、無水乙醇、二氯甲烷的熒光強度：本實驗選用了色譜純或分光純的試劑，其熒光強度在360 nm處無吸收，對檢測結果不會造成影響。

所用分液漏斗為聚四氟乙烯活塞，不能使用涂抹了凡士林的磨口塞分液漏斗。

5結論

應用該法檢測貝類中的石油烴含量，有的樣品最終得到的上機液中會出現凝膠狀物質，造成測定結果不準確；魚蝦檢測的最終上機溶液澄清，回收率好。因此該法不完全適用于貝類等物質中石油烴的測定，但能很好地應用于魚蝦中石油烴的檢測。

參考文獻：

[1] 尚龍生，孫茜，徐恒振，等.紫外分光光度法測定貽貝體內石油烴的方法研究[J].海洋環境科學，1998，17（1）：62-65

[2] 賈小平，林欽，呂曉瑜，等.熒光分光光度法測定海洋貝類總石油烴的方法研究[J].湛江海洋大學學報，1999，119（4）： 30-35

[3] 尚龍生，許乙烈，馬永安，等.熒光分光光度法測定海藻中的石油烴[J].分析化學研究簡報，1997，25： 205-207

[4] GB17378.6-2007，海洋生物監測[s] 第6部分：生物體分析.北京：中國標準出版社，2008

[5] 張海燕，周德慶.熒光分光光度法測定水產品中石油烴的方法研究[J].海洋水產研究，2008，29（4）：106-111

[6] 楊廣杏，萬軍明，麥志勤.魚類石油烴污染剖析[J].環境與開發，1995，10（3）：25-26