弄崗馬兜鈴組培苗的生根培養(yǎng)

廖韋衛(wèi)++謝君鋒++俸青++何洪良++唐君海

摘 要 對弄崗馬兜鈴組培苗進(jìn)行生根誘導(dǎo)研究，以達(dá)到可移栽的目的。在1/2改良MS固體培養(yǎng)基（KH2PO4 170 mg/L、蔗糖30 g/L，pH 5.8）中添加不同濃度的6-芐胺基腺嘌呤（6-BA）和吲哚丁酸（IBA）篩選最佳生根培養(yǎng)基配方。結(jié)果表明：在1/2改良MS固體培養(yǎng)基（蔗糖30 g/L，pH 5.8）加入1 mg/L的IBA具有較好的生根誘導(dǎo)作用，而6-BA對弄崗馬兜鈴組培苗不具有生根作用。

關(guān)鍵詞 弄崗馬兜鈴 ；組織培養(yǎng) ；生根誘導(dǎo)

分類號 S567

弄崗馬兜鈴（Aristolochia longgonensis C.F.Liang），別名弄崗?fù)ǔ腔ⅲ瑸轳R兜鈴科（Aristolochiaceae）馬兜鈴屬（Aristolochia）植物[1]，是廣西熱帶北緣巖溶森林下的一種藤本藥用植物，性味功能與廣西著名民間草藥通城虎相似，有良好的鎮(zhèn)痛作用，民間用于痛傷、蛇傷、高熱等疾病的治療[2]。馬兜鈴科馬兜鈴屬植物全世界約有450 余種，廣泛分布在熱帶和溫帶地區(qū)，中國有56 種，其中《中國植物志》記載39種，分別屬于管花亞屬和馬兜鈴亞屬。馬兜鈴屬植物化學(xué)成分具有多種生理活性[3-4]，在相關(guān)的中藥材書籍中記載供藥用者已達(dá)26種，如《中國藥典》收載4種馬兜鈴屬植物共計(jì)5種藥材和含有馬兜鈴屬植物成分的成方制劑15 種；《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑共20 冊，除5、8、14、16 冊外，其余各冊均收錄有含馬兜鈴藥材的中成藥[5]。趙瑞峰等[6]在桂林雁山進(jìn)行了弄崗馬兜鈴引種繁殖試驗(yàn)研究，使用種子、分根、插蔓繁殖和根兜種植等方法，發(fā)現(xiàn)僅有根兜種植一年生苗與野生苗相比產(chǎn)量接近。邱運(yùn)平等[2，7]對弄崗馬兜鈴進(jìn)行化學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)其根以及藤莖均含有馬兜鈴酸等藥用化學(xué)成分，而且其根含馬兜鈴酸比同屬其他植物高，收得率可達(dá)0.62%。弄崗馬兜鈴研究僅見1979～1982年被發(fā)現(xiàn)初期有報(bào)道，且局限于化學(xué)成分分析以及引種繁殖研究，并未涉及組織培養(yǎng)。因環(huán)境破壞以及過度開采，弄崗馬兜鈴野生資源逐漸匱乏，弄崗馬兜鈴現(xiàn)已屬稀有野生藥用植物資源[8]，并被保護(hù)于廣西弄崗國家自然保護(hù)區(qū)中。弄崗馬兜鈴組培研究是保護(hù)其種質(zhì)資源和開發(fā)利用的有效途徑，可有效避免遺傳資源日趨枯竭，造成很多有益基因的喪失[9]。本研究旨在對弄崗馬兜鈴組培苗進(jìn)行生根研究，并達(dá)到可移栽的目的，進(jìn)而完善弄崗馬兜鈴組培體系。

1 材料與方法

1.1 材料

植物材料來自廣西南亞熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所種質(zhì)資源圃，引自廣西弄崗國家級自然保護(hù)區(qū)。

1.2 方法

1.2.1 繼代增殖

弄崗馬兜鈴繼代增殖苗，經(jīng)過5代增殖培養(yǎng)后，可適用于生根（圖1）。增殖培養(yǎng)基配方為：改良MS固體培養(yǎng)基（KH2PO4 340 mg/L、蔗糖30 g/L，pH 5.8）+0.5 mg/L的6-芐胺基腺嘌呤（6-BA）。接種方法為微扦插法。

