茯苓菌核不同藥用部位有效成分含量
2014-08-12 14:13:58徐雷張群劉常麗等
江蘇農業科學 2014年6期
徐雷+張群+劉常麗+等
摘要：采用苯酚-濃硫酸比色法測定茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]菌核不同藥用部位茯苓多糖、三萜類成分含量，結果顯示，白茯苓、茯苓皮中多糖含量分別為72.77%、63.45%，三萜類成分含量分別為0.173%、0.419%，茯苓皮中多糖含量略遜于白茯苓，三萜類成分含量是白茯苓的2倍多。
關鍵詞：茯苓皮；白茯苓；多糖；三萜
中圖分類號： TQ464；R284.1文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）06-0289-02
收稿日期：2013-09-24
基金項目：國家科技重大專項子課題（編號：2012ZX09304006）；湖北中醫藥大學2013年科研課題青年項目。
作者簡介：徐雷（1982—），男，博士研究生，講師，從事中藥資源及其品質研究。E-mail：wuhanxulei@163.com。
通信作者：陳科力，教授，從事中藥資源及其品質研究。E-mail：kelichen@126.com。茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]為擔子菌亞門（Basidiomycotina）層菌綱（Hymenomycetes）非褶菌目（Aphyllophoracws）多孔菌科（Poliporaleae）真菌，其菌核具有利水滲濕、健脾、寧心的功效，是傳統的大宗中藥材。中醫臨床常用方劑中茯苓配伍率高達70%以上，以茯苓為原料的中成藥約300余種[1]。茯苓菌核經過發汗處理后，削下的外皮即為“茯苓皮”，內部白色部分切成茯苓塊或茯苓片，即為“白茯苓”。茯苓菌核的化學成分包括多糖類、三萜類、甾體類、蛋白質等，以三萜類、多糖類化合物為主要成分，因此可將多糖、三萜類化合物作為茯苓藥材的有效成分含量測定指標，以衡量茯苓藥材的質量[2]。當前茯苓臨床用藥以茯苓塊或茯苓片為主，無人收購茯苓皮，或者茯苓皮收購價格遠低于白茯苓，造成資源浪費。本研究對茯苓皮及白茯苓中的多糖、三萜類化學成分進行分析，旨在為茯苓皮資源開發提供依據。
1材料與方法
1.1材料
茯苓菌核采自湖北省黃岡市羅田縣九資河鎮。
1.2儀器
SK2200H型分光光度計、WG-136型電熱鼓風干燥箱、DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋、電子分析天平等。所用試劑均為分析純，對照品購自中國藥品生物制品檢定所。
1.3方法
1.3.1對照品溶液的制備稱取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL容量瓶中，溶解并定容，搖勻。精密吸取5 mL溶液，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得100 μg/mL對照品溶液。
1.3.2標準曲線的制備吸取對照品溶液0、0.1、0.2、04、0.6、0.8、1.0 mL置于具塞試管中，各加水至1.0 mL，加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻，再加入濃硫酸5 mL，搖勻，100 ℃ 水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，在490 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，糖含量為橫坐標，回歸方程為y=0.008 4x-0.000 9，r=0.999 5，線性范圍為10～100 μg。
1.3.3精密度測定分別吸取對照品溶液0.4 mL，按“1.3.2”所述步驟，測定6次吸光度，RSD值為0.56%，表明儀器精密度良好。
1.3.4重復性考察分別吸取供試品溶液0.2 mL，按“1.3.2”節所述步驟，測定6次吸光度，RSD值為2.8%，表明重現性良好。
2結果與分析
2.1加樣回收率測定
稱取5份茯苓粉末1.0 g，制成供試品溶液，分別吸取 0.1 mL 溶液，加入0.3 mL葡萄糖對照品溶液，按“1.3.2”所述步驟，測定吸光度，根據回歸方程計算糖含量，平均回收率為109.75%。
2.2三萜類成分含量測定
2.2.1對照品溶液制備稱取齊墩果酸對照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解，定容，搖勻，吸取10 mL置于100 mL容量瓶中，定容即得20 μg/mL對照品溶液。
2.2.2標準曲線的制備吸取上述對照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分別置于具塞試管中，水浴揮去溶劑，冷卻，加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液及1.0 mL高氯酸溶液，混勻，70 ℃恒溫水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加5 mL無水乙醇，搖勻，在560 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，三萜類含量為橫坐標制作標準曲線，回歸方程為y=0.011 4x-0.006 7，r=0.999 9。
