改善骨髓微環境與脂質體藥物相結合干預白血病的實驗研究

周及紅，劉 東*,李 彤

(吉林大學第二醫院 1.放射科;2.超聲科，吉林 長春130041)

白血病是造血系統的惡性腫瘤,是國內十大高發惡性腫瘤之一,占腫瘤發病率的第六位。白血病發病機制主要是患者的造血干細胞異常、免疫異常及骨髓造血微環境異常。本研究通過改善實驗動物髂骨骨髓微環境及應用脂質體阿霉素，以提高白血病的干預效果。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗動物：采用逆轉錄病毒技術建立人慢性粒細胞性白血病兔模型。將60只符合人慢性粒細胞性白血病實驗兔模型隨機分成兩組(基礎治療組、山莨菪堿組)；實驗試劑：山莨菪堿、脂質體阿霉素；實驗設備：穿刺針、導管、流式細胞儀、顯微鏡。

1.2 實驗方法

兩組實驗動物均進行脂質體阿霉素治療，250 ml 5%葡萄糖注射液稀釋，靜脈滴注，劑量20 mg/m2，10天后重復給藥，4周為一療程。 山莨菪堿組實驗動物均進行經股動脈穿刺，旋髂深動脈注入山莨菪堿，5-10 mg/kg，每7天一次，4周為一療程。治療后第4周進行髂骨取髓，觀察實驗動物骨髓象、骨髓病理及FCM檢測。

1.3 觀察指標

1.3.1 骨髓病理觀察 干預前及干預后第4周取髂后上棘骨髓組織，直徑不小于0.5 cm，Giemsa染色，高倍鏡下觀察微血管數量、脂肪細胞數、骨髓造血組織容量百分比。

1.3.2 髂骨骨髓象 干預前及干預后第4周取髂后上棘骨髓組織，觀察骨髓增生程度，粒紅細胞比例。

1.3.3 骨髓細胞CD33+陽性率 FCM治療前后髂骨骨髓細胞CD33+檢測陽性率。

1.4 統計學方法

采用SPSS15.0統計軟件對數據資料進行分析。率的比較采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 實驗動物骨髓增生度、粒紅細胞比變化情況

兩組實驗模型動物在治療前無顯著差異性，治療后山莨菪堿組骨髓增生程度減低、粒紅細胞比例下降至正常幅度明顯高于基礎治療組(P<0.05)。兩組比較效果見表1。

表1 基礎干預組與山莨菪堿組干預前后骨髓增生程度、粒紅細胞比例比較

注:同時期與基礎治療組相比*P<0.05

2.2 骨髓病理切片組織學觀察結果

低倍鏡下觀察骨髓微血管數量顯示,山莨菪堿組骨髓微血管的數量(低倍視野)及造血組織容量(%),較基礎干預組有明顯增多(P<0.05) ,如表2。兩組干預前及基礎干預組干預后血管擴張、瘀血及斷裂明顯,脂肪細胞較多仍呈慢性粒細胞性白血病的組織學改變；山莨菪堿組干預后僅見輕度微血管擴張,無血管斷裂、瘀血,脂肪細胞比例減少。

表2 兩組實驗動物干預后骨髓微血管數量變化比較

注:同時期與基礎干預組相比*P<0.05; 同組內與干預前比較ΔP<0.05

2.3 骨髓細胞CD33陽性率檢測

基礎干預組和山莨菪堿組干預前后骨髓細胞CD33陽性率檢測，兩組干預前骨髓細胞CD33陽性率檢測無明顯差異(P>0.05);干預后山莨菪堿組較基礎干預者骨髓細胞平均CD33陽性率低，有顯著差異性(P<0.05)，如表3。

表3 骨髓細胞CD33陽性率檢測

注:同時期干預后與基礎干預組相比ΔP<0.05; 同組內與干預前比較*P<0.05

3 討論

骨髓微環境：骨髓造血微環境[1]包括:①小動脈、毛細血管、血竇、小靜脈組成的微血管部分②由基質纖維和基質細胞組成的結締組織部分③與血管結締組織伴隨的神經纖維。每個干細胞的增殖分化所依賴的局部環境是骨髓造血微環境。骨髓微環境的異常表現[2]在骨髓微血管的減少、斷裂及基質細胞(主要是成纖維細胞)的生成減少。骨髓微血管是供給骨髓營養成分、氧氣、排出骨髓細胞代謝產物及二氧化碳的重要通道,是維持骨髓正常造血的重要結構。骨髓微血管是否完整通暢,決定著骨髓造血細胞能否獲取營養成分及氧氣而正常分化,白血病患者的骨髓基質病變主要有水腫、 血竇充血、 出血、 血竇內皮細胞腫脹及微血管減少,微血管減少程度與造血組織減少量成正比,微血管的數量的多少、 結構的完整性及能否發揮正常功能與骨髓的造血功能有密切關系。目前干預白血病[3]主要是針對干細胞生產藥物，而針對改善微環境的藥物應用藥物較少。本研究應用山莨菪堿藥物改善髂骨骨髓微環境，同時應用脂質體藥物達到干預白血病目的。本實驗組數據顯示注入山莨菪堿藥物組，髂骨骨髓微血管的數量、管徑及造血組織容量較基礎干預組明顯增加(P<0.05),與干預前相比骨髓微血管的擴張、瘀血明顯減輕，微血管的斷裂消失,而基礎干預組則無明顯的改善,說明山莨菪堿能較好地促進骨髓微血管的再生及修復,從而改善了骨髓的血液流通,增加了骨髓造血細胞、基質細胞營養成分及氧氣的供應,有利于骨髓造血細胞的增殖分化。

白血病干預的目的[5]是控制血液學和遺傳學異常、消除癥狀、最大限度地延長生存。近年來干預手段和策略有較大進展。主要干預方法有化學干預、信號傳導抑制劑、造血干細胞移植干預、自體骨髓移植等，但傳統干預方法效果不佳，對白血病的各期療效不佳。目前藥物脂質體作為靶向干預劑已開始受到廣泛的關注，由于脂質體藥物[7]起到長效作用、較傳統方法提高療效、降低了毒副作用因而臨床較廣泛應用。本實驗在人慢性粒細胞性白血病兔模型的干預中，比較了脂質體阿霉素和山莨菪堿、脂質體阿霉素聯合應用干預的療效，結果表明聯合兩種方法慢性粒細胞性白血病兔模型的骨髓CD33明顯減少，一般情況迅速恢復，提示此種方法明顯優于脂質體阿霉素干預的效果。

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