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

以1/2改良MS固體培養(yǎng)基（KH2PO4 170 mg/L、蔗糖30 g/L，pH 5.8）為基本培養(yǎng)基[9]。在1/2基本培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素6-BA與生長素吲哚丁酸（IBA）進(jìn)行生根誘導(dǎo)[10]，進(jìn)行二因素三水平試驗(yàn)（表1）。6-BA（A）3個(gè)水平分別為0、0.5、1 mg/L； IBA（B）3個(gè)水平分別為0、0.5、1 mg/L。共做3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)每個(gè)處理3瓶，共計(jì)81瓶。

1.2.3 生長條件

在超凈工作臺上，取弄崗馬兜鈴增殖苗嫩莖，截一葉一莖[11]，接入不同處理的培養(yǎng)基中（圖2），放于溫度27℃、恒光300-600 lx[12]的培養(yǎng)室內(nèi)。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)二因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析方法，進(jìn)行方差分析檢驗(yàn)[13]。數(shù)據(jù)F測驗(yàn)使用SPSS統(tǒng)計(jì)產(chǎn)品與服務(wù)解決方案軟件進(jìn)行分析，Duncan新復(fù)極差多重比較使用北京中農(nóng)博思科技發(fā)展有限公司農(nóng)博士育種家管理軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 生根培養(yǎng)結(jié)果

增殖苗在接入不同的生根培養(yǎng)基后觀察發(fā)現(xiàn)： 20 d時(shí)，有處理根系發(fā)育明顯，并達(dá)到頂峰；20 d后所有根系開始萎縮，并失去移栽活性。因此20 d為弄崗馬兜鈴組培生根最佳時(shí)間。20 d根系情況記錄見表2，生根瓶苗見圖3。由表2可知，處理A1B3、A1B2每個(gè)重復(fù)都有生根。由表3可知，在20 d時(shí)，處理間F值為6.861，大于F0.01的3.705；A因素間F值為10.111，大于F0.01的6.013；B因素間F值為10.111，大于F0.01的6.013；說明處理間、A因素間、B因素間存在差異，可對其進(jìn)行處理間、A因素間、B因素間Duncan新復(fù)極差多重比較。

2.2 處理間分析

由表4可知，A1B3與其他處理在5%水平上達(dá)顯著差異；處理A1B3與處理A2B3達(dá)極顯著差異，因此A1B3效果最佳。說明在1/2改良MS固體培養(yǎng)基、蔗糖30 g/L、pH 5.8加入處理A1B3即0 mg/L 6-BA+1 mg/L IBA具有很強(qiáng)的生根誘導(dǎo)作用，其余效果均不明顯。

2.3 A因素分析

由表5可知， A1與A2、A3達(dá)極顯著差異。可見，弄崗馬兜鈴組培生根培養(yǎng)基中6-BA的濃度以0 mg/L為宜。

2.4 B因素分析

由表6可知，B3與B2、B1達(dá)顯著差異，B3與B1達(dá)極顯著差異?？梢?，弄崗馬兜鈴組培生根培養(yǎng)基中IBA的濃度以1 mg/L為宜。

3 討論與結(jié)論

IBA是一種植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，可以促進(jìn)植物不定根的生成[14]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，單純添加1 mg/L或0.5 mg/L的IBA均能誘導(dǎo)出一定量的根系，說明在IBA對弄崗馬兜鈴組培苗具有很強(qiáng)的生根誘導(dǎo)作用，但是本試驗(yàn)設(shè)計(jì)僅落在了IBA上升曲線處，既濃度1 mg/L的效果大于濃度0.5 mg/L的效果，下一步試驗(yàn)需擴(kuò)大IBA濃度范圍，獲取完整的IBA用量效果曲線圖。endprint

6-BA是一種人工合成的細(xì)胞分裂素，可用于組織培養(yǎng)誘導(dǎo)芽的形成[15]。植物生長發(fā)育過程中任何一種生理過程不是單一激素的作用，而是多種激素相互作用的結(jié)果[16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在基本培養(yǎng)基中添加6-BA對弄崗馬兜鈴生根具有一定程度的影響，弄崗馬兜鈴繼代增殖配方中6-BA濃度為0.5 mg/L，且經(jīng)過多代增殖培養(yǎng)后，6-BA可能有積累，因此能對弄崗馬兜鈴的生根產(chǎn)生影響，但由于缺乏相應(yīng)的證據(jù)，未來應(yīng)當(dāng)對此進(jìn)行驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

[1] 梁疇芬，梁健英，劉蘭芳，等. 弄崗植物區(qū)系考察報(bào)告[J]. 廣西植物，1985，5（3）：43-61.

[2] 邱運(yùn)平，陳秀珍. 弄崗?fù)ǔ腔⒌鸟R兜鈴酸分離簡報(bào)[J]. 廣西植物，1981，1（1）：48.

