KIF14過表達與肝細胞肝癌手術預后密切相關

楊 濤，孫軼飛，王立偉，張 穎，白文彩(.河北省石家莊市第一醫院普通外科，河北 石家莊 0500；.河北省滄州市傳染病醫院傳染科，河北 滄州06000；.河北省寧晉縣醫院婦產科，河北 寧晉 055550)

·論著·

KIF14過表達與肝細胞肝癌手術預后密切相關

楊 濤1，孫軼飛1，王立偉1，張 穎2，白文彩3
(1.河北省石家莊市第一醫院普通外科，河北 石家莊 050011；2.河北省滄州市傳染病醫院傳染科，河北 滄州061000；3.河北省寧晉縣醫院婦產科，河北 寧晉 055550)

目的KIF14是有絲分裂驅動蛋白超家族成員，其在染色體分離和胞質分裂過程中起著重要作用，KIF14表達增高與一系列人類癌癥發生、發展密切相關。本研究通過觀察KIF14表達與臨床變量的關系，探討KIF14過表達與肝細胞肝癌手術預后的關系。方法取2005年2月—2010年12月我院進行肝癌手術，并且術后病理證實為肝細胞肝癌的患者102例。應用RT-qPCR檢測102例肝細胞肝癌組織中KIF14的表達量，并分析其與腫瘤分級、分期和無病生存率的關系。結果KIF14過表達與腫瘤分級(P=0.002)、分期(P=0.013)和無病生存率(P<0.001)均密切相關。結論肝細胞肝癌組織中KIF14過表達不利于手術預后，它也許可以作為肝細胞肝癌手術預后評估的重要指標及潛在治療靶點。

癌，肝細胞;驅動蛋白;預后

10.3969/j.issn.1007-3205.2014.03.006

肝細胞肝癌具有高侵襲、轉移早、易復發、預后差的臨床病理特征，是癌癥致死的第三大原因，而且還是肝硬化患者的首要致死原因。每年全球超過60萬人被診斷為肝癌，而我國又是全球肝癌發病率最高的國家，每年新發病例數占全球總數的55%，是目前對我國人民健康和生命威脅較大的惡性腫瘤之一[1]。改進外科技術，使用新的化療藥物，改變化療方式和新興的分子靶點治療有利于改善患者的生存狀況。但是，對肝癌致癌機制了解不完全導致很難評估肝癌手術預后效果及選擇有針對性的治療方案并提高生存率。驅動蛋白在無數細胞進程，如胞內運輸和細胞分裂中起重要作用[2]。有跡象表明，具有異常表達和功能的驅動蛋白對多種人類腫瘤的進展起關鍵作用。更好地了解驅動蛋白功能可能有利于腫瘤預后評估及靶向治療的發展[3-4]。人的KIF14是具有6 586個堿基對的驅動蛋白家族成員[5]，像所有驅動蛋白一樣，KIF14包括一個驅動蛋白域和一個叉頭關聯域[6]，并且KIF14預計在1q區域扮演可能的癌基因的角色。已有研究[7-9]表明，KIF14表達是乳癌、肺癌和卵巢癌的預后標記，是卵巢癌的潛在治療目標。本研究檢測原發肝癌組織中KIF14的表達，旨在探討其與腫瘤分級、分期及無病生存期的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2005年2月—2010年12月期間河北省石家莊市第一醫院進行肝癌手術，并且術后病理證實為肝細胞肝癌的患者102例，組織標本置于液氮中-80℃冷凍保存。102例患者的隨訪數據來源于醫院記錄和肝切除術后與患者的直接溝通。隨訪日期定為從手術切除腫瘤后到死亡或上次隨訪日。無病生存率(disease free surviva，DFS)定為患者肝癌切除后無肝癌復發跡象的時間。本研究通過我院審查機構許可并書面征得所有患者同意。

1.2 組織RNA分離和實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應(real-time quantitative reverse transcription-PCR,RT-qPCR)：根據說明書使用TRIZOL試劑提取總RNA。使用5μg總RNA和SuperScript Ⅱ及寡dT執行逆轉錄。RT-qPCR分析使用Fast SYBR Green MasterMix系統。KIF14引物和GAPDH內參序列見表1。PCR反應條件為95℃ 20s、95℃ 3min、60℃ 30s，使用ABI-7500(應用生物系統)共計40個循環。相對定量方法得到的CT值，通過三聯反應測定所有樣本的KIF14與GAPDH。取探測基因的可用三聯反應CT平均值，減去GAPDH的CT值，獲得ΔCT。KIF14的相對mRNA表達水平應用2-ΔCT方法計算。