2.2.3精密度考察吸取對照品溶液2 mL，按“2.2.2”所述步驟，測定6 次吸光度，RSD值為0.58%，表明儀器精密度良好。
2.2.4重復性試驗吸取供試品溶液2 mL，按“2.2.2” 所述步驟，測定6 次吸光度，RSD值為2.2%，表明重現性良好。
2.2.5加樣回收率測定稱取5份茯苓粉末600 mg，制成供試品溶液，吸取1.5 mL溶液，分別加入對照品1.0 mL，按“2.2.2” 所述步驟，測定吸光度，根據回歸方程計算糖含量，平均回收率為100.12。
2.3供試品溶液的制備和成分測定
稱取過60目篩的茯苓皮、白茯苓粉末各1.0 g置于具塞三角瓶中，加入1 mol/L NaOH溶液50mL，80 ℃水中超聲提取50 min，過濾，吸取續濾液1 mL置于50 mL容量瓶中，加水定容，得茯苓多糖供試品溶液[3]。稱取過40目篩的茯苓皮、白茯苓粉末各600 mg，置于50 mL燒杯中，加無水乙醇 30 mL，超聲波提取30 min，2 000 r/min離心5 min，取上清液置于 50 mL 容量瓶中，再用無水乙醇定容，即得茯苓三萜類成分供試品溶液。由表3、表4可知，白茯苓、茯苓皮多糖含量分別為72.77%、63.45%，三萜類成分含量分別為0173%、0419%。
3結論
茯苓多糖具有保肝、降谷丙轉氨酶、增強免疫、鎮靜、抗衰老、降血糖、抗腫瘤等藥理作用，三萜類化合物具有利尿、抗溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低膽固醇、殺軟體動物、抗生育等藥理作用[4]。本研究表明，茯苓皮中多糖含量雖然低于白茯苓，但也高達63.45%，茯苓皮中總三萜類成分含量是白茯苓的2倍多。當前應加緊制定白茯苓、茯苓皮飲片質量標準，臨床用藥過程中應根據病情有針對性的選用茯苓皮，以促進茯苓皮資源合理開發。
參考文獻：
[1]徐雷，陳科力，蘇瑋. 九資河茯苓栽培關鍵技術及發展演變[J]. 中國中醫藥信息雜志，2011，18（6）：106-108.
[2]沈玉萍，李軍，賈曉斌. 中藥茯苓化學成分的研究進展[J]. 南京中醫藥大學學報，2012，28（3）：297-300.
[3]胡明華，梁永威，彭川叢. 不同產地不同規格的茯苓水溶性多糖含量比較[J]. 中國藥業，2012，21（7）：10-12.
[4]馮亞龍，趙英永，丁凡，等. 茯苓皮的化學成分及藥理研究進展（Ⅰ）[J]. 中國中藥雜志，2013，38（7）：1098-1102.李楠，許文鳳，葉振南，等. 9種植物粗提總黃酮的體外降脂及抑制非酶糖基化的活性[J]. 江蘇農業科學，2014，42（6）：291-293.endprint
摘要：采用苯酚-濃硫酸比色法測定茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]菌核不同藥用部位茯苓多糖、三萜類成分含量，結果顯示，白茯苓、茯苓皮中多糖含量分別為72.77%、63.45%，三萜類成分含量分別為0.173%、0.419%，茯苓皮中多糖含量略遜于白茯苓，三萜類成分含量是白茯苓的2倍多。
關鍵詞：茯苓皮；白茯苓；多糖；三萜
中圖分類號： TQ464；R284.1文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）06-0289-02
收稿日期：2013-09-24
基金項目：國家科技重大專項子課題（編號：2012ZX09304006）；湖北中醫藥大學2013年科研課題青年項目。
作者簡介：徐雷（1982—），男，博士研究生，講師，從事中藥資源及其品質研究。E-mail：wuhanxulei@163.com。
通信作者：陳科力，教授，從事中藥資源及其品質研究。E-mail：kelichen@126.com。茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]為擔子菌亞門（Basidiomycotina）層菌綱（Hymenomycetes）非褶菌目（Aphyllophoracws）多孔菌科（Poliporaleae）真菌，其菌核具有利水滲濕、健脾、寧心的功效，是傳統的大宗中藥材。中醫臨床常用方劑中茯苓配伍率高達70%以上，以茯苓為原料的中成藥約300余種[1]。茯苓菌核經過發汗處理后，削下的外皮即為“茯苓皮”，內部白色部分切成茯苓塊或茯苓片，即為“白茯苓”。茯苓菌核的化學成分包括多糖類、三萜類、甾體類、蛋白質等，以三萜類、多糖類化合物為主要成分，因此可將多糖、三萜類化合物作為茯苓藥材的有效成分含量測定指標，以衡量茯苓藥材的質量[2]。當前茯苓臨床用藥以茯苓塊或茯苓片為主，無人收購茯苓皮，或者茯苓皮收購價格遠低于白茯苓，造成資源浪費。本研究對茯苓皮及白茯苓中的多糖、三萜類化學成分進行分析，旨在為茯苓皮資源開發提供依據。
1材料與方法
1.1材料
