mTOR在HER-2陰性乳腺癌中的表達(dá)及意義

王立波，王彥榮*，席 妍，李曉萌

(1.吉林省腫瘤醫(yī)院 內(nèi)二科，吉林 長春130012；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 內(nèi)鏡中心)

乳腺癌的分子靶向治療已經(jīng)取得了突飛猛進(jìn)的發(fā)展，并應(yīng)用到臨床，但主要針對(duì)Her-2陽性乳腺癌，而Her-2陰性乳腺癌的靶向治療仍于探索研究階段，未廣泛應(yīng)用到臨床實(shí)踐中。本研究觀察mTOR在Her-2陰性乳腺癌中的表達(dá)及與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性，探討其在Her-2陰性乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的意義，為Her-2陰性乳腺癌尋找預(yù)后因素及新的治療靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1．1一般資料選取我院2012年6月-2013年8月期間65例Her-2陰性女性乳腺癌患者，中位年齡54歲(32-73歲)。術(shù)前均未接受化療、 放療。 按全國乳腺病理專題學(xué)術(shù)研討會(huì)(2003)推薦的乳腺癌組織學(xué)分類:浸潤性導(dǎo)管癌 52例,浸潤性小葉癌13例。按2009年第七版 A J CC乳腺癌TNM分期:Ⅰ期11例,Ⅱ期42例,Ⅲ期 12例。有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者37例,無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例。標(biāo)本均為手術(shù)后立即取材,每例標(biāo)本均分別取癌組織、 距癌組織1厘米處的癌旁組織和正常乳腺組織。

1．2免疫組化染色方法

采用EnvisionTM二步法對(duì)Her-2陰性乳腺癌組織、癌旁組織及正常組織進(jìn)行mTOR免疫組化染色，染色步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，選用已知陽性切片作陽性對(duì)照，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。兔抗人mTOR多克隆抗體(1∶100)購自武漢博士德生物工程有限公司。

1．3評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

(1)Her-2標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)中國乳腺癌Her-2檢測指南2009版：0：無著色；1+：任何比例的浸潤癌細(xì)胞膜的呈現(xiàn)微弱、不完整的細(xì)胞膜著色；2+：>10%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)弱—中等強(qiáng)度、完整但不均勻的細(xì)胞膜棕黃著色或<30%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)且完整的細(xì)胞膜棕褐著色；3+：>30%的浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)且完整的細(xì)胞膜棕褐著色。由于未對(duì)Her-2( ++) 的病例進(jìn)一步進(jìn)行FISH檢測，本研究將Her-2(++)及以下者定義為陰性。(2)mTOR 蛋白表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)中，以高倍鏡(400×) 觀察5個(gè)視野，每個(gè)視野觀察100個(gè)細(xì)胞染色強(qiáng)度分級(jí)為：陰性(-) ：細(xì)胞不顯色或顯色<25%；弱陽性(+) ：25%-50%細(xì)胞顯色；中度陽性(++) ：51%-75%細(xì)胞顯色，著色較深；強(qiáng)陽性(+++) ：>75%細(xì)胞顯色，著色深。弱陽性、中度和強(qiáng)陽性均記為陽性。

1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用χ2檢驗(yàn)和秩和檢驗(yàn)。相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1mTOR蛋白在Her-2陰性乳腺癌﹑癌旁及正常乳腺組織中的表達(dá)Her-2陰性乳腺癌組織、癌旁組織及正常乳腺組織mTOR 蛋白陽性表達(dá)分別為42例(64.6%)、15例(23.1%)、8例(12.3%),癌組織中mTOR蛋白表達(dá)陽性率高于癌旁及正常乳腺組織(P均<0.05)。

2.2mTOR的表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系見表1。

表1 mTOR 的表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

mTOR 的表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性。

3 討論

我國近年來乳腺癌發(fā)病率以每年3%的速度遞增，成為乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一,乳腺癌也是城市中死亡率增長最快的癌癥,嚴(yán)重威脅女性的健康[1]。20世紀(jì)80年代Her-2原癌基因在乳腺癌中被發(fā)現(xiàn)，研究表明它參與抑制細(xì)胞凋亡，維持或促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長；上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)/血管通透性因子(VPF)，促進(jìn)腫瘤新生血管生成；增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力，破壞機(jī)體組織抗侵襲屏障，在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，針對(duì)Her-2的研究逐步成為熱點(diǎn)，赫賽汀的問世開啟了Her-2陽性乳腺癌的分子靶向治療時(shí)代，并納入臨床治療規(guī)范，提高了Her-2陽性乳腺癌患者的療效，延長生存期。而Her-2陰性乳腺癌無相應(yīng)的治療靶點(diǎn)，并不適用赫賽汀、拉帕替尼等藥物的治療，有關(guān)Her-2陰性乳腺癌的分子靶向治療仍沒有取得突破性進(jìn)展，值得我們?nèi)ミM(jìn)一步研究探討。

磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT/PKB)/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 信號(hào)傳導(dǎo)通路是近年來發(fā)現(xiàn)的腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要信號(hào)通路之一，其主要作用是抑制細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、促進(jìn)腫瘤新生血管的形成以及侵襲與轉(zhuǎn)移，研究表明與乳腺癌的關(guān)系密切，成為乳腺癌新的治療靶點(diǎn)[2]。

mTOR 是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，位于PI3K/Akt通路的下游，mTOR信號(hào)通路主要參與細(xì)胞生長和分化的調(diào)控并在翻譯水平控制以上過程。其下游主要包括2 種信號(hào)分子：核糖體p70 S6(S6K1)和真核細(xì)胞翻譯起始因子4E 結(jié)合蛋白(4E-BP1)[3]，通過上述兩種信號(hào)分子發(fā)揮作用。在許多惡性腫瘤中，PI3K/Akt信號(hào)通路過度激活，反之使下游的mTOR信號(hào)通路上調(diào)[4]。在調(diào)節(jié)mTOR 活性過程中也存在負(fù)向調(diào)控因子，如抑癌基因PTEN可以使PIP3 在D3 位去磷酸化生成PIP2，從而負(fù)調(diào)節(jié)PI3K 下游AKT/mTOR 信號(hào)通路的活性[5]。乳腺癌細(xì)胞尤其是在三陰乳腺癌中mTOR的代謝途徑受到破壞，PTEN常常會(huì)發(fā)生缺失[6]，引起mTOR的活性增高，這就為mTOR抑制劑治療三陰乳腺癌提供了理論基礎(chǔ)，直接阻斷mTOR信號(hào)通路是乳腺癌治療的一個(gè)新靶點(diǎn)。

本研究觀察到在Her-2陰性乳腺癌中mTOR表達(dá)明顯高于癌旁組織及正常乳腺組織，mTOR 蛋白陽性表達(dá)分別為42例(64.6%)、15例(23.1%)、8例(12.3%) (P均<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示在Her-2陰性乳腺癌中發(fā)生發(fā)展過程中存在PI3K/Akt信號(hào)通路過度激活及mTOR信號(hào)通路上調(diào)，mTOR抑制劑可能成為Her-2陰性乳腺癌新的靶向治療藥物。同時(shí)觀察到mTOR 蛋白陽性表達(dá)與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性，mTOR有可能是Her-2陰性乳腺癌的不良預(yù)后因子。由于本研究樣本量較小，上述結(jié)論還有待進(jìn)一步研究探討。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃哲宙，陳萬青，吳春曉，等．中國女性乳腺癌的發(fā)病和死亡現(xiàn)況—全國32個(gè)腫瘤登記點(diǎn)2003-2007年資料分析報(bào)告[J]．腫瘤，2012，6，32：435．

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