MIF、MMP-9在胃癌組織中的表達及臨床意義

包 泱，常家聰，王道斌

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，其發生和發展是多階段進行性的過程，但具體發生機制至今尚未完全明確。巨噬細胞移動抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)是由活化T淋巴細胞分泌，并可抑制單核巨噬細胞移動的細胞因子，由Bloom et al［1］首次發現并命名。MIF在多種腫瘤中過度表達，且MIF促進腫瘤的侵襲及轉移，影響腫瘤嚴重程度及預后。基質金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9，MMP-9)作為基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)家族中的一員，在腫瘤的發生和轉移過程中所發揮的作用已在多種腫瘤中得到證實。Li et al［2］研究表明MIF可能在腫瘤早期階段通過誘導MMP-9和白細胞介素8(interleukin-8，IL-8)的表達來促進腫瘤細胞的侵襲浸潤和轉移。MIF誘導MMP-9的表達上調在大鼠骨母細胞中已經得到證實［3］，但二者在胃癌組織中的表達情況及關系近年來國內外未見報道。該研究檢測MIF和MMP-9在胃癌及其癌旁組織中的表達情況，回顧性分析其臨床病理特點，探討MIF及MMP-9在胃癌發生和發展中的關系，為胃癌的診斷、治療及預后的判斷提供依據。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集2007年6月～2008年6月安徽醫科大學第一附屬醫院普通外科收治的80例胃癌患者的術后組織蠟塊標本，患者術前均未接受放化療治療，術后均經病理證實，均無同時患有其他惡性腫瘤。選取同組病例癌旁正常組織(距腫瘤邊緣約5 cm)標本80例作對照組，所有病例臨床及病理資料完整，見表1。

1.2 主要試劑 濃縮型兔抗人MIF多克隆抗體、濃縮型兔抗人MMP-9多克隆抗體均購自北京博奧森生物技術有限公司;SP試劑盒、PBS緩沖液、枸櫞酸緩沖液和DAB顯色液等均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 免疫組化SP法檢測組織中MIF和MMP-9的表達 標本石蠟包埋行約4 μm厚切片，具體操作步驟參照SP試劑盒說明書進行。用已知陽性胃癌組織切片作為陽性對照，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。

1.4 免疫組化陽性判斷及數據統計 MIF陽性染色標準為細胞質或細胞膜呈棕黃色顆粒為陽性，MMP-9陽性染色標準為細胞質或細胞膜呈棕黃色顆粒為陽性。選擇合適部位選取5個高倍視野(×400)，每個高倍鏡視野計數100個細胞，高倍鏡下計數陽性細胞比例，以＞20%為陽性表達。

1.5 統計學處理 應用SPSS 13.0軟件分析。各組之間比較相關性檢驗和χ2檢驗，并計算Pearson列聯系數r。

2 結果

2.1 MIF和MMP-9在胃癌和癌旁組織中的表達

MIF和MMP-9在胃癌和癌旁組織中均可見陽性表達。MIF在胃癌組織中的陽性表達率(68.8%)高于癌旁正常組織的陽性表達率(32.5%)(χ2=21.028，P＜0.01)，MMP-9在癌組織中的陽性表達率(67.5%)高于癌旁正常組織的陽性表達率(37.5%)(χ2=14.436，P ＜0.01)。見圖1、表1。

圖1 胃癌及癌旁正常組織中MIF及MMP-9的表達 SP×400

2.2 MIF和MMP-9的表達與胃癌臨床病理參數間的關系 MIF陽性表達與腫瘤浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移及TNM分期有關(P＜0.05)，與其他因素無明顯相關;MMP-9陽性表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移及TNM分期有關(P＜0.05)，與其他因素無明顯相關性，見表1。

2.3 MIF和MMP-9的表達關系 在80例胃癌組織中，有55例MIF陽性表達，其中同時合并MMP-9陽性表達的有43例;有25例MIF陰性表達，其中同時合并MMP-9陰性表達的有14例。MIF和MMP-9的表達存在關聯(χ2=9.154，P ＜0.01，r=0.338)。

