食管癌、癌旁組織中P53、MDR-1基因的表達

黃志軍

(福建醫科大學附屬第二醫院，福建 福州 362000)

食管癌影響連接咽喉和胃部的食管，是食管鱗狀上皮惡性腫瘤，進行性咽下困難為最典型的臨床癥狀〔1〕。食管癌與其他惡性腫瘤一樣雖然有基因的變化背景，涉及多因素、多階段、多基因變異積累及相互作用的復雜過程，在分子水平上涉及眾多原癌基因、抑癌基因以及蛋白質的改變〔2〕。P53基因是一種與癌癥相關的基因。該基因能夠調節人體內某些其他基因的轉錄，進而起到抑制細胞增殖，修復損傷的細胞作用。P53基因的功能發生缺陷則可導致人體細胞異常增殖的發生〔3〕。P53基因的無效突變可導致其產生一種頂端截短的蛋白質，該蛋白質不能與DNA結合，無修復損傷細胞的活性。此外，這種突變還能夠直接降低癌細胞對化療藥物的敏感性，誘導癌細胞產生抗藥性〔4〕。本研究探討食道癌和癌旁組織中P53、MDR基因的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究中資料來自于我院2011年6月至2012年6月間接受手術治療的50例食管癌患者，所有患者均為食管鱗癌，符合臨床診斷標準，并經病理學確診。其中男37例，女13例，年齡60～73歲，平均年齡(67.6±2.4)歲。病變部位：胸上段11例，胸中段34例，胸下段5例。分化程度：高度分化17例，中度分化19例，低度分化14例。病理類型：潰瘍型9例，縮窄型3例，蕈傘型15例，髓質型23例。另取食管正常黏膜標本50份、非典型增生標本50份，均取自癌旁組織，均經病理學確診。

1.2方法

1.2.1P53檢測方法 采用免疫組化ABC法，試劑采用美國Maxim Biotech In產品，即用型單克隆抗體、免疫組化SP試劑盒均由Neo Markers公司提供，鼠抗P53單克隆抗體由上海華美公司提供。并以PBS代替一抗做陰性對照。根據P53著色強度評價如下：陰性(-)：未見陽性腫瘤細胞；弱陽性(+)：組織細胞染色淡或陽性細胞<20%；中度陽性()：染色適中或陽性細胞20%～50%；強陽性()：染色深或陽性細胞>50%。

1.2.2MDR基因檢測方法 RNA 提取采用異硫氰酸胍一步法〔5〕。上游引物5'-CCCATCATTGCAATAGCGG-3'；下游引物5'-GTTCAACTTCTGCTCCTGA-3'；擴增片段長度為167 bp，反應體系50 μl,總體積包含有0.2 mmol/L dNTP,1 μmol/L上、下游引物,3 U TaqDNA多聚酶,1×PCR緩沖液。酶切后DNA 1 μg充分混勻后，覆蓋石蠟,進行循環擴增。RT-PCR逆轉錄反應條件為42℃30 min。PCR反應條件為94℃ 5 min；94℃ 1 min；50℃ 1 min；72℃ 1 min。35 個循環后延伸5 min。取10 μg擴增產物在2%瓊脂糖凝膠中電泳,電壓100 V，電泳120 min后,紫外透射檢測電泳帶并照相。

1.3統計學方法 數據采用SPSS17.0軟件包進行統計學分析，計數資料采用百分數表示，采用χ2檢驗，用二項Logistic回歸模型對手術比例進行多因素分析。

2 結 果

2.1不同食管癌組織中P53的表達 本研究3組標本中食管鱗癌患者P53陽性為68%(34/50)，癌旁正常黏膜P53陽性為54%(27/50)，癌旁非典型增生P53陽性為70%(35/50)。

2.2P53與MDR-1的關系 食管癌組織中P53陽性表達34例中MDR-1陽性表達13例，16例P53陰性表達中9例MDR-1陰性表達；二者表達有高度相關性。

2.3不同食管癌組織MDR-1的表達 高度分化組織中MDR-1的表達(n=17，0.38±0.061)與中度分化(n=19，0.325±0.042)比較差異有統計學意義(P<0.01)；中度分化組織中MDR-1的表達與低度分化(n=14，0.217±0.087)比較差異有統計學意義(P<0.01)；低度分化組織中MDR-1的表達與正常組織(n=50，0.076±0.030)比較差異有統計學意義(P<0.01)。

2.4P53在不同食管癌臨床特征中的表達 在不同年齡、腫瘤大小、組織學分級上P53基因的表達無顯著意義(P>0.05)。見表1。

表1 P53在不同食管癌臨床特征中的表達〔n(%)〕

3 討 論

P53基因與人類腫瘤相關性高，是一種重要的抑癌基因。P53基因編碼的53 kD的蛋白在細胞周期中起重要的調節作用，正常情況下具有生長抑制作用，在細胞周期中對DNA損害的反應、細胞死亡和分化等方面有重要作用〔6〕。正常的P53基因編碼53 kD的蛋白，在細胞周期中起重要的調節作用，對細胞癌變有抑制作用，并由此而得名。當該基因發生點突變、缺失和滅活時，即由野生型轉變為突變型，反而促進腫瘤的發生和發展〔7〕。P53基因(抑癌基因)的缺失，引起家族性各種不同癌癥的發生，這些不同的癌癥包括乳癌、腦瘤、惡性肉瘤、骨癌等，很多都是在年輕時發生的，是一種罕見的常染色體顯性遺傳疾病〔8〕。主要的特征有早發性的癌癥(小于45歲)、同時發生多種部位癌癥或肉瘤。確定的診治需要經基因檢測確定。

P53抑癌基因是生物體內一種抑制細胞轉變癌細胞的基因〔9〕。細胞中本來就有致癌基因(oncogene)及抑癌基因的存在，只要一方產生病變而失去平衡，癌癥就可能會發生。當P53基因發生突變后，由于空間構象影響到轉錄活化功能及P53蛋白的磷酸化過程，這不僅失去抑制腫瘤增殖的作用，而且突變本身又使該基因具備癌基因的功能〔10〕。突變的P53形成的寡居蛋白不能結合DNA，使得一些癌變基因轉錄失控導致腫瘤發生〔11〕。值得提出的是，所謂“抑癌基因”也是在腫瘤研究過程中命名的。事實上，細胞抑癌基因也是細胞染色DNA的正常組成成分，具有重要的生理功能。除了腫瘤之外，它們在多種疾病中發揮重要作用〔12〕。本研究提示MDR 基因及突變型P53在食管癌、癌旁組織中均呈高水平表達，癌旁組織中MDR有表達，P53基因突變早于組織形態學改變。目前研究均表明P53基因突變及缺失均預示著腫瘤預后差，對常規化療不敏感，腫瘤易發生轉移。因此，正確評價P53基因狀態至關重要。

4 參考文獻

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