茯苓菌核采自湖北省黃岡市羅田縣九資河鎮。
1.2儀器
SK2200H型分光光度計、WG-136型電熱鼓風干燥箱、DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋、電子分析天平等。所用試劑均為分析純，對照品購自中國藥品生物制品檢定所。
1.3方法
1.3.1對照品溶液的制備稱取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL容量瓶中，溶解并定容，搖勻。精密吸取5 mL溶液，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得100 μg/mL對照品溶液。
1.3.2標準曲線的制備吸取對照品溶液0、0.1、0.2、04、0.6、0.8、1.0 mL置于具塞試管中，各加水至1.0 mL，加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻，再加入濃硫酸5 mL，搖勻，100 ℃ 水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，在490 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，糖含量為橫坐標，回歸方程為y=0.008 4x-0.000 9，r=0.999 5，線性范圍為10～100 μg。
1.3.3精密度測定分別吸取對照品溶液0.4 mL，按“1.3.2”所述步驟，測定6次吸光度，RSD值為0.56%，表明儀器精密度良好。
1.3.4重復性考察分別吸取供試品溶液0.2 mL，按“1.3.2”節所述步驟，測定6次吸光度，RSD值為2.8%，表明重現性良好。
2結果與分析
2.1加樣回收率測定
稱取5份茯苓粉末1.0 g，制成供試品溶液，分別吸取 0.1 mL 溶液，加入0.3 mL葡萄糖對照品溶液，按“1.3.2”所述步驟，測定吸光度，根據回歸方程計算糖含量，平均回收率為109.75%。
2.2三萜類成分含量測定
2.2.1對照品溶液制備稱取齊墩果酸對照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解，定容，搖勻，吸取10 mL置于100 mL容量瓶中，定容即得20 μg/mL對照品溶液。
2.2.2標準曲線的制備吸取上述對照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分別置于具塞試管中，水浴揮去溶劑，冷卻，加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液及1.0 mL高氯酸溶液，混勻，70 ℃恒溫水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加5 mL無水乙醇，搖勻，在560 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，三萜類含量為橫坐標制作標準曲線，回歸方程為y=0.011 4x-0.006 7，r=0.999 9。
2.2.3精密度考察吸取對照品溶液2 mL，按“2.2.2”所述步驟，測定6 次吸光度，RSD值為0.58%，表明儀器精密度良好。
2.2.4重復性試驗吸取供試品溶液2 mL，按“2.2.2” 所述步驟，測定6 次吸光度，RSD值為2.2%，表明重現性良好。
2.2.5加樣回收率測定稱取5份茯苓粉末600 mg，制成供試品溶液，吸取1.5 mL溶液，分別加入對照品1.0 mL，按“2.2.2” 所述步驟，測定吸光度，根據回歸方程計算糖含量，平均回收率為100.12。
2.3供試品溶液的制備和成分測定
稱取過60目篩的茯苓皮、白茯苓粉末各1.0 g置于具塞三角瓶中，加入1 mol/L NaOH溶液50mL，80 ℃水中超聲提取50 min，過濾，吸取續濾液1 mL置于50 mL容量瓶中，加水定容，得茯苓多糖供試品溶液[3]。稱取過40目篩的茯苓皮、白茯苓粉末各600 mg，置于50 mL燒杯中，加無水乙醇 30 mL，超聲波提取30 min，2 000 r/min離心5 min，取上清液置于 50 mL 容量瓶中，再用無水乙醇定容，即得茯苓三萜類成分供試品溶液。由表3、表4可知，白茯苓、茯苓皮多糖含量分別為72.77%、63.45%，三萜類成分含量分別為0173%、0419%。
3結論
茯苓多糖具有保肝、降谷丙轉氨酶、增強免疫、鎮靜、抗衰老、降血糖、抗腫瘤等藥理作用，三萜類化合物具有利尿、抗溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低膽固醇、殺軟體動物、抗生育等藥理作用[4]。本研究表明，茯苓皮中多糖含量雖然低于白茯苓，但也高達63.45%，茯苓皮中總三萜類成分含量是白茯苓的2倍多。當前應加緊制定白茯苓、茯苓皮飲片質量標準，臨床用藥過程中應根據病情有針對性的選用茯苓皮，以促進茯苓皮資源合理開發。
參考文獻：
[1]徐雷，陳科力，蘇瑋. 九資河茯苓栽培關鍵技術及發展演變[J]. 中國中醫藥信息雜志，2011，18（6）：106-108.
