Survivin在正常組織、癌旁組織及子宮內膜癌組織中的表達

張旭 王喻 李小毛

·臨床醫學·

Survivin在正常組織、癌旁組織及子宮內膜癌組織中的表達

張旭 王喻 李小毛

目的 研究正常組織、癌旁組織以及子宮內膜癌組織中凋亡抑制基因(Survivin)的表達情況, 并探討其相應的臨床病理意義。方法 應用免疫組化檢測30例正常組織、11例癌旁組織以及30例子宮內膜癌組織中Survivin的表達情況, 并結合其臨床病理因素進行相關分析。結果 Survivin在子宮內膜癌中的陽性表達率為93.33%(28/30), 顯著高于正常子宮內膜(26.67%) (P＜0.001), 但與癌旁組織中的Survivin表達率(81.82%)差異無統計學意義(P＞0.05)。結論 Survivin在子宮內膜癌中的表達上調在子宮內膜癌發生、發展有重要意義, 包含Survivin的聯合檢測在子宮內膜癌的早期診斷方面具有指導意義。

子宮內膜癌(endometrial carcinoma, EC)是女性生殖系統常見的惡性腫瘤, 近年來其發病率有逐年上升的趨勢。研究表明, 子宮內膜的癌變過程與細胞凋亡減少、過程紊亂密切相關［1］。Survivin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis protein, IAP)的成員之一, 是近來研究比較熱門的基因［2］。目前, 國內外關于Survivin與子宮內膜癌關系的研究多有報道, 尚無統一結論［3-7］。本研究采用免疫組化檢測Survivin蛋白在子宮內膜癌、正常子宮內膜及癌旁組織中的表達情況, 并結合相關臨床病理學特征及其他臨床指標, 分析Survivin蛋白在子宮內膜癌變過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2005～2013年在中山大學附屬第三醫院婦科診治, 經手術-病理確診為子宮內膜癌患者的存檔病理蠟塊30例, 分別行Survivin蛋白檢測及HE染色。同時選取同期因子宮肌瘤行全子宮切除手術的30例正常內膜(增生期、分泌期各15例)作對照, 并于癌組織旁0.4 cm腫瘤與正常組織交界處取癌旁組織11例。所選患者均具有完整的臨床病理學資料, 年齡44～76歲, 術前未接受內分泌等治療。根據子宮內膜癌手術-病理分期(FIGO, 2000)劃分：Ⅰ期23例、Ⅱ期3例、Ⅲ期3例、Ⅳ期1例；無肌層浸潤6例, 淺肌層浸潤(＜1/2)14例, 深肌層浸潤(≥1/2)10例,發生淋巴結轉移者4例；按癌細胞分化程度分為G1級22例、G2級4例、G3級4例。

1.2 研究方法

1.2.1 試劑 Survivin一抗購于美國Santa Cruz公司, SP二抗試劑盒、DAB顯色試劑盒購于北京中杉金橋公司等。

1.2.2 標本來源 標本來自廣泛子宮或全子宮切除術后石蠟包埋子宮內膜組織。

1.2.3 實驗方法 采用免疫組化2步SP染色法：離體組織切片制片后, 烤片, 脫蠟, 修復, 山羊血清封閉, 一抗、二抗孵育, DAB顯色, 蘇木素染核, 透明, 封片, 鏡檢。以乳腺癌陽性切片作陽性對照, PBS緩沖液代替Survivin一抗作陰性對照。

1.3 判斷標準 Survivin蛋白常見于細胞漿, 偶見于細胞核, 以出現棕色顆粒樣沉著為陽性信號。每例均隨機觀察5個高倍視野(×400), 以陽性細胞占百分比率分別記0～4分:≤5%記0分, 6%～25%記1分, 26%～50%記2分, 51%～75%記3分, ＞75%記4分；陽性細胞染色深淺程度記0～3分：無色0分, 淡黃色1分, 棕黃色2分, 棕褐色3分。兩者所記分數乘積, 陰性(-)為0分, 弱陽性(+)為0～4分,中度陽性(++)為5～8分, 強陽性(+++)為9～12分。過表達為中度陽性和強陽性(++～+++)。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件, 協方差分析或單因素方差分析, 檢驗水準α=0.05。以 P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 Survivin在正常組織、癌旁組織及子宮內膜癌中的表達 Survivin在正常子宮內膜中的陽性率為26.67%(8/30),其中增生期為13.33%(2/15), 分泌期為40.00%(6/15), 均為弱陽性(+)表達；在癌旁組織中為81.82%(9/11)；在子宮內膜癌中為93.33%(28/30), 弱陽性(+)為26.67%(8/30),中度陽性(++)為50.00%(15/30), 強陽性(+++)為16.67%(5/30), 過表達率為66.67%(20/30)。以Survivin表達量作為因變量, 分組因素作為自變量, 年齡、是否絕經等作為協變量進行協方差分析, 發現控制混雜因素后,子宮內膜癌中的Survivin蛋白表達量高于正常組織, 差異有統計學意義(P＜0.001)；而采用單因素方差分析后發現,正常子宮內膜中Survivin蛋白表達量低于子宮內膜癌組織及癌旁組織, 差異有統計學意義(P＜0.05)；但子宮內膜癌與癌旁組織中Survivin蛋白的表達量差異無統計學意義(P＞0.05), 見表1。

