3種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的毒力測定和田間藥效試驗

李寶燕　王英姿　劉學卿　任愛梅　趙玖華

摘要：為了給田間防治葡萄霜霉病提供安全、高效的殺菌劑，采用室內毒力測定和田間試驗相結合的方法，研究了3種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的毒力和藥效，結果表明，88%代森錳鋅、97.4%烯酰嗎啉、98%嘧菌酯的抑菌中濃度（EC50）分別為61.9、560、1.35 mg/L，其中，98%嘧菌酯對葡萄霜霉病菌的毒力最強；50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液及25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液對葡萄霜霉病的防效較好。

關鍵詞：葡萄；霜霉病；毒力測定；田間防效；烯酰嗎啉；嘧菌酯；代森錳鋅

中圖分類號： S436.631.1+9文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0098-02

收稿日期：2013-05-22

基金項目：國家公益性行業（農業）科研專項（編號：201203035）。

作者簡介：李寶燕（1983—），女，山東濟南人，博士，農藝師，主要從事植物病蟲害防治技術研究。E-mail：byli1314@163.com。葡萄在我國種植廣泛，是山東煙臺的主要經濟作物之一。葡萄霜霉病（grape downy mildew）由病原真菌葡萄生單軸霉[Plasmopara viticola （Berk. et Curtis）Berl. et de Toni]引起，是葡萄主要病害之一[1]，該病嚴重流行時，葉片焦枯早落，枝梢扭曲畸形，幼果布滿白色霉層、皺縮脫落，嚴重影響葡萄生長及果實產量和品質，給葡萄產業造成重大的經濟損失。在葡萄霜霉病的綜合防治中，藥劑防治仍是一項不可缺少的重要防治措施[2]。2012年，筆者對煙臺生產上防治霜霉病的主要藥劑代森錳鋅、烯酰嗎啉和嘧菌酯進行了防治葡萄霜霉病的室內抑菌活性測定和田間藥效試驗，以期為葡萄霜霉病田間防治提供安全、高效、經濟的殺菌劑。

1材料與方法

1.1供試藥劑

88%代森錳鋅原藥、97.4%烯酰嗎啉原藥和98%嘧菌酯原藥均由山東省農業科學院提供。80%代森錳鋅可濕性粉劑（大生-M45）為陶氏益農農業科技（中國）有限公司產品；50%烯酰嗎啉可濕性粉劑（安克）為德國巴斯夫貿易股份有限公司產品；25%嘧菌酯懸浮劑（阿米西達）為瑞士先正達作物保護有限公司產品。

1.2室內抑菌活性測定

1.2.1孢子懸浮液的配制取田間自然發病的新鮮葡萄病葉，用自來水沖洗凈表面的孢子后，將病葉置于25 ℃條件下保濕24 h來培養新鮮的孢子；用干凈的毛筆將新鮮孢子刷于無菌蒸餾水中，配成孢子懸浮液；在顯微鏡下調整孢子懸浮液濃度至5×105 個/mL用于試驗測定。

1.2.2接種方法將88%代森錳鋅原藥依次稀釋為800、400、100、50、25 mg/L；97.4%烯酰嗎啉原藥依次稀釋為80、40、20、10、5 mg/L；98%嘧菌酯原藥依次稀釋為12.5、6.25、3125、1.563、0.781 mg/L。試驗采取葉盤法[3]，將葡萄新枝條上健康無病的4～5位葉片噴灑相應的藥液后自然晾干，用打孔器打取直徑1 cm的葉盤，葉背面朝上置于鋪有無菌濕潤濾紙的培養皿中，每皿放置15個葉盤；在葉盤中央滴20 μL孢子懸浮液，置于生物培養箱中培養，培養條件為溫度25 ℃、濕度保持在80%左右、光照12 h/d。對照葉片噴施等量清水，晾干，打取葉盤后滴加等量的菌液。每處理重復4皿，5～7 d后調查發病情況。

1.2.3統計方法病情調查采用6級記載法[4]，根據病斑面積占葉盤面積的百分率劃分病級：0級，無病斑；1級，病斑面積占整個葉面積的5%以下；3級，病斑面積占整個葉面積的6%～25%；5級，病斑面積占整個葉面積的26%～50%；7級，病斑面積占整個葉面積的51%～75%；9級，病斑面積占整個葉面積的75%以上。

計算病情指數和各濃度藥劑對葡萄霜霉病菌的抑制率，并用統計軟件計算出毒力回歸方程及抑菌中濃度（EC50）。病情指數和抑菌率計算公式為：病情指數=[∑（各級發病葉盤數×相對級數值）/（總葉盤數×9）]×100%；抑菌率=[（對照病情指數-處理病情指數）/ 對照病情指數]×100%。