[2]沈玉萍，李軍，賈曉斌. 中藥茯苓化學成分的研究進展[J]. 南京中醫藥大學學報，2012，28（3）：297-300.
[3]胡明華，梁永威，彭川叢. 不同產地不同規格的茯苓水溶性多糖含量比較[J]. 中國藥業，2012，21（7）：10-12.
[4]馮亞龍，趙英永，丁凡，等. 茯苓皮的化學成分及藥理研究進展（Ⅰ）[J]. 中國中藥雜志，2013，38（7）：1098-1102.李楠，許文鳳，葉振南，等. 9種植物粗提總黃酮的體外降脂及抑制非酶糖基化的活性[J]. 江蘇農業科學，2014，42（6）：291-293.endprint
摘要：采用苯酚-濃硫酸比色法測定茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]菌核不同藥用部位茯苓多糖、三萜類成分含量，結果顯示，白茯苓、茯苓皮中多糖含量分別為72.77%、63.45%，三萜類成分含量分別為0.173%、0.419%，茯苓皮中多糖含量略遜于白茯苓，三萜類成分含量是白茯苓的2倍多。
關鍵詞：茯苓皮；白茯苓；多糖；三萜
中圖分類號： TQ464；R284.1文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）06-0289-02
收稿日期：2013-09-24
基金項目：國家科技重大專項子課題（編號：2012ZX09304006）；湖北中醫藥大學2013年科研課題青年項目。
作者簡介：徐雷（1982—），男，博士研究生，講師，從事中藥資源及其品質研究。E-mail：wuhanxulei@163.com。
通信作者：陳科力，教授，從事中藥資源及其品質研究。E-mail：kelichen@126.com。茯苓[Poria cocos （Schw.） Wolf]為擔子菌亞門（Basidiomycotina）層菌綱（Hymenomycetes）非褶菌目（Aphyllophoracws）多孔菌科（Poliporaleae）真菌，其菌核具有利水滲濕、健脾、寧心的功效，是傳統的大宗中藥材。中醫臨床常用方劑中茯苓配伍率高達70%以上，以茯苓為原料的中成藥約300余種[1]。茯苓菌核經過發汗處理后，削下的外皮即為“茯苓皮”，內部白色部分切成茯苓塊或茯苓片，即為“白茯苓”。茯苓菌核的化學成分包括多糖類、三萜類、甾體類、蛋白質等，以三萜類、多糖類化合物為主要成分，因此可將多糖、三萜類化合物作為茯苓藥材的有效成分含量測定指標，以衡量茯苓藥材的質量[2]。當前茯苓臨床用藥以茯苓塊或茯苓片為主，無人收購茯苓皮，或者茯苓皮收購價格遠低于白茯苓，造成資源浪費。本研究對茯苓皮及白茯苓中的多糖、三萜類化學成分進行分析，旨在為茯苓皮資源開發提供依據。
1材料與方法
1.1材料
茯苓菌核采自湖北省黃岡市羅田縣九資河鎮。
1.2儀器
SK2200H型分光光度計、WG-136型電熱鼓風干燥箱、DK-98-1型電熱恒溫水浴鍋、電子分析天平等。所用試劑均為分析純，對照品購自中國藥品生物制品檢定所。
1.3方法
1.3.1對照品溶液的制備稱取105 ℃干燥至恒重的葡萄糖50 mg，置于50 mL容量瓶中，溶解并定容，搖勻。精密吸取5 mL溶液，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得100 μg/mL對照品溶液。
1.3.2標準曲線的制備吸取對照品溶液0、0.1、0.2、04、0.6、0.8、1.0 mL置于具塞試管中，各加水至1.0 mL，加入5%苯酚溶液1.0 mL，搖勻，再加入濃硫酸5 mL，搖勻，100 ℃ 水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，在490 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標，糖含量為橫坐標，回歸方程為y=0.008 4x-0.000 9，r=0.999 5，線性范圍為10～100 μg。
1.3.3精密度測定分別吸取對照品溶液0.4 mL，按“1.3.2”所述步驟，測定6次吸光度，RSD值為0.56%，表明儀器精密度良好。
