膿毒血癥患者血小板參數(shù)變化及其與血小板膜糖蛋白的關(guān)系

陳玉時(shí)

膿毒血癥是嚴(yán)重創(chuàng)傷、感染、燒傷、休克、重癥胰腺炎、重大手術(shù)等臨床危重患者最為常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，是導(dǎo)致多器官功能障礙綜合癥（MODS）及膿毒性休克的發(fā)生的重要病因[1]。已有研究表明，過(guò)度的炎癥反應(yīng)和凝血系統(tǒng)功能紊亂在膿毒血癥病情加重、惡化過(guò)程及MODS發(fā)生、發(fā)展中起了重要作用，而血小板活化是凝血系統(tǒng)激活的啟動(dòng)因素之一，同時(shí)還是連接炎癥反應(yīng)和凝血系統(tǒng)之間的橋梁[2-3]。本研究通過(guò)測(cè)定膿毒血癥患者血小板各參數(shù)及血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P的表達(dá)水平，探討膿毒血癥患者血小板各參數(shù)與血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P的表達(dá)水平的關(guān)系，以尋求精確判斷血小板功能狀態(tài)的辦法?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年2月-2014年1月于本院住院治療的膿毒癥患者48例為病例組，均符合2001年國(guó)際膿毒血癥定義會(huì)議提出的膿毒癥的新診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，其中男29例，女19例；年齡19~67歲，平均（41.86±11.76）歲；排除合并血液系統(tǒng)疾病、免疫性疾病、惡性腫瘤、器官移植、肝腎功能異常、妊娠者、近2周內(nèi)應(yīng)用阿司匹林等可能影響血小板功能的藥物者及臨床病例資料不全者。另選取本院健康體檢者32例作為對(duì)照組，其中男21例，女11例；年齡20~69歲，平均（42.14±11.57）歲。兩組研究對(duì)象的性別、年齡等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有入選試驗(yàn)對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)和方法

1.2.1 血小板參數(shù)檢測(cè) 病例組患者于確診次日、對(duì)照組健康體檢者于體檢當(dāng)天清晨空腹應(yīng)用負(fù)壓采血針抽取肘靜脈血2 mL，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%，比例為1：10的乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管抗凝，輕輕混勻后于2 h內(nèi)采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀，采用電阻抗法進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得血小板計(jì)數(shù)（PC）、血小板平均體積（MPV）、血小板分布寬度（PDW）。

1.2.2 血小板膜糖蛋白檢測(cè) 病例患者于確診次日、對(duì)照組健康體檢者于體檢當(dāng)天清晨空腹應(yīng)用負(fù)壓采血針抽取肘靜脈血2 mL，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%，比例為1：9的乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝管抗凝，輕輕混勻后30 min內(nèi)送檢，靜置取上清液，加入終濃度為1%的多聚甲醛1 mL，輕輕混勻，室溫下固定15 min，取富含血小板血漿層，加入TEN緩沖液調(diào)整血小板濃度為300×109/L，將20 μL異硫氰酸熒光素標(biāo)記的血小板膜糖蛋白GP b/a復(fù)合物單克隆抗體（PAC-1）及藻紅素標(biāo)記的血小板a-顆粒膜蛋白抗P-選擇素單克隆抗體（CD62P）（均購(gòu)自美國(guó)Becton-Dickson公司）加入至100 μL用多聚甲醛固定的血小板中，混勻后于室溫暗處?kù)o置15 min，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定10 000個(gè)血小板，計(jì)算PAC-1、CD62P的百分含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（±s）表示，比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，血小板參數(shù)與血小板膜糖蛋白的相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血小板參數(shù)的比較 病例組PC顯著下降，而MPV、PDW均顯著升高，與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1。

表1 兩組血小板參數(shù)的比較（±s）

表1 兩組血小板參數(shù)的比較（±s）

組別 PC（×109/L） MPV（L） PDW（L）病例組（n=48） 211.45±77.67 14.43±0.82 17.68±1.71對(duì)照組（n=32） 273.58±34.24 9.51±0.63 14.30±1.46 t值 5.82 4.75 4.59 P值 <0.05 <0.05 <0.05

2.2 兩組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P水平的比較 病例組PAC-1、CD62P表達(dá)水平均明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3 膿毒血癥患者血小板參數(shù)與血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P的相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，膿毒血癥患者的MPV與PAC-1、CD62P表達(dá)水平均呈明顯正相關(guān)（r=0.377、0.306，P<0.05），PV、PDW與PAC-1、CD62P表達(dá)水平之間無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。

表2 兩組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P水平的比較（±s） %

表2 兩組血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P水平的比較（±s） %

組別 PAC-1 CD62P病例組（n=48） 42.13±8.66 7.59±1.62對(duì)照組（n=32） 21.04±3.50 1.43±0.47 t值 8.94 8.67 P值 <0.05 <0.05

3 討論

膿毒血癥是臨床急危重患者常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥之一，其誘發(fā)的膿毒性休克、MODS是目前危重疾病患者死亡的主要病理生理因素，已成為重癥監(jiān)護(hù)病房患者死亡的主要原因之一[5]。已有多項(xiàng)研究表明，膿毒血癥患者血小板功能出現(xiàn)異常，且隨著病程加重和惡化，血小板功能障礙程度加重[6-8]。過(guò)度的炎癥反應(yīng)和凝血系統(tǒng)功能紊亂在膿毒血癥病情加重、惡化過(guò)程及MODS發(fā)病機(jī)制中起了重要作用，而血小板活化是啟動(dòng)凝血系統(tǒng)激活及連接炎癥反應(yīng)和凝血系統(tǒng)之間的橋梁。