3 討論

MIF最初被認為是充當固有性免疫的重要調節因子，現發現MIF在其他方面也起作用。研究［4］表明MIF涉及免疫、炎癥、腫瘤和血管等方面疾病的發病。MIF作為一種獨特的促進惡性腫瘤發生的細胞因子在其發展中可能起雙重作用，既可通過自分泌途徑調節炎細胞的殺瘤活性，又可通過旁分泌途徑促進瘤細胞的增殖、分化轉移等。MIF通過抑制p53基因直接促進腫瘤的形成，激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族成員和促進腫瘤血管生成方式促進腫瘤的增殖和轉移［5］，還可以通過提高低氧介導缺氧誘導轉錄因子1(HIF-1)穩定性使腫瘤適應低氧環境，利于腫瘤的侵襲與轉移［6－7］。到目前為止，已發現多種腫瘤細胞株如肺非小細胞癌、膀胱癌、神經母細胞瘤、結腸癌等細胞上有MIF表達，提示MIF可能與腫瘤細胞分化、增殖有關［8］。本研究結果表明，胃癌組織中MIF陽性表達明顯高于癌旁正常組織，同時結合患者的臨床病理資料，MIF陽性表達與胃癌的臨床分期、分化程度、浸潤程度及有無淋巴結轉移有關，這與MIF在其他腫瘤演進中的作用相吻合［9－10］。MIF的表達與胃癌的生物學行為密切相關，胃癌的臨床分期越晚分化程度越低，其陽性表達率越高，在伴有淋巴結轉移和遠處轉移的胃癌組織中其陽性表達率高。MIF的表達在一定程度上反映胃癌細胞的增殖轉移情況，在胃癌的發生發展中有重要的促進作用，可作為判斷胃癌預后指標之一。

表1 胃癌組織中MIF和MMP-9的表達與臨床病理參數的關系

MMP-9是MMPs家族中分子量最大的酶，又稱明膠酶B，主要由結締組織細胞、內皮細胞、巨噬細胞、粒細胞及腫瘤細胞等合成和分泌［11］。其主要作用是降解細胞外基質(ECM)中的IV型膠原，使腫瘤突破原發部位正常基底膜，同時降解血管和淋巴管基底膜，使腫瘤細胞直接浸潤并進入血管淋巴管，參與腫瘤的侵襲與轉移［12］。本研究顯示MMP-9在癌組織和癌旁組織中均有陽性表達，且癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，這與相關研究［13－14］結果一致，提示MMP-9參與胃癌的發生過程。浸出胃漿膜及有淋巴結轉移的胃癌患者的癌組織中MMP-9顯著高于漿膜內癌及無淋巴結轉移的胃癌患者，提示其表達與腫瘤的浸潤深度、有無淋巴結轉移及TNM分期有關。MMP-9與胃癌的易感性、轉移和侵襲及患者的預后存在密切關系，進一步研究MMP-9的作用機制，更好地控制腫瘤的侵襲，提高侵襲性腫瘤的治療效果和改善預后將成為今后研究工作的重點。

相關研究［15］顯示，巨噬細胞及成纖維細胞等細胞中MIF可能通過激活MEK-ERK MAP激酶途徑誘導MMP-9的產生參與相關炎癥性疾病的發展過程，MIF也可通過促進MMP-9與IL-8的表達促進早期階段腫瘤細胞的浸潤和轉移［2］。本研究結果表明MIF和MMP-9在胃癌組織中呈正相關，與上述研究結果相吻合，二者在胃癌的發生發展過程中有相互協同作用，但二者的這種作用的具體機制尚不完全明確，有待進一步研究。

綜上所述，MIF及MMP-9在胃癌中的陽性表達及聯合檢測可作為評價胃癌的發生發展、惡性程度及轉移與否的重要指標，對胃癌的早期診斷治療及預后等具有重要指導意義。

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