旋覆花配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

★ 徐東婷 閆炳雄 韓玉惠 董金香

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) 長(zhǎng)春 130117；2.吉林四平巨能藥業(yè) 四平 136000)

旋覆花為菊科植物旋覆花InulajaponicaThunb.或歐亞旋覆花I.britannicaL.的干燥頭狀花序,味苦,辛、咸,性微溫,歸肺、脾、胃、大腸經(jīng)。具有降氣、消痰、行水、止嘔等功效,中醫(yī)臨床多用于風(fēng)寒咳嗽、痰飲蓄結(jié)、胸膈痞滿、喘咳痰多、嘔吐噫氣、心下痞硬等癥[1]。中藥配方顆粒[2]又稱免煎中藥，主要通過(guò)將單味中藥進(jìn)行加工提取其有效成分，制成中藥飲片新劑型；臨床應(yīng)用及相關(guān)藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，單味中藥配方顆粒和傳統(tǒng)的水煎劑具有基本相同的療效和藥理作用，且中藥配方顆粒具有體積小，易于攜帶保存，質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)[3]。旋覆花配方顆粒是旋覆花飲片經(jīng)水提、濃縮、干燥、制粒等工序制成的單味中藥配方顆粒劑。據(jù)報(bào)道[4-5],綠原酸為旋覆花抗菌消炎作用的酚酸類活性成分。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法[1-4,6]測(cè)定制劑中綠原酸含量,并參考2010年版《中國(guó)藥典》鑒別項(xiàng)下內(nèi)容,為旋覆花配方顆粒的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1260高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm)；超聲儀；電熱鼓風(fēng)干燥箱；數(shù)碼照相機(jī)；硅膠G板。

1.2 試劑與試藥 綠原酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)：110753-200413，供含量測(cè)定用)；旋覆花對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)：121125-200402，供鑒別用)；旋覆花飲片(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)-吉林敖東藥業(yè)集團(tuán)現(xiàn)代中藥配方顆粒研究聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室提供，批號(hào)：201306)，飲片經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室姜大成教授鑒定為真品。乙腈、甲醇為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2 旋覆花配方顆粒的薄層色譜鑒別

按照《中國(guó)藥典》2010年版一部旋覆花飲片【鑒別】項(xiàng)下規(guī)定，取旋覆花對(duì)照藥材及飲片粉末2g，置具塞錐形瓶中，加石油醚(60-90℃)30mL，密塞，冷浸1小時(shí)，加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，濾液濃縮至近干，殘?jiān)邮兔?60-90℃)2mL使溶解，取上清液作為對(duì)照品溶液。另取三批旋覆花配方顆粒各2g，同法制成供試品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果見(jiàn)圖1所示。圖1表明，配方顆粒與對(duì)照藥材顯示相同的斑點(diǎn)。

3 旋覆花配方顆粒檢查

3.1 水分 按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄IX H[7]水分測(cè)定項(xiàng)中烘干法測(cè)定。取同一批旋覆花配方顆粒，平行3份，測(cè)得平均含水量為4.56%(小于6.0%)，符合要求。

圖1 旋覆花對(duì)照藥材與配方顆粒TLC圖譜

3.2 溶化性 取旋覆花配方顆粒10g，加熱水200mL，攪拌5分鐘，觀察到顆粒全部溶化，符合要求。

3.3 粒度 按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄XI B[7]粒度測(cè)定第二法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果不能通過(guò)一號(hào)篩和能通過(guò)五號(hào)篩的顆粒為9.7g(不超過(guò)15%)。

4 綠原酸含量測(cè)定

4.1 色譜條件[7]Agilent TC-C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；柱溫為室溫；體積流量1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm；進(jìn)樣量10vμL。陰性對(duì)照品、綠原酸對(duì)照品和供試品的HPLC圖譜見(jiàn)圖2所示。

A

B

C

4.2 對(duì)照品溶液的制備 取綠原酸對(duì)照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成，每1mL含綠原酸0.216mg的對(duì)照品溶液。即得綠原酸對(duì)照品母液。

精密吸取綠原酸對(duì)照品母液適量，配制成8.64，17.28，25.92，34.56，43.20，51.84g/mL的溶液。

4.3 供試品溶液的制備 取本品粉末約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘(150W，40kHz)，取出放冷后，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5mL，置25mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。重復(fù)上述操作，即得供試品平行組。

