HPSE2在非小細胞肺癌中表達與預后的關系

張 珉 黃 波 張 玲 呂威力

HPSE2在非小細胞肺癌中表達與預后的關系

張 珉 黃 波 張 玲 呂威力

目的 檢測乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)在非小細胞肺癌(NSCLC)組織中的表達情況, 并探討其與NSCLC的臨床病理因素的關系。方法 采用免疫組織化學(S-P法)檢測82例NSCLC患者及10例癌旁正常肺組織中HPSE2的表達。結果 HPSE2主要定位于細胞漿, 在82例NSCLC組織中, 30例(37%)為高表達, 在非癌肺組織中弱表達或無明顯表達。HPSE2高表達同局部淋巴結轉移減少(P=0.012), 患者預后生存時間延長相關(P=0.027)。結論 HPSE2的表達與NSCLC局部淋巴結轉移減少及患者預后生存時間延長相關。

乙酰肝素酶-2；非小細胞肺癌；腫瘤標志物；免疫組織化學

肺癌一直都是全球范圍內高死亡率的惡性腫瘤, 并且死者中80%為非小細胞肺癌(non-small-cell lung cancer, NSCLC)患者, 由于腫瘤發生、發展過程中大量具有調控作用的細胞因子活性發生變化, 尋找上述活性分子。乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)屬于乙酰肝素酶家族［1］, 現已發現HPSE2在頭頸部腫瘤、卵巢腫瘤、宮頸腫瘤、直腸癌、胃癌組織中高表達并與腫瘤進展存在關聯［2-6］, 但HPSE2在NSCLC組織中的表達情況目前尚無報道, 本實驗將探討HPSE2在NSCLC組織中的表達水平及其與肺癌臨床病理因素之間的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2002年1月～2006年12月遼寧省腫瘤醫院手術切除并經病理確診的NSCLC標本82例, 其中49例具有完整隨訪資料。10例對照標本取自同期距離癌灶邊緣5 cm以上并經HE染色證實的正常肺組織。所有患者術前均未接受放化療。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學 所有標本均用10%中性福爾馬林固定, 石蠟包埋, 制成4 μm切片, 采用S-P法檢測HPSE2蛋白表達情況。HPSE2單克隆抗體購自美國Santa cruz公司, S-P法試劑盒及DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術公司。切片滴加HPSE2一抗(1:100)4℃濕盒內孵育過夜, 次日按照SP試劑盒說明書進行染色, DAB顯色, 蘇木素復染。以PBS代替一抗作為空白對照。細胞染色強度以胞漿著色陰性、淡黃色、黃棕色、深棕褐色分別記0、1、2、3分；染色范圍以著色細胞量占腫瘤細胞＜5%、5%～25%、26%～75%及＞75%分別記0、1、2、3分, 兩項計分相乘為最終得分(0～9分), 得分≤4分為低表達, ＞4分為高表達。

1.3 統計學方法 采用SPSS13.0統計軟件進行數據分析處理, 免疫組織化學染色結果各組間的比較采用χ2檢驗及Fisher 確切概率法, 生存數據分析采用 Kaplan-Maier 法, 采用 log-rank 法判斷差異性, P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化結果 免疫組織化學染色顯示, HPSE2主要定位于細胞漿, 82例NSCLC組織中, 30例(37%)為高表達,在非癌性肺組織中弱表達或無明顯表達。HPSE2高表達同局部淋巴結轉移減少(P=0.012)相關, 與患者年齡(P=0.658)、性別(P=0.96)、腫瘤組織類型(P=0.654)、pTNM分期(P=0.266)、腫瘤體積(P=0.105)、腫瘤分化水平(P=0.174)等均無相關性。.

2.2 HPSE2表達水平與NSCLC患者預后生存率之間的關系

對49例有完整的術后隨訪記錄的患者進行Kaplan-Meier生存時間分析顯示: NSCLC組織中HPSE2高表達組患者生存時間高于低表達組生存時間［(61±4.31) VS (50±8.92)］；Log-Rank, P=0.027)。

3 討論

乙酰肝素酶家族包括兩個成員：乙酰肝素酶-1 (heparanase-1, HPSE1), 乙酰肝素酶-2(heparanase-2, HPSE2)；HPSE1是一種β-D-內切葡糖醛酸酶, 在人腫瘤組織中常高表達并同腫瘤進展密切相關, HPSE1可通過水解細胞外基質、釋放活性細胞因子及激活信號通路等方式調控腫瘤進展。HPSE2蛋白結構同HPSE1有大約59%的同源性, 在腦、乳腺等組織中常有較高表達［1］, 在頭頸部腫瘤、卵巢腫瘤、宮頸腫瘤、直腸癌、胃癌組織中高表達［2］, 但其所發揮的具體生物學作用及機制尚不十分明確。

HPSE2在NSCLC組織中表達情況及臨床病理意義目前尚無報道, 通過免疫組織化學染色發現HPSE2在NSCLC組織的表達強度高于癌旁組織及正常肺組織, 這與其他腫瘤的研究結果相一致。經進一步統計分析發現, HPSE2高表達與NSCLC局部淋巴結轉移減少及患者預后生存時間延長相關, HPSE2在頭頸部腫瘤高表達同局部淋巴結轉移負減少及預后生存時間延長相關［2］, 胃癌組織中HPSE2高表達同患者生存時間延長相關, 這些結果提示HPSE2對腫瘤的發展可以發揮抑制作用, 可能的機制有：①HPSE2可以與HPSE1競爭底物進而抑制其活性抑制腫瘤進展［2］；②.多蜂房蛋白EZH2可以抑制靶基因轉錄, EZH2在多種惡性腫瘤中高表達并被視為腫瘤進展的標志物, 因此被EZH2抑制的基因可能發揮抑癌的作用, 而HPSE2正是EZH2抑制的靶基因,這提示HPSE2抑制腫瘤進展的作用可能與EZH2有關, 而在NSCLC組織中HPSE2同HPSE1及EZH2的相互作用機制尚需進一步研究。現有研究均發現HPSE2在腫瘤組織中表達強度高于癌旁及正常組織, 同時, 在宮頸病變組織中HPSE2表達強度隨惡變程度增加逐級增高, 在胃癌組織中HPSE2高表達與腫瘤體積增加相關。

綜上所述, HPSE2在腫瘤發展過程中所起的作用較為復雜, 尚需進一步研究, 在NSCLC組織中, HPSE2表達與腫瘤局部淋巴結轉移減少及患者預后生存時間延長相關, HPSE2有可能成為NSCLC篩查、診斷及預后結果判定的新靶點。

［1］ McKenzie E, Tyson K, Stamps A, et al.Cloning and expression profiling of Hpa2, a novel mammalian heparanase family member.Biochem Biophys Res Commun, 2000, 276(3):1170-1177.

［2］ Levy-Adam F, Feld S, Cohen-Kaplan V, et al.H eparanase 2 interacts with heparan sulfate with high affinity and inhibits heparanase activity.J Biol Chem, 2010, 285(36):2801-2809.

2014-03-12］

110034 沈陽醫學院基礎醫學院病理教研室(張珉 張玲 呂威力)；遼寧省腫瘤醫院病理科(黃波)

張珉