地骨皮中有效成分的提取及其降血糖調血脂作用研究

李春英，姜海霞，張晶，王洪波

(1.大慶醫學高等專科學校，黑龍江大慶163312；2.大慶龍南醫院)

地骨皮(Cortex Lycii)為枸杞的根皮，枸杞是茄科枸杞屬的多分枝灌木植物，《本草綱目》記載：“春采枸杞葉，名天精草；夏采花，名長生草；秋采子，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”。 多年來在中國民間被用于治療肺炎、咳血、肢端壞疽及糖尿病等。本課題在建立高血糖、高脂大鼠模型的基礎上，研究地骨皮對模型大鼠血糖、血脂的影響，旨在為研制降血糖、調血脂的天然藥物提供理論依據。

1 材料與儀器

1.1 動物

采用清潔級大鼠。體重為180～220g，雄鼠。

1.2 飼料

基礎飼料：高糖脂飼料：在劉浩[3]研究的基礎上進行改進，為10%蔗糖、10%豬油、10%雞蛋和70%基礎飼料。

1.3 儀器及試劑

754分光光度計；SB2薄層色譜儀；胰島素放射免疫分析儀；JPS-Ⅲ快速血糖測試儀；SS48DS1糖化血紅蛋白儀；TL16G型高速冷凍離心機；TG、TC、HDL-C、LDL-C試劑盒；Dade Behring試劑等。

1.4 指標檢測

空腹，斷尾法采血測血糖、血脂各項指標。葡萄糖(GLU)、胰島素(Ins)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇( LDL-C)、載脂蛋白A1(APO-A1)、載脂蛋白B(APO-B)等指標的檢測。

2 方法

2.1 地骨皮總黃酮及牛磺酸的提取、分離及成分鑒定

2.1.1 總黃酮的提取、分離及成分鑒定：采用乙醇提取法，將地骨皮粗粉，經乙醇回流，過濾減壓濃縮，得醇浸膏，加石灰水攪拌，得堿水液加酸，得粗品總黃酮，經乙醇重結晶，最后得總黃酮。并通過化學實驗及薄層色譜法對其進行鑒別，分光光度法測定總黃酮含量。

2.1.2 牛磺酸的提取、分離及成分鑒定：將地骨皮粗粉加乙醇，加熱回流，得醇溶液，回收乙醇得醇浸膏，用碳酸鈉溶液調至pH 11.5，乙酸乙酯萃取得堿水液，鹽酸調至pH 2.0，乙酸乙酯萃取，減壓，回收乙酸乙酯，乙醇溶解，過濾，得乙醇液，然后上硅膠柱色譜分離，回收溶劑，干燥后，得牛黃散。并通過薄層色譜法鑒別，分光光度法測定牛磺酸含量。

2.2 降糖調脂機制研究

2.2.1 糖尿病模型建立及維持狀態觀察

清潔級Wistar大鼠100只，雄性，體重170±20g，在專用飼養籠中飼養，室溫22℃，相對濕度65%，晝夜交替時間12h，自由攝食和飲水。適應環境1周后，將大鼠隨機分成正常對照組(n=10)和實驗組(n=90)。正常對照組飼以普通飼料，實驗組飼以高脂飼料喂養4周后，腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)25mg/kg(溶于0.1mol/L枸櫞酸緩沖液，pH4.5)建立動物模型。

2.2.2 動物分組及給藥

注射STZ 72h后，測定空腹血糖，選擇64只血糖水平超過16.5mmol/L作為糖尿病模型大鼠，隨機分為8組，分別是模型對照組、優降糖(250mg/kg)組和牛磺酸高(400mg/kg)、中(200mg/kg)、低(100mg/kg)劑量組；總黃酮高(400mg/kg)、中(200mg/kg)、低(100mg/kg)劑量組。給藥組每天一次給藥灌胃，模型組灌胃給藥生理鹽水。連續給藥6周后采血檢測各組血糖血脂各項指標。

2.2.3 指標的觀察及測定

大鼠斷尾取血。處死動物，取胰腺做生化指標測定，測定胰島素水平、糖化血紅蛋白、空腹血糖值、餐后2h血糖值、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等。

2.3 數據處理結果分析

3 結果

3.1 高血糖血脂異常大鼠模型的建立

表1 模型大鼠與正常大鼠血糖比較±S)

由表1可得，空白組與模型組相比，P<0.01顯著性差別，說明地骨皮對于正常小鼠有一定的降血糖作用。

3.2 地骨皮中有效成分的藥理作用研究

3.2.1 總黃酮及牛磺酸對大鼠血清葡萄糖濃度的影響

表2 總黃酮組對大鼠血糖的影響± S)

表3 牛磺酸組對大鼠血糖的影響±S)

如表2、3所示，與正常對照組相比，2型糖尿病模型組大鼠的血糖值明顯升高(P〈0.001)，與模型組相比，總黃酮大、中、小劑量組、牛磺酸大、中、小劑量組及優降糖組血糖值均有下降，說明總黃酮及牛磺酸均能降低2型糖尿病大鼠的血糖。