1.3田間藥效試驗

1.3.1試驗地點及概況試驗于2012年7—9月在煙臺市蓬萊潮水試驗場進行，該園為葡萄霜霉病常年發病區，沙壤土質，肥水良好，管理水平較高。試驗葡萄品種為5年生蛇龍珠，株行距1.0 m×1.5 m。

1.3.2試驗設計及調查方法試驗設4個處理：80%代森錳鋅可濕性粉劑800倍液；50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液；25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液；以清水作對照。每1處理1個小區，小區面積為12 m2（1.5 m×8 m），每小區種植8棵葡萄樹，4次重復，共16個小區，隨機區組排列。于霜霉病發病初期（正值果實膨大期），以工農16型背負式噴霧器進行噴霧，間隔7～10 d，連續用藥3次。第2次藥后7 d和第3次藥后10 d進行田間調查，每小區隨機選取10個新枝條，調查每個枝條上全部葉片和病葉數，并按病斑占整個葉面積的百分比，采用6級記載法[4]對病葉進行分級，計算病情指數，求出防效，并對各小區的防效反正弦轉換后進行方差分析，用LSR法進行多重比較。

病情指數和防治效果計算公式為：病情指數=[∑（發病葉片數×相應發病級數）/（調查總葉片數×9）]×100%；防治效果=[1-（噴藥前空白區病情指數×噴藥后處理區病情指數）/（噴藥后空白區病情指數×噴藥前處理區病情指數）]×100%。

2結果與分析

2.1室內抑菌活性測定結果

由表1可見，98%嘧菌酯對葡萄霜霉病菌的抑制作用最強，其EC50為1.35 mg/L，EC90為6.85 mg/L；其次為97.4%烯酰嗎啉，EC50為5.60 mg/L，EC90為59.78 mg/L；88%代森錳鋅抑菌作用相對較差，EC50高達61.9 mg/L，EC90高達 1 152.38 mg/L。

2.2田間藥效試驗結果

由表2可見，50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液對葡萄霜霉病表現出良好的防治效果，兩者之間沒有顯著性差異。50%烯酰嗎啉可濕性粉劑 2 500 倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液，第2次藥后7 d時田間防治葡萄霜霉病的效果分別為89.2%和887%，第3次藥后10 d的防效分別為93.8%和91.4%，顯著優于80%代森錳鋅800倍液的防效。田間觀察，用藥3次后，各處理均未出現藥害。表13種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內抑菌活性測定結果

藥劑1抑菌活性回歸方程1EC50

（mg/L）1EC90

（mg/L）1相關系數88%代森錳鋅1y=3.210 0+1.009 1x161.9011 152.3810.959 797.4%烯酰嗎啉1y=4.067 0+1.246 5x15.60159.7810.989 998%嘧菌酯1y=4.795 2+1.819 7x11.3516.8510.961 3

表23種殺菌劑對葡萄霜霉病的田間防治效果

藥劑1濃度

（倍液）1藥前病情指數

（%）1第2次藥后7 d1第3次藥后10 d病情指數（%）1防效（%）1病情指數（%）1防效（%）80%代森錳鋅180011.3717.87173.5b111.25180.2b50%烯酰嗎啉12 50011.9312.28189.2a12.49193.8a25%嘧菌酯11 00011.6512.78188.7a14.05191.4a空白對照1等量清水10.90136.621169.941注：表中同列數據后不同字母表示經DMRT檢驗差異顯著（P<0.05）。

3小結與討論

葡萄霜霉病在我國普遍發生，尤以山東沿海發生為重[5]，其在田間菌量大，繁殖快，易對殺菌劑產生抗性。種植者為了防治葡萄病害，從葡萄萌芽到果實成熟后需要進行10多次的殺菌劑噴霧，需要用近10種殺菌劑[6]。本研究選取了生產上常用的3種殺菌劑，通過室內毒力測定和田間藥效試驗，檢測其對葡萄霜霉病的防治效果。室內毒力測定結果表明，98%嘧菌酯、97.4%烯酰嗎啉對葡萄霜霉病菌抑制作用較強，田間藥效結果與室內測定結果較為一致。在煙臺地區烯酰嗎啉和嘧菌酯仍然是防治葡萄霜霉病的有效藥劑，兩者在2次藥后7 d及3次藥后10 d的防效均在90%左右，因此可作為田間防治葡萄霜霉病的主要殺菌劑。代森錳鋅是一種優良的保護性殺菌劑，屬低毒農藥，雖然其防治葡萄霜霉病效果差于烯酰嗎啉和嘧菌酯，但其3次藥后 10 d 的防效在80%以上，且由于其殺菌范圍廣，在生產上廣泛使用，為減少葡萄霜霉病抗藥性的產生，代森錳鋅可以作為煙臺地區防治葡萄霜霉病的輪換用藥。

隨著烯酰嗎啉和嘧菌酯的大量應用，抗藥性風險不能忽視。國外已有甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（嘧菌酯）抗藥菌株的報道[7-8]，這類殺菌劑的固有抗性風險是高水平的[7]。為減緩防治葡萄霜霉病農藥抗藥性的產生，建議生產上輪換使用其他類型藥劑。另外，為了保證取得良好的防效，施藥時間應在葡萄霜霉病的發病初期，并間隔7～10 d輪換用藥。

參考文獻：

[1]Duso C，Pozzebon A，Capuzzo C，et al. Grape downy mildew spread and mite seasonal abundance in vineyards：evidence for the predatory mites Amblyseius andersoni and Typhlodromus pyri[J]. Biological Control，2003，27（3）：229-241.

