老年乳腺癌患者外周血趨化因子及其受體的表達(dá)

朱 旭 李 炯 楊 檬 曾冬竹

(重慶市渝北區(qū)人民醫(yī)院心胸外科，重慶 401120)

血管生成在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起著至關(guān)重要的作用，促血管生成因子是極為重要的乳腺癌預(yù)后因素〔1〕。目前，針對(duì)血管生成因子進(jìn)行靶向生物治療已成為臨床防治腫瘤疾病的研究熱點(diǎn)。臨床研究證明，趨化因子在腫瘤的血管形成、播散與轉(zhuǎn)移、發(fā)展演變等過程中的影響意義深遠(yuǎn)。趨化因子是一大類細(xì)胞因子超家族的蛋白多肽，具有特異性激活和募集白細(xì)胞小分子的作用。趨化因子不僅能夠直接刺激腫瘤細(xì)胞促其生長， 還可促血管生成，從而達(dá)到間接促腫瘤細(xì)胞生長的作用〔2，3〕。本文擬探討趨化因子及其受體在外周血中的變化及與乳腺癌發(fā)病機(jī)制的聯(lián)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料 抽選2012年1月至2013年3月我院收治的45例老年乳腺癌患者，年齡57～73〔平均(63.7±4.8)〕歲，術(shù)后經(jīng)病理檢查均已確診為浸潤性導(dǎo)管癌，且腋窩淋巴結(jié)均已出現(xiàn)轉(zhuǎn)移；抽選同期體檢的健康者45例為對(duì)照組，年齡59～75〔平均(64.2±5.1)〕歲；均排除肝腎功能不全、心律失常、肺部疾病、心力衰竭、糖尿病以及電解質(zhì)代謝紊亂等患者，均無創(chuàng)傷、應(yīng)激以及感染等情況。

1.2方法 抽取患者空腹肘靜脈血3 ml，離心分離出血清，再進(jìn)行血清趨化因子檢測；取2 ml靜脈全血放入含抗凝劑的試管中，用于外周血CD3+T細(xì)胞表面受體的檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測血清趨化因子，白介素(IL)-8、CCL20、正常細(xì)胞表達(dá)及分泌物因子(RANTES)、細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1檢測試劑盒由上海博光科技公司生產(chǎn)，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。采用流式細(xì)胞儀分析外周血CD3+T淋巴細(xì)胞表面CXCR1、CCR6、CCR5、CCR2等趨化因子受體表達(dá)，CXCR1、CCR6、CCR5、CCR2鼠抗人單克隆抗體來自美國RD公司。主要步驟：①離心管中分別注入100 μl全血。②注入10 μl的CXCR1、CCR6、CCR5、CCR2單克隆抗體溶液，再置入4℃冰箱中過夜。③將洗液置入離心管中，混勻，然后離心去上清液，連續(xù)洗滌2次除去多余抗體。④搖勻沉淀加入1.3 μl工作濃度異硫氰酸熒光素的羊抗鼠IgG以及10 μl藻紅蛋白抗CD3抗體，置入4℃冰箱中反應(yīng)30 min。⑤加入3 ml紅細(xì)胞裂解液充分溶血，1 000 r/min離心2 min，除去上清液。⑥用洗液洗滌以及離心2次，使其體積恢復(fù)到0.5 ml，再加入50 ml固定液，采用流式細(xì)胞儀檢測。采用CellQuest軟件收集和分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者血清趨化因子含量比較 研究組血清IL-8、CCL20、RANTES、MCP-1等趨化因子的含量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

2.2兩組外周血CD3+T細(xì)胞表面受體表達(dá)比較 兩組外周血CD3+T細(xì)胞表面CXCR1、CCR6、CCR5、CCR2等趨化因子受體表達(dá)比較無顯著性差異〔研究組：對(duì)照組CXCR1(7.4±1.2)% vs (7.9±1.4)%、CCR6(2.6±2.1)% vs(2.4±1.9)%、CCR5(13.3±1.6)% vs (12.9±1.3)%、CCR2(6.4±1.1)% vs (6.7±1.0)%〕(P>0.05)。

表1 兩組患者血清趨化因子含量及陽性率比較

3 結(jié) 論

臨床研究發(fā)現(xiàn)，趨化因子及其受體與乳腺癌等多種惡性腫瘤發(fā)展及轉(zhuǎn)移有著密切聯(lián)系。一方面，一部分趨化因子可增強(qiáng)宿主抗腫瘤侵入特異性或者固有免疫反應(yīng)；另一方面，部分趨化因子可通過促進(jìn)腫瘤組織血管生成和癌癥細(xì)胞增殖從而引起腫瘤加快生長和轉(zhuǎn)移〔4～7〕。趨化因子相互作用可促成偽足形成及引起細(xì)胞膜皺褶，從而誘導(dǎo)癌癥細(xì)胞發(fā)生趨化性遷移，最終導(dǎo)致癌癥細(xì)胞從原發(fā)部位黏附，并借助血管基底膜以及細(xì)胞外基質(zhì)膜通道進(jìn)入到血液循環(huán)中，且轉(zhuǎn)移到特定器官中。腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移并不是一個(gè)隨機(jī)、被動(dòng)的過程，而是主動(dòng)的。起源于不同器官及組織腫瘤的轉(zhuǎn)移方式均有其特定性， 是靶器官與癌癥細(xì)胞多種特異性趨化因子及其受體之間相互作用的結(jié)果〔8～10〕。