1.3.4重復性考察分別吸取供試品溶液0.2 mL，按“1.3.2”節所述步驟，測定6次吸光度，RSD值為2.8%，表明重現性良好。
2結果與分析
2.1加樣回收率測定
稱取5份茯苓粉末1.0 g，制成供試品溶液，分別吸取 0.1 mL 溶液，加入0.3 mL葡萄糖對照品溶液，按“1.3.2”所述步驟，測定吸光度，根據回歸方程計算糖含量，平均回收率為109.75%。
2.2三萜類成分含量測定
2.2.1對照品溶液制備稱取齊墩果酸對照品20 mg，置于100 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解，定容，搖勻，吸取10 mL置于100 mL容量瓶中，定容即得20 μg/mL對照品溶液。
2.2.2標準曲線的制備吸取上述對照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，分別置于具塞試管中，水浴揮去溶劑，冷卻，加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液及1.0 mL高氯酸溶液，混勻，70 ℃恒溫水浴20 min，取出，置冷水浴中迅速冷卻至室溫，加5 mL無水乙醇，搖勻，在560 nm波長處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，三萜類含量為橫坐標制作標準曲線，回歸方程為y=0.011 4x-0.006 7，r=0.999 9。
2.2.3精密度考察吸取對照品溶液2 mL，按“2.2.2”所述步驟，測定6 次吸光度，RSD值為0.58%，表明儀器精密度良好。
2.2.4重復性試驗吸取供試品溶液2 mL，按“2.2.2” 所述步驟，測定6 次吸光度，RSD值為2.2%，表明重現性良好。
2.2.5加樣回收率測定稱取5份茯苓粉末600 mg，制成供試品溶液，吸取1.5 mL溶液，分別加入對照品1.0 mL，按“2.2.2” 所述步驟，測定吸光度，根據回歸方程計算糖含量，平均回收率為100.12。
2.3供試品溶液的制備和成分測定
稱取過60目篩的茯苓皮、白茯苓粉末各1.0 g置于具塞三角瓶中，加入1 mol/L NaOH溶液50mL，80 ℃水中超聲提取50 min，過濾，吸取續濾液1 mL置于50 mL容量瓶中，加水定容，得茯苓多糖供試品溶液[3]。稱取過40目篩的茯苓皮、白茯苓粉末各600 mg，置于50 mL燒杯中，加無水乙醇 30 mL，超聲波提取30 min，2 000 r/min離心5 min，取上清液置于 50 mL 容量瓶中，再用無水乙醇定容，即得茯苓三萜類成分供試品溶液。由表3、表4可知，白茯苓、茯苓皮多糖含量分別為72.77%、63.45%，三萜類成分含量分別為0173%、0419%。
3結論
茯苓多糖具有保肝、降谷丙轉氨酶、增強免疫、鎮靜、抗衰老、降血糖、抗腫瘤等藥理作用，三萜類化合物具有利尿、抗溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低膽固醇、殺軟體動物、抗生育等藥理作用[4]。本研究表明，茯苓皮中多糖含量雖然低于白茯苓，但也高達63.45%，茯苓皮中總三萜類成分含量是白茯苓的2倍多。當前應加緊制定白茯苓、茯苓皮飲片質量標準，臨床用藥過程中應根據病情有針對性的選用茯苓皮，以促進茯苓皮資源合理開發。
參考文獻：
[1]徐雷，陳科力，蘇瑋. 九資河茯苓栽培關鍵技術及發展演變[J]. 中國中醫藥信息雜志，2011，18（6）：106-108.
[2]沈玉萍，李軍，賈曉斌. 中藥茯苓化學成分的研究進展[J]. 南京中醫藥大學學報，2012，28（3）：297-300.
[3]胡明華，梁永威，彭川叢. 不同產地不同規格的茯苓水溶性多糖含量比較[J]. 中國藥業，2012，21（7）：10-12.
[4]馮亞龍，趙英永，丁凡，等. 茯苓皮的化學成分及藥理研究進展（Ⅰ）[J]. 中國中藥雜志，2013，38（7）：1098-1102.李楠，許文鳳，葉振南，等. 9種植物粗提總黃酮的體外降脂及抑制非酶糖基化的活性[J]. 江蘇農業科學，2014，42（6）：291-293.endprint
