微波加熱炮制王不留行和芥子的可行性研究

楊曉東，李福兵，劉興文

(重慶市北碚區中醫院，重慶 400700)

微波加熱炮制種子類藥材有一定的優勢[1]。為了進一步探討該技術在中藥炮制領域的廣泛適應性，筆者設計了微波加熱炮制王不留行和芥子與傳統炒制法的對比試驗。現報道如下。

1 儀器與試藥

微波爐(格蘭仕WP700 型);普通電炒鍋;YFⅢ型粉碎機(浙江瑞安市永歷制藥機械有限公司);藥典篩;Agilent 1200 型高效液相色譜儀(配有VWD 檢測器，四元梯度泵);Chem Station 工作站(Agilent 科技有限公司);HC-TPⅡ-10 型架盤藥物天平(上海精科天平);HHS 型電熱數顯水浴鍋(上海博迅實業有限公司醫療設備廠)。王不留行對照藥材(批號為121094-201004)，芥子對照藥材(批號為121150 -200502)，芥子堿硫氰酸鹽對照品(批號為111702 -200501)，王不留行黃酮苷對照品(批號為111902 -201105)，均購自中國藥品生物制品檢定所;甲醇、乙腈為色譜醇;試驗用水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 炮制品制備

取王不留行、芥子各500 g，分別按2010 年版《中國藥典(一部)》炮制通則清炒法(附錄ⅡD)依法炮制，即得傳統炮制品[2]附錄20。取王不留行、芥子各500 g，分別平鋪在轉盤上，0.5 ～1 cm 厚，放入微波爐，加熱炮制到藥典中對該2 個品種規定的要求[2]49，149，即得微波炮制品。

2.2 外觀性狀比較

試驗結果表明，微波法與清炒法的成品外觀性狀均能達到《中國藥典(一部)》炒法所要求的炮制標準—— 顏色變至淡黃至深黃色，其中微波法炮制王不留行的爆花率(98%)高于傳統清炒法(90%)。

2.3 薄層色譜比較[2]49，149

王不留行炮制品:取王不留行清炒品和微波炮制品粉末各1.5 g，分別加甲醇20 mL，加熱回流30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL 使溶解，作為清炒品和微波炮制品的供試品溶液。另取王不留行對照藥材1.5 g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述對照藥材溶液及2 種供試品溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(15 ∶7 ∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。結果見圖1。在微波法與清炒品的供試品溶液色譜中，在與對照藥材色譜溶液相應的位置上，均顯相同的橙紅色斑點。

圖1 王不留行炮制品薄層色譜圖

芥子炮制品:取芥子清炒品和微波炮制品粉末各1 g，分別加甲醇50 mL，超聲處理1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL 使溶解，作為清炒品和微波炮制品的供試品溶液。另取芥子對照藥材1 g，同法制成芥子對照藥材溶液;再取芥子堿硫氰酸鹽對照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4 種溶液各5 ～10 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5 ∶3 ∶1 ∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。結果見圖2。供試品溶液色譜中，在與對照品和對照藥材溶液色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點。

圖2 芥子炮制品薄層色譜圖

2.4 浸出物比較[2]附錄62

王不留行炮制品:分別取清炒及微波炮制王不留行粉末約4 g(過二號篩)，照水溶性浸出物測定法測定，以乙醇代替水為溶劑，測定兩種炮制品的浸出物含量(%)。結果王不留行浸出物含量清炒品為13.82%，微波炮制品為15.31%，微波炮制品比清炒品浸出物高11.0%。

芥子炮制品:分別取清炒及微波炮制芥子粉末約4 g(過二號篩)，精密稱定，置250 ～300 mL 錐形瓶中，精密加水100 mL，塞緊，冷浸，前6 h 內時時振搖，再靜置18 h，用干燥濾器迅速濾過，精密量取續濾液20 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定質量，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。結果芥子浸出物含量清炒品為6.61%，微波炮制品為6.91%，微波炮制品比清炒高5.0%。

2.5 王不留行炮制品的含量測定

2.5.1 溶液制備

精密稱取王不留行黃酮苷對照品5 mg 至50 mL 容量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每1 mL 含王不留行黃酮苷0.1 mg)。精密稱取王不留行清炒品和微波炮制品粉末(過三號篩)各1.2 g，分別置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理(功率250 W，頻率33 kHz)30 min，放冷，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2.5.2 色譜條件與系統適用性試驗

參考2010 年版《中國藥典(一部)》和文獻資料，確定以十八烷基鍵合硅膠為填充劑;以甲醇為流動相A，以0.3%磷酸溶液為流動相B，按表1 中的規定進行梯度洗脫;檢測波長為280 nm。理論板數按王不留行黃酮苷峰計算應 不 低 于3 000[249，149，3]，色 譜 圖 見圖3。

表1 王不留行流動相梯度洗脫表

圖3 王不留行炮制品高效液相色譜圖

2.5.3 方法學考察

標準曲線制備:吸取王不留行黃酮苷對照品溶液6，9，12，15，18 μL 依次進樣，依法測定，以王不留行黃酮苷進樣量( X)與峰面積值( Y)作圖，得線性回歸方程Y=138 459 X+146 088，R2=0.999 8。結果表明，王不留行黃酮苷進樣質量在0.6 ～1.8 μg范圍內呈良好線性關系。

