HPLC法測定注射用甲硝唑磷酸二鈉的含量

陜西博森生物制藥股份集團有限公司，陜西 西安 710118

HPLC法測定注射用甲硝唑磷酸二鈉的含量

王英許波陳峻劉艷玲郝群群

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目的建立高效液相色譜法測定注射用甲硝唑磷酸二鈉含量的方法。方法采用Shim-pack VP-ODS(4.6mm×250mm，5μm)；以0.68%磷酸二氫鉀溶液(用氫氧化鈉試液調節pH至6.0)-甲醇(80 ∶20)為流動相，流速為1.0ml·min-1，檢測波長為321nm，進樣體積為20μl。結果甲硝唑磷酸二鈉濃度在82.7～248.1mg·L-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r= 0.999 9)；平均加樣回收率為100.5%(RSD=0.49%，n=9)。結論本方法簡單、快速、準確，穩定，重現性好。

注射用甲硝唑磷酸二鈉；HPLC；含量

甲硝唑磷酸二鈉(Metronidazole Disodium Phosphate)是一種硝基咪唑類抗生素，具有殺菌能力強，抗菌譜廣，不易產生耐藥性，價格低廉，療效好，對厭氧菌及原蟲有獨特的殺滅作用的特點。甲硝唑[1]及其磷酸鹽甲硝唑磷酸二鈉(含其制劑)的質量標準[2、3]的含量測定方法均為非水滴定法，用電位法指示終點。亦有文獻報道[4]對甲硝唑磷酸二鈉注射劑采用紫外分光光度法進行含量測定，但上述方法均不能完全排除有關物質的干擾，結果的準確性較低。本文采用了高效液相色譜法測定注射用甲硝唑磷酸二鈉的含量。結果表明，該方法分離度高，重現性好，且此方法簡單、快速、準確，穩定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC-2010AHT高效液相色譜儀；Shim-pack VP-ODS(4.6mm×250mm，5μm)。

1.2 試藥 甲硝唑磷酸二鈉對照品(自制，乙醇重結晶)；注射用甲硝唑磷酸二鈉樣品(自制，批號：20120901，20120903，20120905)。甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Shim-pack VP-ODS(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：0.68%磷酸二氫鉀溶液(用氫氧化鈉試液調節pH至6.0)-甲醇=80∶20；檢測波長為321nm；柱溫：室溫；流速：1.0ml·min-1；進樣體積：20μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的配制 取用五氧化二磷減壓干燥至恒重的甲硝唑磷酸二鈉對照品適量，精密稱定，加流動相制成每mL約含0.08mg甲硝唑磷酸二鈉的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的配制 取注射用甲硝唑磷酸二鈉適量，精密稱定，加流動相制成每ml約含0.08mg甲硝唑磷酸二鈉的溶液，即得。

2.3 方法學的考察

2.3.1 系統適用性試驗 精密量取“2.2.1”項下溶液、“2.2.2”項下溶液及流動相各20μl注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，試驗結果表明：甲硝唑磷酸二鈉與其他物質分離良好，且流動相在此條件下無干擾，色譜圖見圖1。

A對照品；B供試品；C流動相；1 甲硝唑磷酸二鈉峰

2.3.2 線性關系考察 精密稱取用五氧化二磷減壓至恒重的甲硝唑磷酸二鈉對照品8.15mg，置100ml棕色量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精量取10、15、20、25、30μl，注入液相色譜儀，按照“2.1”項下色譜條件進行檢測，記錄色譜圖及峰面積。以甲硝唑磷酸二鈉質量濃度C(mg·L-1)為橫坐標，以峰面積A為縱坐標繪制標準曲線，并進行回歸分析，得回歸方程：Y = 13586X+ 93175(r= 0.999 9)。結果表明，甲硝唑磷酸二鈉在82.7～248.1mg·l-1范圍內呈良好的線性關系。

2.3.3 精密度試驗 精密量取“2.2.1”項下溶液20μl注入液相色譜儀，連續進樣6次，記錄色譜圖，測定甲硝唑磷酸二鈉的精密度，其峰面積的RSD為0.25%，表明該方法的精密度良好。

2.3.4 重復性試驗 取同一批號(20120901)的樣品6份，依照“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，測定甲硝唑磷酸二鈉的含量，其相對標準偏差RSD為0.42%，表明本法重現性較好。

2.3.5 穩定性試驗 取新制備的供試品溶液，分別于0、6、12，、16、24h進樣20μl，記錄色譜圖及峰面積，計算RSD。結果表明甲硝唑磷酸二鈉在24h內穩定。

2.3.6 回收率試驗 取甲硝唑磷酸二鈉約32、40、48mg，三個劑量組各三份，精密稱定，分別置100ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度。取5ml加流動相稀釋至25ml，作為供試品溶液，另取用五氧化二磷減壓干燥至恒重的甲硝唑磷酸二鈉對照品適量，加流動相制成每1ml約含0.08mg的溶液，作為對照溶液。按照“2.1”項下色譜條件進行檢測，測定注射用甲硝唑磷酸二鈉含量，平均回收率為100.5 %(RSD為0.5%)，表明本法具有良好的回收率。

2.4.7 樣品測定 取連續生產的3批樣品按正文供試品溶液的制備方法制備，并按擬定色譜條件測定，結果批號20120901、20120903及20120905三批注射用甲硝唑磷酸二鈉中甲硝唑磷酸二鈉含量分別為標示量的100.2%，99.9%和100.0%。

3 討論

3.1 甲硝唑磷酸二鈉在水中易溶，參考文獻[4]含量測定的溶劑，最初選擇水為注射用甲硝唑磷酸二鈉的溶劑，但經試驗證實，水為溶劑時，溶液的穩定性差，故選擇流動相作為檢測甲硝唑磷酸二鈉的溶劑。

3.2 在色譜系統流動相的選擇中，0.68%磷酸二氫鉀溶液(用氫氧化鈉試液調節pH至6.0)-甲醇(80:20)為流動相時，甲硝唑磷酸二鈉峰形對稱，保留時間相對合適(4～5min)，并且與其他雜質峰均能達到基線分離，分離度符合要求。

[1] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部)[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010：153.

[2] YBH1581205，國家食品藥品監督管理局標準[S]．

[3] WS1-(X-169)-97Z-2001，甲硝唑磷酸二鈉(含其制劑)的質量標準[S]．

[4] 傅素君，陳彤．紫外分光光度法測定注射用甲硝唑磷酸二鈉的含量[J]．華西藥學雜志，1998，13(2)：114-115．

DeterminationofMetronidazoleDisodiumPhosphateforInjectionbyHPLC

WANG Ying XU Bo CHEN Jun LIU Yan-ling HAO Qun-qun

Shanxi Bosen Bio-Pharmaceutical Group Co.,Ltd. Xi’an 710118,China

ObjectiveTo establish the HPLC method for determination of Metronidazole Disodium Phosphate.MethodAn HPLC method was developed, chromatographic conditions included a Shim-pack VP-ODS colunm with the mobile phase 0.68% buffer stock solution(With sodium hydroxide solution to adjust pH to 6.0)- methyl alcohol(80∶20), The flow rate of 1.0 mL·min-1, detection wavelength of 321 nm, sample amount to 20μL.Resultsthe linearity was good in the range of 82.7mg～248.1mg·L-1(r= 0.999 9); The average sample recovery rate was100.5%(RSD=0.49%，n=9).ConclusionThis method is simple, rapid, accurate, stable, with good reproducibility.

Metronidazole Disodium Phosphate for Injection; HPLC; content

R286.0

A

1007-8517(2014)14-0024-02

2014.06.04)