[3] Gadhi CA， Hatier R， MoryF， et al. Bactericidal propertiesof the chloroform fraction from rhizomes of Aristolochia paucinervis Pome[J]. J Ethnopharmacol， 2001， 75（2-3）： 207-212.

[4] Stiborova M， Frei E， Breuer A， et al. Antibacterial activity of theessential oil from Aristolochiaindica[J]. Fitoterapia， 2002， 73（5）： 439-441.

[5] 趙 輝，劉繡華. 馬兜鈴屬（Aristolochia L.）藥用植物研究概況[J]. 河南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003，33（4）：73-77

[6] 趙瑞峰，馬世發(fā). 弄崗?fù)ǔ腔⒌囊N繁殖[J]. 廣西植物，1982，2（4）：201-204.

[7] 邱運(yùn)平，陳秀珍，朱大元. 弄崗?fù)ǔ腔⒒瘜W(xué)成分的研究[J]. 廣西植物，1982，2（1）：47-49.

[8] 蒲瑞翎. 廣西藥用植物資源保護(hù)的現(xiàn)狀及對策[J]. 廣西醫(yī)學(xué)，2006，28（6）：787-789.

[9] 李浚明. 植物組織培養(yǎng)教程[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版，1996：41.

[10] 王玉英，高新一. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)手冊[M]. 北京：金盾出版社，2006

[11] 鄧 艷，蔣忠誠，李先琨. 廣西弄崗不同演替階段植被群落的小氣候特征[J]. 熱帶地理，2004，24（4）：316-320，325.

[12] 顧地周，叢小力，宋麗利. 木通馬兜鈴的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 植物生理學(xué)通訊，2008，44（1）：136.

[13] 蓋鈞鎰. 試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004：248

[14] 朱慧香，張宗儉，陳虎保，等. 常用植物生長調(diào)節(jié)劑應(yīng)用指南[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002.

[15] 中國農(nóng)業(yè)百科全書編輯部. 中國農(nóng)業(yè)百科全書？生物學(xué)卷[M]. 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991：672-673.

[16] 李進(jìn)進(jìn)，許繼勇. 生長調(diào)節(jié)劑在植物生長發(fā)育中的作用[J]. 廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005（3）：14-16.endprint

6-BA是一種人工合成的細(xì)胞分裂素，可用于組織培養(yǎng)誘導(dǎo)芽的形成[15]。植物生長發(fā)育過程中任何一種生理過程不是單一激素的作用，而是多種激素相互作用的結(jié)果[16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在基本培養(yǎng)基中添加6-BA對弄崗馬兜鈴生根具有一定程度的影響，弄崗馬兜鈴繼代增殖配方中6-BA濃度為0.5 mg/L，且經(jīng)過多代增殖培養(yǎng)后，6-BA可能有積累，因此能對弄崗馬兜鈴的生根產(chǎn)生影響，但由于缺乏相應(yīng)的證據(jù)，未來應(yīng)當(dāng)對此進(jìn)行驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

[1] 梁疇芬，梁健英，劉蘭芳，等. 弄崗植物區(qū)系考察報(bào)告[J]. 廣西植物，1985，5（3）：43-61.

[2] 邱運(yùn)平，陳秀珍. 弄崗?fù)ǔ腔⒌鸟R兜鈴酸分離簡報(bào)[J]. 廣西植物，1981，1（1）：48.

[3] Gadhi CA， Hatier R， MoryF， et al. Bactericidal propertiesof the chloroform fraction from rhizomes of Aristolochia paucinervis Pome[J]. J Ethnopharmacol， 2001， 75（2-3）： 207-212.

[4] Stiborova M， Frei E， Breuer A， et al. Antibacterial activity of theessential oil from Aristolochiaindica[J]. Fitoterapia， 2002， 73（5）： 439-441.

[5] 趙 輝，劉繡華. 馬兜鈴屬（Aristolochia L.）藥用植物研究概況[J]. 河南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003，33（4）：73-77

[6] 趙瑞峰，馬世發(fā). 弄崗?fù)ǔ腔⒌囊N繁殖[J]. 廣西植物，1982，2（4）：201-204.

[7] 邱運(yùn)平，陳秀珍，朱大元. 弄崗?fù)ǔ腔⒒瘜W(xué)成分的研究[J]. 廣西植物，1982，2（1）：47-49.

[8] 蒲瑞翎. 廣西藥用植物資源保護(hù)的現(xiàn)狀及對策[J]. 廣西醫(yī)學(xué)，2006，28（6）：787-789.