趨化因子可分為CXC、CC、C、CX3C等四類，CXC類趨化因子根據(jù)是否有ELR基序可分為ELR-CXC和non-ELR-CXC兩類。研究發(fā)現(xiàn)ELR-CXC趨化因子具有高效的促血管生長作用，如IL-8不僅能夠直接刺激腫瘤細(xì)胞生長，還能促血管生成，間接加快腫瘤生長及轉(zhuǎn)移〔11，12〕。RANTES是在活化時(shí)被調(diào)節(jié)的一類由正常T細(xì)胞表達(dá)以及分泌的蛋白， 是提示乳腺癌生長、演進(jìn)以及轉(zhuǎn)移的可靠標(biāo)記物。MCP-1在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞募集、腫瘤生長轉(zhuǎn)移以及抗腫瘤免疫過程中作用明顯，是目前臨床研究最廣泛并且深入的一種趨化因子。趨化因子CCL20又稱為巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-3α(MIP-3α)，其受體即CCR6，屬七次跨膜孤兒受體，多在異型T細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、B細(xì)胞以及未成熟的樹突細(xì)胞上表達(dá)〔13〕。CCL20及其受體間的作用在B細(xì)胞發(fā)育、分化、未成熟樹突細(xì)胞的介導(dǎo)及記憶性T細(xì)胞炎癥部位遷移等過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用〔14〕。

本研究說明外周血趨化因子受體表達(dá)水平和乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展無顯著相關(guān)性。提示上述趨化因子可能參與乳腺癌發(fā)病機(jī)制，并且作用顯著。

綜上，乳腺癌患者外周血中IL-8、CCL20、RANTES、MCP-1等趨化因子濃度可作為理想的乳腺癌轉(zhuǎn)移預(yù)測指標(biāo)，CCL20、RANTES異常升高在乳腺癌的發(fā)病及進(jìn)展中可能發(fā)揮著作用，IL-8、MCP-1 高表達(dá)可能預(yù)示預(yù)后較差。

4 參考文獻(xiàn)

1高 松,馬小鵬,劉巖巖,等.趨化因子SDF-1α生物半衰期預(yù)測乳腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移〔J〕.中華普通外科雜志,2010；25(11)：907-9.

2魏 文,張懿敏,孫圣榮,等.CCL5對(duì)MCF-7中細(xì)胞增殖能力及CD44+CD24-亞群比例的影響〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2010；27(3)：348-9.

3涂 毅,李娟娟,孫圣榮.siRNA干擾Ezrin表達(dá)對(duì)CCL5介導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2010；27(6)：702-4.

4郭滿盈,王 棟,王偉明.趨化因子CCL20及其受體CCR6在乳腺癌患者外周血中的表達(dá)及意義〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011；26(10)：684-5.

5Adndre F,Cabioglu N,Assi H,etal.Expression of chemokine receptors predicts the site of metastatic relapse in patients with axillary node positive primary breast cancer〔J〕.Ann Oncol,2006；17(6)：945-51.

6郭滿盈,陳 揚(yáng),徐利民，等.老年乳腺癌患者外周血趨化因子及其受體的表達(dá)〔J〕.中國醫(yī)師進(jìn)修雜志,2012；35(29):1-3.

7郭滿盈,王 棟,王偉明，等.趨化因子CCL20及其受體CCR6在乳腺癌患者外周血中的表達(dá)及意義〔J〕.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011；26(10):683-5.

8唐善浩,裴仁治,馬俊霞,等.趨化因子與多發(fā)性骨髓瘤療效及預(yù)后關(guān)系的研究〔J〕.中國醫(yī)師進(jìn)修雜志,2009；32(25)：21-2.

9隗立兵,康 驊.老年人乳腺癌的特點(diǎn)及其治療策略〔J〕.中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2010；29(10)：875-8.

10郭滿盈,陳 揚(yáng),王 棟，等.乳腺癌患者外周血中趨化因子及其受體的研究〔J〕.國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2010；31(1):54-5.

11王緒娟,金從國,陳曉群，等.乳腺癌患者外周血及組織中CXCR4與CCR5 表達(dá)水平的初步研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2009；16(15):1159-62.

12郭滿盈,陳 揚(yáng),徐利民.老年乳腺癌患者外周血趨化因子及其受體的表達(dá)〔J〕.中國醫(yī)師進(jìn)修雜志,2012；35(29)：1-2.

13漆起貴,李正艷,王玉鳳.CCL18、IL-6及TNF-α在乳腺癌患者血清中表達(dá)水平關(guān)系的探討〔J〕.重慶醫(yī)學(xué),2013；42(10)：1095-7.

14Byeong CL,Tae HL,Shalom A,etal.Involvement of the chemokine receptor CXCR4 and its ligand stromal cell-derived factor 1a in breast cancer cell migration through human brain microvascular endothelial cells〔J〕.Mol Cancer Res,2004；2(6):327-38.