加味五苓散對S180腹水型小鼠腹水量及外周血中TNF-α濃度的影響

★ 石躍進 張寧蘇 高宏 殷東風

(1.遼寧中醫(yī)藥大學 沈陽 110032；2.遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院 沈陽 110032)

癌性腹腔積液繼發(fā)于不同惡性腫瘤的腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移，標志著腫瘤已進入晚期，此時患者免疫功能亦會下降[1]。一旦發(fā)生，患者的中位生存期大約僅為數(shù)周至數(shù)月，一年生存率低于10%[2]。臨床上通常采取利尿，腹腔穿刺放水，腹腔穿刺置管引流，腹腔內(nèi)注射給藥等方法來治療。中醫(yī)認為臟腑功能失調(diào)影響津液運行，毒聚水停是惡性腹水發(fā)病的基本病機，由此我院腫瘤科臨床中采用“加味五苓散”來治療惡性腹水。設計本實驗旨在闡明加味五苓散對惡性腹水的作用機理，為臨床應用提供一定的實驗室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及細胞株

昆明種小鼠50只，雌雄各半，體重(20±2)g，7周左右周齡，購于遼寧中醫(yī)藥大學實驗動物中心。S180細胞株由遼寧中醫(yī)藥大學生物技術實驗室提供。

1.2 實驗藥品及制備

加味五苓散由茯苓20g、白術20g、豬苓15g、桂枝15g、澤瀉15g、葶藶子15g、土茯苓15g、龍葵15g、白花蛇舌草20g、半枝蓮20g、山慈菇15g、生薏苡仁30g、炙甘草10g構成，將上述藥品用水煎煮，濃度濃縮為2.13g/mL，經(jīng)過無菌處理后放置在冰箱中備用。

注射用順鉑(凍干型)10mg/瓶，齊魯制藥有限公司生產(chǎn)。以上藥品均購于遼寧中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院。

1.3 S180腹水型小鼠模型建立

用一次性注射器抽取適量S180細胞株混懸液無菌條件下注射于10只健康昆明種小鼠腹腔內(nèi)，0.2mL/只，10天后S180腹水型小鼠模型制備成功，成功率100%，腹水生成，齊性好，未見血性腹水。無菌條件下取已制備好的10只S180腹水型小鼠腹水，制備成S180腹水瘤細胞懸液(瘤細胞成活率>95%，細胞濃度(1×106/mL)，無菌條件下注射到隨機抽取的32只健康小鼠腹腔，每鼠注入0.2mL，7天后32只S180腹水型小鼠全部造模成功，全鼠成活，腹水齊性好[3]。

1.4 動物分組及給藥方法

1.4.1 動物分組 剩余的8只小鼠為空白組，32只S180腹水型小鼠隨機分為4組，每組8只，分別為對照組、中藥組、西藥組、中藥加西藥組。共5組。

1.4.2 給藥方法 空白組、對照組、西藥組每日予以0.5mL生理鹽水灌胃，中藥組、中藥加西藥組每

日予以0.5mL加味五苓散灌胃；第1日和第7日，西藥組、中藥加西藥組予以配備好的順鉑注射液(10mg順鉑溶解于17.4mL生理鹽水)0.2mL腹腔內(nèi)注射，空白組、對照組、中藥組予以生理鹽水0.2mL腹腔內(nèi)注射。實驗周期14天。

1.5 指標檢測

1.5.1 小鼠腹水量測定 各組用藥14天后，次日麻醉小鼠，無菌條件下抽取腹水，記錄腹水量。

1.5.2 小鼠外周血中TNF-α的濃度測定 各組用藥14天后，次日麻醉小鼠，無菌條件下取出小鼠血，采用ELISA法(詳見說明書)測定血液中TNF-α濃度。

1.6 統(tǒng)計方法

2 結果

2.1 各腹水型小組腹水量測量結果

中藥組、西藥組、中藥加西藥組與對照組比較腹水量減少有意義(P<0.05)；中藥加西藥組與中藥組、西藥組比較腹水量減少均有意義(P<0.05)，見表1。

表1 各腹水型小組腹水量測量結果

2.2 各組小鼠外周血中TNF-α的濃度測定結果

中藥組、中藥在西藥組與對照組比較外周血中TNF-α濃度升高有意義(P<0.05)；西藥組與對照組比較外周血中TNF-α濃度升高，但無顯著差異(P>0.05)；中藥加西藥組與單用西藥組能使小鼠外周血中TNF-α濃度升高有意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組小鼠外周血中TNF-α水平測定結果

3 討論

五苓散首見于《傷寒雜病論》，張仲景用其治療太陽病表邪不解，水蓄為患的病癥。清代醫(yī)家汪昂在其所著《醫(yī)方集解·利濕之劑》曰：“經(jīng)曰，淡味滲泄為陽，二苓甘淡入肺，而通膀胱為君，咸味涌泄為陰，澤瀉甘咸入腎膀胱，同利水道為臣，益水所以制水，故以白術苦溫健脾祛濕為佐，膀胱者津液藏焉，氣化則能出矣，故以肉桂辛熱為使，熱因熱用，引入膀胱以化其氣，使?jié)駸嶂敖詮男∷鲆病盵4]。本實驗所用加味五苓散是由五苓散加抗癌以及利水滲濕之品組成，功在化氣利水育陰，解毒抗癌消積。

TNF-α可通過直接細胞毒作用、抗腫瘤血管生成以及誘導腫瘤細胞凋亡達到殺傷腫瘤細胞的作用[5]。TNF-α為可溶性細胞因子，是迄今所發(fā)現(xiàn)的直接殺傷腫瘤作用最強的一種生物學活性因子[6]。

從本研究中可以得出加味五苓散提高S180小鼠外周血中TNF-α的濃度顯著，腹水量減少明顯；使用順鉑時聯(lián)合使用加味五苓散比單用順鉑的S180小鼠外周血中TNF-α的濃度升高及腹水量減少顯著。單獨使用順鉑時TNF-α的濃度升高不顯著，但是腹水量減少明顯，可能與順鉑副作用免疫抑制或者樣本數(shù)量不足等有關，需要進一步研究。

加味五苓散用于癌性腹水患者可以通過升高其外周血中TNF-α的濃度，抑制腹水生長，達到控制腹水，改善患者生存質(zhì)量目的，在臨床中值得推廣使用。

[1]湯釗猷．現(xiàn)代腫瘤學[M].第2版．上海：上海醫(yī)科大學出版社，2000：571．

[2]孫燕，石遠凱．臨床腫瘤內(nèi)科手冊[M].第5版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：779．

[3]陳奇．中藥藥理研究方法學[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993．

[4]金家浚，蔣維宇等．中醫(yī)百家方論薈萃[M].重慶：重慶出版社，1994：815．

[5]方風奇，朱青山，劉基巍．注射用重組改構人腫瘤壞死因子治療惡性腹水的價值研究[J].西部醫(yī)學，2006，18(3)：264-266．

[6]余偉明，焦丙華．腫瘤壞死因子及相關細胞毒索[M].上海：上海科學技術出版社，1991：15-20.