薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中淫羊藿苷

貴州省黔南州食品藥品檢驗所，貴州 都勻 558000

薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中淫羊藿苷

徐作剛段萍萬紅才任永奇

貴州省黔南州食品藥品檢驗所，貴州 都勻 558000

目的薄層色譜法鑒別金烏骨通膠囊中的淫羊藿苷。方法采用薄層色譜法對制劑中含有淫羊藿苷進行定性鑒別。結果薄層色譜法檢出淫羊藿苷，且斑點清晰。結論該方法可作為金烏骨通膠囊中淫羊藿的定性鑒別方法，結果穩定性、重復性較好。

金烏骨通膠囊；淫羊藿；薄層色譜

金烏骨通膠囊是由金毛狗脊、木瓜、烏梢蛇、葛根、淫羊藿、姜黃、補骨脂等多味藥組成，具有滋補肝腎，祛風除濕，活血通絡的功效。用于肝腎不足，風寒濕痹，骨質疏松，骨質增生引起的腰腿酸痛、肢體麻木等癥[1]。其中淫羊藿具有補腎陽，強筋骨，袪風濕的作用，用于腎陽虛衰，陽痿遺精，筋骨痿軟，風濕痹痛，麻木拘攣[2](P308)。淫羊藿藥材中主要含有淫羊藿苷、淫羊藿次苷、巫山淫羊藿苷、寶藿苷VI、生物堿、揮發油等。本實驗選用淫羊藿苷為對照對藥品中的淫羊藿進行定性鑒別，該方法簡便易操作，結果重復性較好。

1 儀器與試藥

SK250LHC超聲波清洗器(上?？茖x器有限公司)，梅特勒AG135電子天平，卡瑪Linomat5半自動點樣儀。淫羊藿苷對照品(批號：110737-200415)購于中國藥品生物制品檢定所；樣品和缺淫羊藿陰性樣品由貴州盛世龍方制藥有限公司提供，硅膠G預制板(批號：20090406)和硅膠G(批號：0110916)(青島海洋化工廠分廠)；水為純凈水(娃哈哈)；其它試劑均為分析純。

2 方法[3]與結果

2.1 提取方法的考察 分別稱取金烏骨通膠囊內容物細粉1.0g，按下述方法處理：①加乙酸乙酯10ml，超聲提取15分鐘；②加70%乙醇溶液10ml，超聲提取30分鐘；③加甲醇10ml，超聲提取30分鐘；④加乙醇20ml，超聲提取30分鐘[2](P307)。提取后，放冷，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2ml超聲使溶解，靜置，取上清液為供試品溶液①-④。取缺淫羊藿陰性1.0g，照方法④提取，作為陰性對照溶液。另取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液。

取上述各供試品溶液、陰性對照溶液、對照品溶液各3μl，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水 (13.5:6:2 ) 靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱至斑點顯色清晰。結果方法①無對應主斑點，方法②③主斑點清晰但背景較深，方法④主斑點清晰且背景較淺，陰性對照無干擾。故選取方法④為淫羊藿苷薄層鑒別的提取方法。

2.2 展開系統的考察 取三個批號金烏骨通膠囊按提取方法④分別制成供試品溶液。取供試品溶液、陰性對照溶液和對照品溶液各3μl，點于薄層板上，分別在下述各展開系統中展開：①硅膠G板，氯仿-甲醇-丁酮 (1:2:2)；②硅膠G板，氯仿-甲醇-水 (13.5:6:2)靜置至澄清的下層溶液；③硅膠H板，乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水 (10:1:1:1)[2](P307)。展開后，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱至斑點顯色清晰。結果系統①分離效果差，系統②分離效果較好，主斑點位置居中，陰性無干擾，背景干擾小，系統③主斑點位置對應不理想，陰性對照無干擾。故選取系統②為淫羊藿苷薄層鑒別展開系統。

2.3 顯色方法的考察 取三個批號金烏骨通膠囊按提取方法④分別制成供試品溶液。取供試品溶液、陰性對照溶液和對照品溶液各3μl，分別點于硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13.5:6:2)靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，分別以下述各方法顯色：①噴以5%三氯化鐵乙醇溶液，晾干，日光下檢視，顯墨綠色斑點；②噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，在紫外燈(365nm)下檢視，顯橙紅色熒光斑點；③噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱，日光下檢視，顯黃綠色斑點。結果顯色劑①斑點略顯模糊邊界不明顯，色彩與背景對比不強；顯色劑②斑點熒光較弱，與背景熒光混合較嚴重，斑點邊界不明顯，不易辨識；顯色劑③斑點顏色鮮明，與背景顏色對比較強，斑點邊界明顯；陰性對照無干擾。故選取顯色方法③為淫羊藿苷薄層鑒別的顯色方法。

2.4 點樣量的考察 取金烏骨通膠囊按提取方法④制成供試品溶液。取供試品溶液2、3、4、5、6μl、陰性對照溶液和對照品溶液各3μl，點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水 ( 13.5:6:2)靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃下加熱至斑點顯色清晰。結果點樣量較小斑點不夠清晰，點樣量較大則背景顏色較深，點樣量5μl時斑點顯色清晰且背景干擾較小，陰性對照無干擾。

故選取5μl為淫羊藿苷薄層鑒別的點樣體積。

2.5 耐用性考察 按照國家藥典委員會“中藥分析方法驗證指導原則實施細則”的相關要求，進行以下耐用性考察：①溫度的考察：進行了低溫(4℃)、室溫(24℃)、高溫(40℃)的考察，分離結果均較好。②濕度的考察：進行了低濕度(25%)、中等濕度(60%)和高濕度(75%)的考察，結果表明在上述條件下都能較好分離。

3 討論

淫羊藿為金烏骨通膠囊中的重要組成藥味，在生產中的質量控制和流通中監督檢查均應將其作為藥品質量的指標之一，而原標準中此項目暫缺，本方法可對其進行有效補充。根據上述不同條件下的實驗結果進行組合，金烏骨通膠囊中淫羊藿苷的薄層色譜鑒別方法為：取本品內容物1.0g，加乙醇20ml，超聲提取30分鐘，放冷，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2ml超聲使溶解，靜置，取上清液為供試品溶液。取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液，照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13.5:6:2)靜置至澄清的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃下加熱，日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同黃綠色的斑點。

展開系統的考察中，系統③為淫羊藿薄層鑒別的經典系統，但在反復試驗后發現其展開效果并不理想，雖斑點清晰位置適中，但由于藥品中其他物質的干擾，對照品主斑點位置總是明顯高于樣品中主斑點位置，故最終選用無此現象的系統②。缺淫羊藿陰性對照在此薄層色譜系統中無干擾，故可采用淫羊藿苷作為對照品溶液對藥品中的淫羊藿進行定性鑒別；色譜中主斑點清晰明顯，位置居中，無論是預制板還是手工板，結果穩定，重現性較好。此方法可作為金烏骨通膠囊中淫羊藿藥材的薄層色譜定性鑒別。

[1]WS-10140(ZD-0140)-2002，金烏骨通膠囊[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

國家藥典委員會國家藥品標準提高研究課題(項目編號：2011-530)。

R284.1

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1007-8517(2014)02-0012-02

2013.12.07)