表1 Survivin在正常組織、癌旁組織、子宮內膜癌組織中的表達 (n, %)

2.2 Survivin與臨床病理學特征的關系 統計結果顯示, Survivin的表達量與臨床分期(I～IV)、組織分化程度(G1～G3)、侵犯肌層(無、淺肌層、深肌層)、是否發生淋巴轉移、病理類型(腺癌、非腺癌)等經典影響預后的臨床病理學特征的相關系數比較, 差異無統計學意義(P＞0.05)。2.3 Survivin與其他臨床指標的關系 統計結果顯示, Survivin 的表達量與年齡(＜50歲、50～60歲、＞60歲)、是否絕經(是、否)、孕次(0次、1次、2次及以上)、產次(0次、1次、2次及以上)、流產次數(無、有)、CA199(＜35、≥35)、CA125(＜35、≥35)等其他臨床指標的相關系數差異無統計學意義(P＞0.05)。

3 討論

Survivin是近年發現的凋亡抑制蛋白家族成員, 通過下調Caspase的活性抑制細胞凋亡。Survivin過表達使正常細胞失去增殖周期中檢查點(checkpoint)的限制, 促進細胞異常增殖, 導致腫瘤發生［4-7］。本研究顯示, Survivin在正常子宮內膜中的表達(26.67%)低于癌旁組織(81.82%)及內膜癌組織(93.33%), 差異有統計學意義(P＜0.05)；但在子宮內膜癌(93.33%)與癌旁組織(81.82%)中的表達差異無統計學意義(P＞0.05)。這些結果均提示, 子宮內膜癌中Survivin表達上調, 推測Survivin的異常表達發生在內膜癌發生癌變的早期；Survivin表達陽性提示, 正常組織具有早期癌變的傾向, 因而通過檢測Survivin的表達具有早期診斷的價值。另外, 本研究發現, Survivin的表達與組織分化程度、臨床分期、肌層浸潤、是否淋巴轉移等影響預后的臨床病理學因素無關, 這同Erkanli、Pallares等［6,7］學者的研究結果一致, 但是同Takai、Lehner等［4,5］學者的研究結果不相符合, 其內部發生機制有待進一步深入研究。本研究還顯示, Survivin的表達與年齡、是否絕經、流產次數、孕產次、腫瘤標記物數值的高低等其他臨床相關因素無關, 國內外相關報道極少見。

綜上所述, 在子宮內膜癌高危人群中施行Survivin蛋白表達的檢測對于子宮內膜癌的早期診斷、高危人群的篩查具有重要意義, Survivin蛋白表達的上調可能在子宮內膜的早期癌變過程中扮演重要的角色, 檢測其表達并與正常組織含量對比具有早期診斷的價值, 這一相關性的內部分子機制尚不清楚, 有待進一步研究。

［1］ Temkin SM, Fleming G.Current treatment of metastatic endometrial cancer.Cancer Control, 2009, 16(1):38-45.

［2］ 李梅, 陳蕓, 胡早秀, 等.Survivin在乳腺癌中的表達及其臨床意義.實用醫學雜志, 2006, 33(4):2339-2340.

［3］ Mita AC, Mita MM, Nawrocki ST, et al.Survivin:key regulator of mitosis and apoptosis and novel target for cancer therapeutics.Clin Cancer Res, 2008, 14 (16):5000-5005.

［4］ Takai N, Miyazaki T, Nishida M, et al.Survivin expression correlates with clinical stage, histological grade, invasive behavior and survival rate in endometrial carcinoma.Cancer Lett, 2002, 184(1):105-116.

［5］ Lehner R, Enomoto T, Mc Gregor JA, et al.Correlation of survivin mRNA detection with histologic diagnosis in normal endomet rium and endomet rial carcinoma.Acta Obstet Gynecol Scand, 2002, 81(2):162.

［6］ Erkanli S, Bolat F, Kayaselcuk F, et al.COX-2 and survivin are overexp ressed and positively correlated in endometrial carcinoma.Gynecol Oncol, 2007, 104(2):324-325.

［7］ Pallares J, Martínez-Guitarte JL, Dolcet X, et al.Survivin expression

510630 中山大學附屬第三醫院