4.4 線性關(guān)系考察 分別吸取上述各質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液10μ，注入液相色譜儀進(jìn)行分析，以綠原酸進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程：Y=2829X+3.2，r=1，表明綠原酸在0.0864-0.5184g范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

4.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，RSD為0.06%，表明儀器精密度良好。

4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品同一批次樣品6份，按4.3項(xiàng)下方法操作，分別按上述色譜條件方法測(cè)定綠原酸，RSD為2.39%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

4.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取上述供試品溶液10μ，分別在0，4，8，10，12，24h進(jìn)樣，按上述色譜條件測(cè)定，RSD為0.49%，色譜峰面積在24h內(nèi)基本無(wú)變化，說(shuō)明穩(wěn)定性較好。

4.8 回收率試驗(yàn) 精密稱定本品0.5g，平行6份，按4.3項(xiàng)下方法操作制備供試液，然后向供試液中精密加入一定量綠原酸對(duì)照品，混勻后測(cè)定綠原酸含量，結(jié)果平均回收率為102.71%，RSD為2.44%，結(jié)果見(jiàn)表1所示。

表1 回收率測(cè)定試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

4.9 樣品測(cè)定 分別精密稱定不同批號(hào)的旋覆花配方顆粒約1g,按4.3項(xiàng)下方法制備供試品，按上述色譜條件測(cè)出峰面積，采用外標(biāo)法計(jì)算綠原酸的含有量。結(jié)果見(jiàn)表2所示。

表2 三批樣品中綠原酸含量測(cè)定結(jié)果

5 討論

將旋覆花制備成顆粒劑能夠保留原藥材的性味、有效成分和功能。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)TLC法進(jìn)行鑒別，然后對(duì)顆粒劑各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢查，最后檢測(cè)有效成分的含量，建立起一套科學(xué)、標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法。

TLC實(shí)驗(yàn)是參照2010年版中國(guó)藥典的TLC鑒別方法進(jìn)行的，實(shí)驗(yàn)中還進(jìn)行了更換不同溶劑(石油醚、乙醚、氯仿)和提取方法(冷浸、回流)，進(jìn)行薄層色譜分析[8]結(jié)果表明以石油醚(60-90℃)作溶劑的薄層色譜斑點(diǎn)較乙醚和氯仿好,色譜斑點(diǎn)分離清楚。加熱回流法提取完全，而且縮短時(shí)間，便于快速分析。并且對(duì)薄層色譜條件的耐用性進(jìn)行了考察，分別在高溫、低溫、高濕、低濕條件下展開(kāi)，以明確該薄層色譜條件的耐用性。結(jié)果顯示，薄層色譜條件耐用性良好。

HPLC實(shí)驗(yàn)是參照2010年版中國(guó)藥典金銀花項(xiàng)下方法進(jìn)行的，本實(shí)驗(yàn)考察了不同提取方法(熱回流、超聲法)不同提取時(shí)間(20、30、40min),結(jié)果表明，超聲處理30min中提取效率最高。

本實(shí)驗(yàn)采用水提工藝，以有效成分綠原酸為指標(biāo)評(píng)價(jià)旋覆花配方顆粒，結(jié)果顯示，該方法科學(xué)準(zhǔn)確，具有良好的可控性，因此可以作為旋覆花配方顆粒的質(zhì)量可控制標(biāo)準(zhǔn)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[S].2010年版.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:305.

[2]吳鏑，趙忠慧．中藥配方顆粒的應(yīng)用與研究[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，(25)：10-11.

[3]諸明娜．免煎中藥配方顆粒與傳統(tǒng)中藥飲片的比較[J].湖北中醫(yī)雜志，2004，26(11)：55.

[4]耿紅梅.高效液相色譜法測(cè)定歐亞旋覆花中綠原酸的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(1):201-202.

[5]耿紅梅.歐亞旋覆花化學(xué)成分的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(10):2 432-2 433.

[6]賈法強(qiáng),尹寧寧,林林.HPLC法測(cè)定忍冬藤中綠原酸的含量[J].齊魯藥學(xué),2007,26(1):26-27.

[7]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:52,65,205.

[8]張新民,吳銀生.旋覆花的薄層色譜鑒別[J].蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，19(8)：901.