[2]廉俊平，張引平. 淺談葡萄霜霉病的發生與防治[J]. 農業技術與裝備，2011（4）：34-35.

[3]湯細. 葡萄霜霉病離體接種方法的研究[J]. 微生物學通報，1994，21（6）：373-374.

[4]農藥田間藥效實驗準則（二）[M]. 北京：中國標準出版社，2004：409-413.

[5]楊傳光，張治平. 葡萄霜霉病的發生與防治[J]. 煙臺果樹，2009（2）：50-51.

[6]夏志萍. 葡萄病蟲害無公害綜合防治技術[J]. 上海農業科技，2007（5）：118-119.

[7]Ishii H，Fraaije B A，Sugiyama T，et al. Occurrence and molecular characterization of strobilurin resistance in cucumber powdery mildew and downy mildew[J]. Phytopathology，2001，91（12）：1166-1171.

[8]Sierotzki H，Parisi S，Steinfeld U，et al. Mode of resistance to respiration inhibitors at the cytochrome bc1 enzyme of Mycosphaerella fijensis field isolates[J]. Pest Management Science，2000，56（10）：833-841.楊德亮，徐鳳，劉秀，等. 地黃耐百草枯的有效成分分析[J]. 江蘇農業科學，2014，42（1）：100-102.

2.2田間藥效試驗結果

由表2可見，50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液對葡萄霜霉病表現出良好的防治效果，兩者之間沒有顯著性差異。50%烯酰嗎啉可濕性粉劑 2 500 倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液，第2次藥后7 d時田間防治葡萄霜霉病的效果分別為89.2%和887%，第3次藥后10 d的防效分別為93.8%和91.4%，顯著優于80%代森錳鋅800倍液的防效。田間觀察，用藥3次后，各處理均未出現藥害。表13種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內抑菌活性測定結果

藥劑1抑菌活性回歸方程1EC50

（mg/L）1EC90

（mg/L）1相關系數88%代森錳鋅1y=3.210 0+1.009 1x161.9011 152.3810.959 797.4%烯酰嗎啉1y=4.067 0+1.246 5x15.60159.7810.989 998%嘧菌酯1y=4.795 2+1.819 7x11.3516.8510.961 3

表23種殺菌劑對葡萄霜霉病的田間防治效果

藥劑1濃度

（倍液）1藥前病情指數

（%）1第2次藥后7 d1第3次藥后10 d病情指數（%）1防效（%）1病情指數（%）1防效（%）80%代森錳鋅180011.3717.87173.5b111.25180.2b50%烯酰嗎啉12 50011.9312.28189.2a12.49193.8a25%嘧菌酯11 00011.6512.78188.7a14.05191.4a空白對照1等量清水10.90136.621169.941注：表中同列數據后不同字母表示經DMRT檢驗差異顯著（P<0.05）。

3小結與討論

葡萄霜霉病在我國普遍發生，尤以山東沿海發生為重[5]，其在田間菌量大，繁殖快，易對殺菌劑產生抗性。種植者為了防治葡萄病害，從葡萄萌芽到果實成熟后需要進行10多次的殺菌劑噴霧，需要用近10種殺菌劑[6]。本研究選取了生產上常用的3種殺菌劑，通過室內毒力測定和田間藥效試驗，檢測其對葡萄霜霉病的防治效果。室內毒力測定結果表明，98%嘧菌酯、97.4%烯酰嗎啉對葡萄霜霉病菌抑制作用較強，田間藥效結果與室內測定結果較為一致。在煙臺地區烯酰嗎啉和嘧菌酯仍然是防治葡萄霜霉病的有效藥劑，兩者在2次藥后7 d及3次藥后10 d的防效均在90%左右，因此可作為田間防治葡萄霜霉病的主要殺菌劑。代森錳鋅是一種優良的保護性殺菌劑，屬低毒農藥，雖然其防治葡萄霜霉病效果差于烯酰嗎啉和嘧菌酯，但其3次藥后 10 d 的防效在80%以上，且由于其殺菌范圍廣，在生產上廣泛使用，為減少葡萄霜霉病抗藥性的產生，代森錳鋅可以作為煙臺地區防治葡萄霜霉病的輪換用藥。

