淺析針劑生產中熱原的控制

張亞楠（上海現代哈森（商丘）藥業有限公司 河南 商丘 476000）

熱原(Pyrogen)又稱內毒素，注人人體可引起不良反應，可使人體產生發冷、寒顫、發熱、出汗、惡心、嘔吐等癥狀，有時體溫可升至40"C以上，嚴重者甚至昏迷、虛脫，如不及時搶救可危及生命。因此國家食品藥品監督管理局指出“生產工藝過程中應明確除熱原(或細菌內毒素)的方法及條件，如活性炭的用量、處理方法、加入時機、加熱溫度及時間等，并考察除熱原效果及對藥物成份的影響。應提供相關研究資料。”因此建立一種注射劑生產工藝過程中的熱原去除效果評價方法。

一、方法與結果

1.水中熱原去除效果試驗

取注射用水45Inl，加5rnl自制熱原，取1ml作為對照，其余加0.25g活性炭，加熱至微沸，保持15分鐘，過濾，取1ml濾過液作為活性炭吸附供試品溶液。取去離子水1000ml，加50ml自制熱原，取1ml作為對照，其余超濾，取1ml濾過液作為超濾供試品溶液。對照溶液梯度稀釋(10倍、下同)，取1／1000和1／10000兩個濃度，分別取0.1ml，加0.1ml鱟試劑，儀器測定。活性炭吸附供試品溶液和超濾供試品溶液各取原液和1／10兩個濃度，分別取0.1ml，加0.1ml鱟試劑，儀器測定。重復試驗三次。

2.內毒素測定方法

內毒素含量測定采用鱟試劑動態比濁法進行含量測定，采用光密度反應時間法測定含量。

(1)細菌內毒素標準曲線的制備：取細菌內毒素工作標準品1支，用細菌內毒檢查用水將內毒素進行2倍稀釋，使其最終濃度分別為 2.0、1.0、0.5、0.25、0.125EU ／ml的稀釋系列，各取0.1ml分別加到預先加有0．1mlTAL的反應管內，混合均勻，插入BET一72細菌內毒素測定系統內進行檢測，每個濃度重復3管。

3.評價方法

以最終內毒素量下降倍數的對數值來判斷其有效性，美國藥典與歐洲藥典分別以下降3個與4個對數(3log與41og)為有效，參照上述標準，該方案的評價指標為：設備在空載加水運行狀態，熱原去除倍數的log值不小于4，設備負載加藥液運行狀態，熱原去除倍數的log值不小于3。如達不到上述評價指標則計算內毒素吸附率。內毒素吸附率=1-(試驗數值÷對照數值)X100%

4.結論與討論

(1)實驗結果表明活性炭對于去除熱原確實有效，但大劑量細菌內毒素污染的情況下不能徹底去除。活性炭可有效吸附去除注射劑中熱原，藥液中吸附率大于70%。說明針劑在制造過程中加入活性炭吸附大量熱原(細菌內毒素)科學合理的。但以上結果也表明，對于大劑量的細菌內毒素，活性炭不能完全吸附去除。因此在注射劑制造工藝中采用活性炭除熱原，應對制造工藝的風險進行合理評估，以確保最終產品中熱原符合標準，保證藥品臨床的安全應用。

(2)試驗所采用規格的超濾膜可完全濾除熱原。通過驗證所采用超濾膜攔截水中的細菌內毒素可達到Log值大于4，在稀釋1／100的供試品中內毒素實測含量為未檢出，則其理論含量為<3Eu／ml，稀釋1／1000和稀釋l／1000的供試品中內毒素實測含量為未檢出，故其理論含量也應為<3Eu／ml。采用超濾膜去除注射劑中的細菌內毒素均能達到log值大于3，可有效的保證最終產品中熱原殘留達到要求。

(3)內毒素的含量測定方法較多BI，我們采用方法是用細菌內毒素測定儀定量的方法，此法操作比較簡單、經濟、靈敏度較高、檢測范圍較大(0.006-300EU／ml)。動態濁度法反應時間法認為內毒素濃度和成膠時間為負相關，即內毒素濃度越高成膠時間就越短。

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