t（17；19）-急性淋巴細胞白血病細胞對腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體的敏感性及其意義

張曉春，鄭曉敏，陳 誠，李義德

（1.寧夏醫科大學總醫院兒科，寧夏 銀川 750004；2.寧夏醫科大學總醫院醫學實驗中心，寧夏 銀川 750004）

同種造血干細胞移植（allogeneic stem cell transplantation，allo-SCT）后，移植物抗白血病效應（graft versus ceukemia，GVL）由細胞毒性T細胞（cytotoxic T-lymphocyte，CTL）和自然殺傷（natural killer，NK）細胞所介導[1]，是白血病患者得以治愈的關鍵反應。近年來研究[2]表明：腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）在NK細胞和CTL細胞介導的抗腫瘤免疫中發揮極其重要的作用。t（17；19）-急性淋巴細 胞 白 血 病（acute lymphoblastic leukemia，ALL）預后極差，來源于t（17；19）（q21-q22；p13）的致癌基因E2A-HLF阻斷內源性凋亡通路，在白血病形成及化療藥物耐受中起關鍵作用[3]。（17；19）-ALL患者多于診斷后2年內復發，但allo-SCT可 改 善 其 預 后[4]。 國 內 外 已 有 相 關 研究[5－7]表 明：重 組 人 可 溶 性 TRAIL（rhsTRAIL）對乳腺癌、惡性膠質瘤和肺癌等具有抗腫瘤效應，但rhsTRAIL對t（17；19）-ALL作用的研究尚少。本研究擬通過t（17；19）-ALL細胞株對rhsTRAIL的敏感性初步分析其可能作用機制，探討其臨床意義，為臨床治療t（17；19）-ALL提供新思路。

1 材料與方法

1.1 細胞株、主要試劑和儀器 t（17；19）-ALL細胞株4株（Endo-kun、HAL-O1、UOC-B1和 YCU-B2），混合譜系白血病（MLL）ALL（MLL＋-ALL）細胞株9株（KOPN1、KOPB26、KOCL33、KOCL 44、KOCL 45、KOCL 50、KOCL 51、KOCL 58和 KOCL 69），Ph1＋-ALL細 胞 株 6 株（KOPN30bi、KOPN 57bi、KOPN 66bi、KOPN 72bi、YAMN73 和 YAMN 91），前B ALL細胞株13株，包括t（1；19）細胞 株 7 株（697、 KOPN34、 KOPN 36、KOPN 60、KOPN 63、YAMN90和YAMN 92）、t（ 12；21）細胞株1株（Reh）及其他細胞株5株（KOPN35、KOPN 61、KOPN 62、KOPN 79和KOPN 84），以上細胞株均來自日本山梨大學醫學部小兒科。細胞株用含10%FCS的RPMI-1640培養液培養，置于37℃、5%CO2、飽和濕度恒溫培養箱。取處于對數生長期細胞進行實驗。1例t（17；19）-ALL患者的骨髓經Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離出單核細胞（原始細胞＞95%），RPMI 1640培養液離心洗滌，懸于含10%FCS的RPMI 1640培養液中。患者標本的使用經寧夏醫科大學倫理委員會批準。Annexin-V-FITC、藻紅蛋白（PE）標記的抗生物素蛋白鏈菌素、Caspase廣 譜 抑 制 劑z-VAD-fmk和 rhsTRAIL（Killer TRAIL）分別購自BestBio、Invitrogen、Sigma和Alexis公司。……