3.2.2 總黃酮及牛黃酸對大鼠血清胰島素含量的影響

如表4、5所示，與正常對照組相比，糖尿病模型組血清胰島素水平明顯升高，P<0.05，與糖尿病模型組相比，總黃酮及牛黃酸大、中、小劑量組血清胰島素均有降低。

表4 總黃酮對血清胰島素的影響±S)

表5 牛磺酸對血清胰島素的影響± S)

3.2.3 總黃酮及牛黃酸對大鼠血脂的測定

表7 牛磺酸對2型糖尿病大鼠血脂的影響

如表6、7所示，與正常對照組相比，糖尿病模型組實驗結束后TC、TG明顯升高，LDL-C明顯降低。與糖尿病模型組比較，總黃酮及牛磺酸大、中、小劑量組TC、TG均有下降，HDL-C均有增高。下降趨勢與劑量關系不大。

3.2.4 總黃酮及牛磺酸對大鼠肝糖原的影響

表8 總黃酮及牛磺酸對2型糖尿病大鼠肝糖元的影響

模型組與空白組比，大鼠糖代謝功能失調，糖異生能力下降，引起血糖升高，地骨皮治療后肝糖元水平有所上升，地骨皮組與空白對照組相比無顯著性差異，P>0.05因此總黃酮及牛磺酸在調解糖尿病大鼠糖代謝方面有著良好的效果。

4 討論

糖尿病是一種常見的內分泌代謝性疾病，通常是由于胰島素分泌發生障礙形成，糖代謝紊亂，同時還出現脂肪代謝紊亂以及蛋白質、水及電解質等多種代謝紊亂，產生嚴重的并發癥。因此篩選開發具有降低血糖、調節血脂的生物資源對于糖尿病人的康復具有重要意義。

本實驗結果表明，地骨皮中的總黃酮及牛磺酸具有降血糖作用，它的降糖機制是促進胰島β細胞分泌胰島素，提高血清胰島素水平，使血清胰高血糖素水平降低。抑制肝糖原分解和促進肝糖原合成的作用，從而可減少血糖的來源，增加血糖的去路，降低血糖值。地骨皮還有降血脂的作用，降脂機制是總黃酮降低血膽固醇和三酰基甘油來調節血脂。

[1] 黃小紅,周興旺,王強,等.3種地骨皮類生藥對白鼠的解熱和降血糖作用[J].福建農業大學學報,2000,29(2):229.

[2] 周潔,朱偉.地骨皮的化學成分及藥理研究進展[J].山西中醫,2008,24(2):47.

[3] 劉浩,崔美芝,李春艷.大蒜素對2型糖尿病大鼠血糖的干預效應[J].中國臨床康復,2006,10(31)：73.

[4] 孟協中,席金萍,雷擎宇,等.中藥地骨皮有效成分研究的新進展[J].寧夏醫學院學報,1999,21(5):387.

[5] 楊涓,康建宏,魏智清.分光光度法測定地骨皮中牛磺酸含量[J].氨基酸和生物資源,2006,28(3):26.

[6] 曾向總,趙琳.中藥地骨皮有效部位提取工藝研究[J].遼寧中醫雜志,2007,34(12):1778.

[7] 許建秦,路波,沈璐,等.糖尿康膠囊治療糖尿病300例[J].陜西中醫,2000,21(3):100.

[8] 周晶,孟林,黃建安,等.地骨皮對四氧嘧啶糖尿病小鼠的降糖作用[J].中成藥,2001,23(6):424.

[9] 王東.地骨皮醇提、水提液對2型糖尿病大鼠胰島素抵抗影響的實驗研究[G].浙江省中西醫結合學會糖尿病專業委員會第一次學術會議材料匯編,2006.

[10] 李康,畢開順,司保國.地骨皮中不同組分對四氧嘧啶糖尿病小鼠的降血糖作用[J].中醫藥學刊,2005,23(7):1298.

[11] 王嘉惠,沈小玲,符崇威,等.高脂喂養聯合鏈脲佐菌素誘導大鼠2型糖尿病模型研究[J].吉林醫學.629-633.

[12] 譚銀豐,張小坡,李洪福,等.倒地鈴提取物降血糖作用研究[J].中國現代中藥.2013(8):642-644.

[13] 周巧霞，張經碩,茅彩萍,等. XGY對糖尿病小鼠的降血糖作用及其機制研究[J].蘇州大學學報：醫學版,2006，26 (4): 575-578.

[14] 胡怡秀,劉秀英,馬征,等.苦瓜水提取物降血糖作用動物實驗研究[J].實用預防醫學2010(1):30-32.

[15] 徐祝封,陳振武,張欽德.洋蔥提取物調血脂作用研究[J].遼寧中醫藥大學學報.2008(4):152-153.

[16] 陳傳千,屈躍丹,單廣勝,等.野菊花提取物調節血脂作用的研究[J].吉林醫藥學院學報,2010(6):321-324.