表1 KIF14的RT-qPCR擴增引物Table 1 Primers used to perform RT-qPCR of KIF14

1.3 統計學方法：應用SPSS13.0計算軟件進行統計分析，按照Kaplan-Meier法進行生存分析。KIF14與各種臨床病理變量間的關系采用卡方檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

由于在所有原發肝癌組織中KIF14 mRNA的分布不符合正態分布，所以我們基于肝癌患者的KIF14 mRNA相關水平和DPS狀況繪制ROC曲線。以1.5×10-3為界將患者分為KIF14低表達組(KIF14low)和高表達組(KIF14high)。

觀察KIF14表達與年齡，腫瘤大小、分級、分期，門靜脈癌栓和乙型肝炎病毒感染等相關因素的關系。結果顯示在KIF14高表達與腫瘤分級(P=0.002)和分期有關(P=0.013)，而與不同年齡、不同腫瘤大小癌栓和有無乙型肝炎病毒感染之間無關，見表2。

KIF14high患者DFS較KIF14low明顯縮短(圖1)。

表2 102例肝細胞肝癌患者中臨床病理因素與KIF14表達的關系Table 2 Relationship between clinicopathological factors and KIF14 expression in 102 hepatocellular carcinoma patients

圖1 102例肝細胞肝癌患者中KIF14 mRNA表達與5年無病生存率Kaplan-Meier曲線分層的關系(P<0.001)
Figure 1 The Kaplan-Meier plot of 5-year disease free survival curves stratified by KIF14 mRNA expression in 102 HCC patients(P<0.001)

3 討 論

本研究結果顯示，KIF14在肝癌中過表達，這種過表達與腫瘤分級、分期有關。表明KIF14在人類肝癌癌變過程中具有重要作用，KIF14過表達與肝細胞肝癌手術預后密切相關。

KIF14是胞質分裂和染色體分離的必要條件[9]。多篇報道[6,8,10]稱，KIF14表達增加與多種不同的腫瘤發生有關，包括肝癌。在以往的研究中由于標本數有限，Kim等[10]沒有觀察到KIF14表達水平與腫瘤侵襲性、分級、大小和生存率之間的特殊聯系。而本研究觀察到了KIF14表達水平與肝癌分級、分期及生存率之間密切相關。

盡管KIF14的確切功能尚不清楚，但它在細胞分裂中期使染色體對齊的作用[2]表明它在形成非整倍體方面可以發揮重要作用，并且它的過表達可能在癌癥進展中起到加速細胞周期的作用。不管它的作用模式是什么，它在肝癌中的特異性過表達及它與腫瘤分級、生存率的關系，均證明KIF14作為可疑癌基因、治療靶點和預后目標的重要性。

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《河北醫科大學學報》編輯部

OVER EXPRESSION OF KIF14 IS CLOSELY RELATED WITH THE PROGNOSIS OF HEPATOCELLULAR CARCINOMA AFTER OPERATION

YANG Tao1,SUN Yifei1,WANG Liwei1,ZHANG Ying2,BAI Wencai3
(1.DepartmentofGeneralSurgerytheFirstHospitalofShijiazhuangCity,Shijiazhuang，HebeiProvince，050011； 2.DepartmentofInfectiousDiseasestheContagiousHospitalofCangzhouCity,HebeiProvince，Cangzhou061000,China；3.DepartmentofObstetricsandGynecologytheHospitalofNingjinCounty，HebeiProvince，Ningjin055550,China)

ObjectiveThe mitotic kinesin superfamily protein KIF14 is essential for cytokinesis and chromosome segregation and increased KIF14 expression is related to a variety of human cancers.This study is to explore the relationship between KIF14 expression and operation prognosis of hepatocellular carcinoma by investigating the connection between KIF14 expression and clinical variables.MethodsThe study involved 102 patients who were confirmed as hepatocellular carcinoma by pathology after operation from February,2005 to December,2010 in our hospital.The expression of KIF14 in 102 hepatocellular carcinoma cases was detected by RT-qPCR and coalition statistical analysed with tumor grade,stage and disease-free survival.ResultsKIF14 overexpression was closely related with tumor grade (P=0.002),stage (P=0.013) and disease-free survival (P<0.001).ConclusionKIF14 overexpression in hepatocellular carcinoma is not conducive to prognosis.It may be used as an important index and potential treatment target in evaluating the prognosis of hepatocellular carcinoma after operation.

carcinoma，hepatocelluar;kinesin;prognosis

2013-12-06；

2014-01-25

河北省科技支撐計劃項目(132777236)

楊濤(1979-)，男，河北棗強人，河北省石家莊市第一醫院副主任醫師，醫學碩士，從事普通外科疾病診治研究。

R730.261

A

1007-3205(2014)03-0263-03

許卓文)