鈉葡萄糖轉運子1和表皮生長因子受體2 mRNA在結直腸癌中表達的相關性

齊慧生 張志勇 吳晨鵬 王 曄 劉麗云 崔永興 徐晉珩 胡月明

(唐山市工人醫院呼吸內科，河北 唐山 063000)

在我國，結直腸癌(CRC)發病率呈逐年上升趨勢，嚴重危害人體健康。鈉葡萄糖轉運子1(SGLT-1)作為一種轉運載體主要是介導葡萄糖和半乳糖的吸收，可促進腫瘤細胞對葡萄糖的吸收為其生長提供營養〔1〕。表皮生長因子受體-2(HER-2)在腫瘤發展的不同階段過程中發揮作用。本研究擬檢測CRC組織及正常黏膜組織中SGLT-1和HER-2 mRNA表達，研究其臨床特點的差異及在預后判斷中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集唐山市工人醫院2008年CRC患者的腫瘤組織35例作為腫瘤組，離體后立即置于液氮凍存，存于-80℃冰箱備用。其中男20例，女15例，年齡31～82〔平均(64.7±12.3)〕歲。病理類型：黏液癌10例，非黏液癌25例(本組納入病例無其他組織學類型)；分化程度：高分化2例，中分化25例，低分化6例，資料缺失2例；無淋巴結轉移17例，有淋巴結轉移18例(根據術后病理確定有無淋巴結轉移)。隨機選取10例正常組織作為對照組。兩組病例性別構成、年齡等常規指標比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1主要試劑 Trizol、反轉錄試劑盒、SYBR Green均購自GeneCopoeia公司。SGLT-1引物：正義5′-GCTGTTCATCCCTGGTGCT-3′，反義5′-ACATCTGGAATGGGCTTG-3′，HER-2引物：正義5′- TGCTGTCCTGTTCACCACTC-3′，反義：5′-TCATCCTCATCATCTTCACATTG-3′，內參β-Actin引物：正義5′-GTCTTCCCCTCCATCGTG-3′，反義5′-AGGGTGAGGATGCCTCTC-3′，均為賽百盛公司合成。

1.2.2組織總RNA提取 在20 mg新鮮組織(CRC組織)中加入1 ml Trizol混勻，按說明書操作提取總RNA，并計算RNA OD260/OD280比值，要求在 1.8～2.2。

1.2.3cDNA合成及real-time PCR檢測 以提取的組織總RNA為模板，以Oligo(dT)15為引物，按試劑盒說明書合成cDNA，逆轉錄反應總體系20 μl。反應條件：25℃ 10 min,40℃ 60 min,70℃ 10 min。取合成的cDNA 2 μl為模板，進行real-time PCR反應，反應條件：94℃ 4 min,94℃ 20 s,60℃ 30 s,72℃ 30 s，進行35個循環。以上各步驟中，反應體系及試劑用量均按說明書進行操作。SGLT-1和HER-2的相對表達量采用2-△Ct法計算。

1.3統計學處理 應用SPSS13.0軟件進行分析，組間比較應用Mann-Whitney檢驗，采用spearman進行相關性研究。

2 結 果

2.1SGLT-1和HER-2 mRNA在CRC組與中的表達 SGLT-1和HER-2 mRNA在CRC組中相對比分別為0.0424±0.049和0.003 4±0.009 23，在正常組中分別為0.007 2±0.004和0.000 8±0.000 77，差異有統計學意義(P=0.003 3，0.032 7)。

2.2CRC中 SGLT-1 mRNA的表達與臨床病理特征的關系 CRC組中SGLT-1 mRNA在不同性別、年齡、組織類型、分化程度以及有無淋巴轉移中的表達量差別均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.3CRC中HER-2 mRNA的表達與臨床病理特征的關系 HER-2 mRNA在淋巴結轉移組中的表達量明顯高于無淋巴結轉移組，而在不同性別、年齡、組織類型、分化程度中的表達量差別均無統計學意義(均P>0.05)。見表1。

2.4CRC中SGLT-1和HER-2 mRNA相關性分析 CRC組中SGLT-1和HER-2 mRNA的表達呈正相關(r=0.416，P=0.016)。見圖1。

