大腸癌中STAT3、Twist的表達(dá)及與EMT關(guān)系的研究*

鐘寶元

大腸癌（結(jié)直腸癌）是我國常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率有逐年增高的趨勢。由于大腸癌的早期癥狀常不典型且不易被發(fā)現(xiàn)，確診時(shí)病程已到中晚期。因此，通過研究大腸癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)理，為其治療提供更多的有效手段就尤為重要。本研究分析與探討大腸癌中STAT3、Twist的表達(dá)及與EMT的關(guān)系，具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2005-2011年本院結(jié)直腸癌、癌旁組織標(biāo)本80例，經(jīng)常規(guī)石蠟包埋與10%中性甲醛固定標(biāo)本。其中男45例，女35例，年齡為32~79歲，平均（51.2±10.5）歲，組織學(xué)分級：高中分化30例，低分化50例；44例腫瘤直徑未超過5 cm，36例腫瘤直徑超過5 cm。

1.2 方法 選用由北京博奧森公司生產(chǎn)的STAT3、Twist及EMT兔抗人多克隆抗體，DAB顯色試劑盒、SABC（鏈霉親和素-生物素復(fù)合物）試劑盒，采用免疫組化方法，切片常規(guī)石蠟，并脫蠟至水。用3%的雙氧水進(jìn)行10 min的室溫封閉，3次蒸餾水洗，10 min抗原修復(fù)。每5分鐘PBS洗3次，再加入適量山羊血清封閉液，20 min的室溫封閉，多與液體取出，滴加一抗，并在4 ℃環(huán)境下過夜。每1分鐘PBS洗3次，并適量加入生物素化二抗，室溫（37 ℃）封閉20 min，每2分鐘PBC洗3次。DAB顯色，水洗蒸餾，鹽酸乙醇分化，蘇木精1 min復(fù)染。

1.3 抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn) STAT3、Twist以細(xì)胞漿和/或細(xì)胞核呈棕黃色者為陽性細(xì)胞，EMT陽性表達(dá)為棕褐色，具體在細(xì)胞膜上定位，或者線形圍繞細(xì)胞膜[1-2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 STAT3、Twist及EMT的表達(dá)對比 大腸癌中Twist蛋白陽性率為57.5%（46/80），癌旁組織陽性率26.3%（21/80）；大腸癌中STAT3蛋白陽性率63.7%（51/80），癌旁組織陽性率17.5%（14/80）；大腸癌中EMT陽性率為17.5%（14/80），癌旁陽性率62.5%（50/80），兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ 字2=50.00、75.21、66.58，P<0.05），見表 1。

表1 大腸癌及癌旁組織中STAT3、Twist及EMT的表達(dá)對比 例

2.2 STAT3、Twist表 達(dá) 與 EMT的 關(guān) 系 STAT3、Twist的表達(dá)和EMT呈現(xiàn)正相關(guān)性（r’s=0.262、0.243，P<0.05），見表 2。

表2 STAT3、Twist的表達(dá)與EMT的關(guān)系 例

3 討論

STAT3是在1994年作為白細(xì)胞介素-6信號傳遞中的急性期反應(yīng)因子被純化的，是酸化激活酪氨酸磷的一個(gè)STAT 家族成員[3]。其異常表達(dá)與EMT現(xiàn)象在大腸癌中的關(guān)系，目前在國內(nèi)外尚未見相關(guān)報(bào)道，而且有關(guān)STAT3蛋白的異常表達(dá)與EMT現(xiàn)象的作用機(jī)制的研究尚處于空白。很多實(shí)踐研究表明，作為JAK/STAT的關(guān)鍵性信號分子，持續(xù)性激活STAT3和人體細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)程存在相關(guān)性[4-5]。在大腸癌的研究中發(fā)現(xiàn)，STAT3的異常激活在結(jié)直腸腫瘤中起了重要的作用[6-7]。

在腫瘤進(jìn)展中，EMT是其關(guān)鍵過程之一，EMT的主要特征在于上皮細(xì)胞間質(zhì)特性的獲得與上皮細(xì)胞極性的喪失，和腫瘤細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及原位侵襲具有相關(guān)性[8]。用于對EMT進(jìn)行驗(yàn)證的分子學(xué)標(biāo)志物有：上皮標(biāo)志物E-cad和Cytok表達(dá)降低以及間質(zhì)標(biāo)志物N-cadherin和Vimentin達(dá)的增加[9-11]。EMT表型標(biāo)志有三維侵襲、遷移性、增強(qiáng)抗凋亡能力，主要機(jī)制是在調(diào)控因子作用下造成E-cad表達(dá)降低與β-cat核定位，導(dǎo)致癌細(xì)胞膜上具有粘連作用的β-cat與E-cad降低，引發(fā)癌細(xì)胞的極性變化、粘連消失及形態(tài)改變，從而參與腫瘤轉(zhuǎn)移與侵襲全過程[12-15]。本研究顯示，大腸癌中，Twist蛋白的陽性率為57.5%，癌旁組織陽性率26.3%。STAT3蛋白陽性率63.7%，癌旁組織陽性率17.5%，大腸癌中，Twist與STAT3蛋白陽性率高于癌旁組織陽性率（P<0.05），EMT陽性率為17.5%，比癌旁陽性率62.5%低（P<0.05），STAT3、Twist的表達(dá)和EMT呈現(xiàn)正相關(guān)性（P<0.05）。

綜上所述，大腸癌中SATA3與Twist表達(dá)和腫瘤生物學(xué)特征存在相關(guān)性，而激活SATA3可能會提升Twist與EMT的表達(dá)，對STAT3、Twist及EMT的檢測有助于預(yù)測腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移與判斷預(yù)后。

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