在人體正常血液循環(huán)中，血小板處于靜止?fàn)顟B(tài)，而當(dāng)機(jī)體受到生理或病理刺激因子作用，導(dǎo)致血管內(nèi)皮受損后，血小板立即粘附于受損血管處暴露的內(nèi)皮組織，形成血小板栓子并被內(nèi)皮下組織或局部形成的凝血酶激活?；罨难“蹇芍苯俞尫拍?、V因子、Ⅷ因子、纖維蛋白原等凝血因子，也可同時(shí)釋放大量二磷酸腺苷、血小板活化因子等產(chǎn)物，反饋引起血小板持續(xù)活化。血小板還可釋放血管活性物質(zhì)、細(xì)胞因子等，促使中性粒細(xì)胞及白細(xì)胞聚集、活化，導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷和炎性反應(yīng)加重，引起器官功能障礙的發(fā)生[9-11]。血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P在血小板黏附、聚集及活化反應(yīng)中起重要作用，均為血小板活化特異性標(biāo)志物[12]。本研究結(jié)果顯示病例組患者PAC-1、CD62P表達(dá)水平上調(diào)，表明膿毒血癥患者體內(nèi)存在血小板活化。

已有許多研究證實(shí)，PC、MPV、PDW等血小板參數(shù)與膿毒血癥患者病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)[13]。本研究結(jié)果顯示，膿毒癥患者PC明顯下降，而MPV、PDW明顯升高，與國(guó)內(nèi)相關(guān)研究報(bào)道相符[14]。PC下降可能與高凝狀態(tài)下消耗增多、血液稀釋、細(xì)菌毒素破壞及藥物的繼發(fā)作用等有關(guān)，而MPV、PDW升高則可能與PC下降后引發(fā)骨髓代償增生，導(dǎo)致大量體積更大的不成熟血小板產(chǎn)生有關(guān)[15]。另外，本研究對(duì)血小板參數(shù)與PAC-1、CD62P的相關(guān)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)MPV與PAC-1、CD62P之間均存在顯著正相關(guān)關(guān)系，表明PAC-1、CD62P均可作為血小板活化的特異性標(biāo)志物的同時(shí)，MPV也可作為判斷膿毒血癥患者體內(nèi)是否存在血小板活化的參考數(shù)值。

綜上所述，膿毒癥患者體內(nèi)存在血小板明顯活化，血小板參數(shù)與血小板膜糖蛋白PAC-1、CD62P共同參與血小板活化過(guò)程。MPV與PAC-1、CD62P之間均呈顯著正相關(guān)，為患者機(jī)體血小板活化狀態(tài)的評(píng)估及指導(dǎo)臨床預(yù)防、診治、評(píng)估膿毒血癥提供了簡(jiǎn)便、可行的依據(jù)。

[1]顧勤，陳鳴.膿毒癥的早期識(shí)別與規(guī)范治療[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2013，22（2）：126-129.

[2]石巖.嚴(yán)重膿毒癥發(fā)病機(jī)制新認(rèn)識(shí)[J].中國(guó)實(shí)用外科雜志，2012，32（11）：956-958.

[3]章志丹.嚴(yán)重膿毒癥致凝血功能障礙的新認(rèn)識(shí)[J].中國(guó)實(shí)用外科雜志，2012，32（11）：891-894.

[4]胡健，尚為民，段艷青，等.急診感染患者凝血障礙與膿毒癥嚴(yán)重程度的關(guān)系研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2013，23（17）：4102-4103.

[5]靳賀，肖雅，梁華平.早期預(yù)測(cè)創(chuàng)傷后膿毒癥發(fā)生的研究進(jìn)展[J].中華危重病急救醫(yī)學(xué)，2014，26（9）：685-688.

[6]張偉，林兆奮，瞿金龍，等.急診感染患者凝血障礙與膿毒癥嚴(yán)重程度的關(guān)系[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2012，21（2）：123-127.

[7]郭峰，梁勛，郇京寧.持續(xù)血小板減少癥預(yù)測(cè)嚴(yán)重?zé)齻l(fā)膿毒癥的臨床意義[J].中華燒傷雜志，2014，30（4）：295-298.

[8]程鵬雁，馬渝，陶楊，等.膿毒癥患者入ICU時(shí)血漿血小板活化因子水平與病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，39（7）：1027-1031.

[9]孫振朕，朱科明，鄧小明.血小板和中性粒細(xì)胞在膿毒癥中作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2011，23（8）：502-504.

[10]丁歡，曹相原，馬希剛，等.膿毒癥內(nèi)皮細(xì)胞損傷與炎癥、凝血相關(guān)性研究[J].中華急診醫(yī)學(xué)雜志，2013，22（5）：482-484.

[11]董金巧，季秀成.膿毒癥患兒血小板活化狀態(tài)及血小板參數(shù)的觀察及臨床意義[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8（22）：2732-2734.

[12]楊向紅，孫仁華，洪軍.膿毒癥患者血小板膜糖蛋白的表達(dá)及其臨床意義[J].中國(guó)急救醫(yī)學(xué)，2010，30（1）：28-31.

[13]梁霞，黎敏，閆利霞.膿毒血癥患兒血清白蛋白及血小板檢測(cè)分析[J].中國(guó)臨床研究，2010，23（11）：1002-1002.

[14]王兵，王勇強(qiáng)，曹書華，等.膿毒癥患者血小板參數(shù)與Toll樣受體4表達(dá)的關(guān)系及中西醫(yī)結(jié)合治療研究[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)，2011，23（10）：616-620.

[15]倪俊學(xué)，付紅敏，馬燕，等.膿毒癥患兒血小板膜糖蛋白-140和血小板參數(shù)的變化[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2009，24（6）：477-477.