表1 結直腸癌中的SGLT-1 mRNA、HER-2 mRNA的表達與臨床病理特征的關系

圖1 CRC中SGLT-1和 HER-2 mRNA 表達的關系

3 討 論

SGLT-1可促進腫瘤細胞對葡萄糖的吸收為其生長提供營養，可能成為腫瘤治療的潛在靶點〔2〕。Hanabata〔2〕在口腔鱗狀細胞癌的研究中發現SGLT-1蛋白均過度表達，由此認為SGLT-1通過促進腫瘤細胞對葡萄糖的攝取，影響口腔鱗狀細胞癌的發生發展。Casneuf等〔3〕研究結果顯示SGLT-1表達情況同胰腺癌患者的無病生存期密切相關，其可作為評估胰腺癌患者預后的分子標記。Guo等〔4〕表明SGLT-1在CRC組織中的表達明顯高于正常組織且同臨床分期密切相關。腫瘤細胞生長旺盛，需要足夠的營養物質維持其生長，因此需要大量的SGLT-1接到葡萄糖的轉運，故SGLT-1 mRNA在腫瘤中的表達量明顯增高。本實驗提示其在CRC的形成過程中起重要的促進作用。

近年有文獻報道原癌基因HER-2在CRC的發生、發展過程中發揮重要作用，在人類腫瘤發生中HER-2基因是改變頻率最高的原癌基因之一，被激活后促進細胞增殖和腫瘤發生。HER-2基因的致癌機制為抑制凋亡、促進存活、促進腫瘤新生血管形成和增加腫瘤細胞的侵襲力〔5〕。Cunninglmm等〔6〕發現HER-2的表達與年齡、性別和部位無關，與淋巴結轉移密切相關。張建賓等〔7〕對CRC患者進行生存分析，HER-2過表達與CRC的不良預后有關，且可作為預后的獨立因素。HER-2可作為評估CRC患者惡性程度及預后的生物學指標。本實驗提示二者在CRC的形成過程中起重要的促進作用。不僅如此，本實驗還表明HER-2蛋白的表達在腫瘤細胞侵襲性生長或轉移中起一定的作用。HER-2蛋白的表達與CRC病理特點和生物學行為有密切聯系，與CRC侵襲、轉移和預后有關，故檢測HER-2 mRNA的表達，可作為CRC侵襲轉移能力的評估依據〔8〕。本研究同時提示SGLT-1和HER-2 mRNA可能存在某種聯系，但具體機制還需進一步研究。

4 參考文獻

1Ravdin PM.Should HER-2 status be routinely measured for all breast cancer patients〔J〕.Semin Oncol，1999；26(4 Suppl 12)：117-23.

2Hanabata Y.Expression analysis of EGFR and SGLT-1 in oral squamous cell carcinoma〔J〕.Kokubyo Gakkai Zasshi，2011；78(1)：12-8.

3Casneuf VF，Fonteyne P，Van Damme N，etal.Expression of SGLT-1，Bcl-2 and p53 in primary pancreatic cancer related to survival〔J〕.Cancer Invest，2008；26(8)：852-9.

4Guo GF，Cai YC，Zhang B，etal.Overexpression of SGLT1 and EGFR in colorectal cancer showing a correlation with the prognosis〔J〕.Med Oncol，2011；28(Suppl 1)：S197-203.

5Tan M,Li P, Klos KS，etal.ErbB2 promotes Src synthesis and stability：Novel mechanisms of Src activation that confer breast cancer metastasis〔J〕.Cancer Res，2005；65(5)：1858-67.

6Cunninglmm D，Humblet Y，Siena S，etal.Cetuximab monotherapy and cetuximab plus irinotecan in irinotecan-refractory metastatic coloreotal cancer〔J〕.N Engl J Med，2004；351(4)：337-45.

7張建賓，陳莉兵.c-erbB-2過表達、nm23低表達與結直腸癌預后不良的關系〔J〕.中華病理學雜志，2003；32 (2)：115-9.

8吳桂麗，張 力.癌蛋白HER-2在直腸癌組織中表達的臨床意義〔J〕.中國實用醫藥，2008；3(10)：86-7.