[9] 李浚明. 植物組織培養(yǎng)教程[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版，1996：41.

[10] 王玉英，高新一. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)手冊[M]. 北京：金盾出版社，2006

[11] 鄧 艷，蔣忠誠，李先琨. 廣西弄崗不同演替階段植被群落的小氣候特征[J]. 熱帶地理，2004，24（4）：316-320，325.

[12] 顧地周，叢小力，宋麗利. 木通馬兜鈴的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 植物生理學(xué)通訊，2008，44（1）：136.

[13] 蓋鈞鎰. 試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004：248

[14] 朱慧香，張宗儉，陳虎保，等. 常用植物生長調(diào)節(jié)劑應(yīng)用指南[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002.

[15] 中國農(nóng)業(yè)百科全書編輯部. 中國農(nóng)業(yè)百科全書？生物學(xué)卷[M]. 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991：672-673.

[16] 李進(jìn)進(jìn)，許繼勇. 生長調(diào)節(jié)劑在植物生長發(fā)育中的作用[J]. 廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005（3）：14-16.endprint

6-BA是一種人工合成的細(xì)胞分裂素，可用于組織培養(yǎng)誘導(dǎo)芽的形成[15]。植物生長發(fā)育過程中任何一種生理過程不是單一激素的作用，而是多種激素相互作用的結(jié)果[16]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在基本培養(yǎng)基中添加6-BA對弄崗馬兜鈴生根具有一定程度的影響，弄崗馬兜鈴繼代增殖配方中6-BA濃度為0.5 mg/L，且經(jīng)過多代增殖培養(yǎng)后，6-BA可能有積累，因此能對弄崗馬兜鈴的生根產(chǎn)生影響，但由于缺乏相應(yīng)的證據(jù)，未來應(yīng)當(dāng)對此進(jìn)行驗(yàn)證。

參考文獻(xiàn)

[1] 梁疇芬，梁健英，劉蘭芳，等. 弄崗植物區(qū)系考察報(bào)告[J]. 廣西植物，1985，5（3）：43-61.

[2] 邱運(yùn)平，陳秀珍. 弄崗?fù)ǔ腔⒌鸟R兜鈴酸分離簡報(bào)[J]. 廣西植物，1981，1（1）：48.

[3] Gadhi CA， Hatier R， MoryF， et al. Bactericidal propertiesof the chloroform fraction from rhizomes of Aristolochia paucinervis Pome[J]. J Ethnopharmacol， 2001， 75（2-3）： 207-212.

[4] Stiborova M， Frei E， Breuer A， et al. Antibacterial activity of theessential oil from Aristolochiaindica[J]. Fitoterapia， 2002， 73（5）： 439-441.

[5] 趙 輝，劉繡華. 馬兜鈴屬（Aristolochia L.）藥用植物研究概況[J]. 河南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003，33（4）：73-77

[6] 趙瑞峰，馬世發(fā). 弄崗?fù)ǔ腔⒌囊N繁殖[J]. 廣西植物，1982，2（4）：201-204.

[7] 邱運(yùn)平，陳秀珍，朱大元. 弄崗?fù)ǔ腔⒒瘜W(xué)成分的研究[J]. 廣西植物，1982，2（1）：47-49.

[8] 蒲瑞翎. 廣西藥用植物資源保護(hù)的現(xiàn)狀及對策[J]. 廣西醫(yī)學(xué)，2006，28（6）：787-789.

[9] 李浚明. 植物組織培養(yǎng)教程[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版，1996：41.

[10] 王玉英，高新一. 植物組織培養(yǎng)技術(shù)手冊[M]. 北京：金盾出版社，2006

[11] 鄧 艷，蔣忠誠，李先琨. 廣西弄崗不同演替階段植被群落的小氣候特征[J]. 熱帶地理，2004，24（4）：316-320，325.

[12] 顧地周，叢小力，宋麗利. 木通馬兜鈴的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 植物生理學(xué)通訊，2008，44（1）：136.

[13] 蓋鈞鎰. 試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)方法[M]. 北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004：248

[14] 朱慧香，張宗儉，陳虎保，等. 常用植物生長調(diào)節(jié)劑應(yīng)用指南[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2002.

[15] 中國農(nóng)業(yè)百科全書編輯部. 中國農(nóng)業(yè)百科全書？生物學(xué)卷[M]. 北京：農(nóng)業(yè)出版社，1991：672-673.

[16] 李進(jìn)進(jìn)，許繼勇. 生長調(diào)節(jié)劑在植物生長發(fā)育中的作用[J]. 廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005（3）：14-16.endprint