穩定性試驗:在擬訂的色譜條件下，取同一供試品溶液，在0，2，4，6，8 h 時測定峰面積值。結果的RSD 為1.76%(n=5)，表明供試品溶液在8 h 內穩定。

精密度試驗:在擬訂的色譜條件下，精密吸取對照品溶液，連續進樣5 次，記錄峰面積值。結果的RSD 為1.69%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:在擬訂的色譜條件下，取同一批樣品，平行制備6 份供試品溶液，依次進樣，記錄峰面積值并計算含量。結果的RSD 為2.22%(n=6)，表明方法重復性好。

加樣回收試驗:在擬訂的色譜條件下，取已知含量的供試品溶液3 份，分別精密加入對照品溶液1，1.2，1.4 mL，照前述供試品溶液制備方法制備加樣回收溶液，依法測定，記錄峰面積值，按外標法分別計算含量。結果見表2。

表2 加樣回收試驗結果( n=6)

2.5.4 樣品含量測定

按擬訂的色譜條件，精密吸取王不留行供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積值，按外標法分別計算含量，結果見表3。可見，王不留行微波品中王不留行黃酮苷的含量為王不留行清炒品1.06 倍，含量差異顯著，說明微波炮制法優于清炒法。

表3 樣品含量測定結果

2.6 芥子炮制品的含量測定

2.6.1 溶液制備

精密稱取芥子堿硫氰酸鹽對照品5 mg 至25 mL 容量瓶中，加乙腈-0.08 mol/L 磷酸二氫鉀(10 ∶90)溶液至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每1 mL 含芥子堿硫氰酸鹽0.2 mg)。精密稱取芥子清炒品和微波炮制品粉末(過三號篩)各1 g，分別置具塞錐形瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理(功率150 W，頻率20 kHz)20 min，濾過，濾渣再用甲醇同法提取3 次，濾液合并;減壓回收溶劑至干，殘渣加流動相溶解，轉移50 mL 容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得芥子清炒品和微波炮制品供試品溶液。

2.6.2 色譜條件與系統適用性試驗

參考2010 年版《中國藥典(一部)》和文獻資料，確定以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;流動相為乙腈-0.08 mol/L 磷酸二氫鉀溶液(10 ∶90);檢測波長為326 nm。理論板數按芥子堿計算應不低于3 000[2]49，149。色譜圖見圖4。

2.6.3 方法學考察

標準曲線制備:吸取芥子堿硫氰酸鹽對照品溶液6，9，12，15，18 μL，依次進樣，依法測定，以芥子堿硫氰酸鹽進樣量( X)與峰面積值( Y)作圖，得芥子堿硫氰酸鹽線性回歸方程 Y =250 757 X+258 129，R2=0.999 7。結果表明，芥子堿硫氰酸鹽質量在1.2 ～3.6 μg 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

穩定性試驗:在擬訂的色譜條件下，取芥子供試品溶液，在0，2，4，6，8 h 進樣并測定峰面積值。結果的RSD 為0.12%(n=5)，表明供試品溶液在8 h 內穩定。

精密度試驗:在擬訂的色譜條件下，精密吸取芥子對照品溶液1 份，連續進樣5 次，記錄峰面積值。結果的RSD 為0.11%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復性試驗:在擬訂的色譜條件下，取同一批樣品，平行制備6 份供試品溶液，依次進樣，記錄峰面積值并計算含量，結果的RSD 為0.56%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:在擬訂的色譜條件下，取已知含量的供試品溶液6 份，分別精密加入對照品溶液0.4，0.5，0.6 mL，照前述供試品溶液制備方法制備加樣回收溶液，依法測定，記錄峰面積值，按外標法分別計算含量。結果見表2。

2.6.4 樣品含量測定

按擬訂的色譜條件，精密吸取芥子供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積值(見圖4)，按外標法分別計算含量。結果見表3。可見，芥子堿硫氰酸鹽的含量芥子微波品為0.678%，芥子清炒品為0.612%，含量差異顯著，說明微波炮制法優于清炒法。

3 討論

從外觀性狀比較，清炒法與微波法的成品外觀均能達到藥典對該品種的要求，其中王不留行微波法的爆花率還高于傳統清炒法，且微波炮制的時間也比清炒法時間短。薄層色譜結果表明，清炒法與微波法的成品中都能出現與對照品和對照藥材相同顏色的斑點，說明微波法沒有改變供試品中的主要指標成分。浸出物測定結果表明，清炒法與微波法的成品均能達到藥典的規定，其中王不留行微波法比清炒法浸出物高11%，芥子微波法比清炒法浸出物高5%，說明微波法優于傳統清炒法。含量測定結果表明，清炒法與微波法的成品均能達到藥典的規定，且微波法的含量均高于傳統清炒法，說明通過微波炮制后，更有利于飲片中有效成分的溶出。

致謝:本研究得到了成都新荷花中藥飲片股份有限公司周靜波博士及其同事無私的支持和幫助，謹表謝意。

[1] 李福兵，楊曉東，劉興文. 牛蒡子微波加熱炒制與傳統清炒法的比較試驗[J]. 中國藥業，2013，22(8):33 -34.

圖4 芥子炮制品高效液相色譜圖

[2] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京:中國醫藥科技出版社:2010.

[3] 蔡寶昌. 劉訓紅. 常用中藥材HPLC 指紋圖譜測定技術[M]. 北京:化學工業出版社，2006:23 -24.