隨著烯酰嗎啉和嘧菌酯的大量應用，抗藥性風險不能忽視。國外已有甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（嘧菌酯）抗藥菌株的報道[7-8]，這類殺菌劑的固有抗性風險是高水平的[7]。為減緩防治葡萄霜霉病農藥抗藥性的產生，建議生產上輪換使用其他類型藥劑。另外，為了保證取得良好的防效，施藥時間應在葡萄霜霉病的發病初期，并間隔7～10 d輪換用藥。

參考文獻：

[1]Duso C，Pozzebon A，Capuzzo C，et al. Grape downy mildew spread and mite seasonal abundance in vineyards：evidence for the predatory mites Amblyseius andersoni and Typhlodromus pyri[J]. Biological Control，2003，27（3）：229-241.

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[4]農藥田間藥效實驗準則（二）[M]. 北京：中國標準出版社，2004：409-413.

[5]楊傳光，張治平. 葡萄霜霉病的發生與防治[J]. 煙臺果樹，2009（2）：50-51.

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[8]Sierotzki H，Parisi S，Steinfeld U，et al. Mode of resistance to respiration inhibitors at the cytochrome bc1 enzyme of Mycosphaerella fijensis field isolates[J]. Pest Management Science，2000，56（10）：833-841.楊德亮，徐鳳，劉秀，等. 地黃耐百草枯的有效成分分析[J]. 江蘇農業科學，2014，42（1）：100-102.

2.2田間藥效試驗結果

由表2可見，50%烯酰嗎啉可濕性粉劑2 500倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液對葡萄霜霉病表現出良好的防治效果，兩者之間沒有顯著性差異。50%烯酰嗎啉可濕性粉劑 2 500 倍液、25%嘧菌酯懸浮劑1 000倍液，第2次藥后7 d時田間防治葡萄霜霉病的效果分別為89.2%和887%，第3次藥后10 d的防效分別為93.8%和91.4%，顯著優于80%代森錳鋅800倍液的防效。田間觀察，用藥3次后，各處理均未出現藥害。表13種殺菌劑對葡萄霜霉病菌的室內抑菌活性測定結果

藥劑1抑菌活性回歸方程1EC50

（mg/L）1EC90

（mg/L）1相關系數88%代森錳鋅1y=3.210 0+1.009 1x161.9011 152.3810.959 797.4%烯酰嗎啉1y=4.067 0+1.246 5x15.60159.7810.989 998%嘧菌酯1y=4.795 2+1.819 7x11.3516.8510.961 3

表23種殺菌劑對葡萄霜霉病的田間防治效果

藥劑1濃度

（倍液）1藥前病情指數

（%）1第2次藥后7 d1第3次藥后10 d病情指數（%）1防效（%）1病情指數（%）1防效（%）80%代森錳鋅180011.3717.87173.5b111.25180.2b50%烯酰嗎啉12 50011.9312.28189.2a12.49193.8a25%嘧菌酯11 00011.6512.78188.7a14.05191.4a空白對照1等量清水10.90136.621169.941注：表中同列數據后不同字母表示經DMRT檢驗差異顯著（P<0.05）。

3小結與討論

葡萄霜霉病在我國普遍發生，尤以山東沿海發生為重[5]，其在田間菌量大，繁殖快，易對殺菌劑產生抗性。種植者為了防治葡萄病害，從葡萄萌芽到果實成熟后需要進行10多次的殺菌劑噴霧，需要用近10種殺菌劑[6]。本研究選取了生產上常用的3種殺菌劑，通過室內毒力測定和田間藥效試驗，檢測其對葡萄霜霉病的防治效果。室內毒力測定結果表明，98%嘧菌酯、97.4%烯酰嗎啉對葡萄霜霉病菌抑制作用較強，田間藥效結果與室內測定結果較為一致。在煙臺地區烯酰嗎啉和嘧菌酯仍然是防治葡萄霜霉病的有效藥劑，兩者在2次藥后7 d及3次藥后10 d的防效均在90%左右，因此可作為田間防治葡萄霜霉病的主要殺菌劑。代森錳鋅是一種優良的保護性殺菌劑，屬低毒農藥，雖然其防治葡萄霜霉病效果差于烯酰嗎啉和嘧菌酯，但其3次藥后 10 d 的防效在80%以上，且由于其殺菌范圍廣，在生產上廣泛使用，為減少葡萄霜霉病抗藥性的產生，代森錳鋅可以作為煙臺地區防治葡萄霜霉病的輪換用藥。

隨著烯酰嗎啉和嘧菌酯的大量應用，抗藥性風險不能忽視。國外已有甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑（嘧菌酯）抗藥菌株的報道[7-8]，這類殺菌劑的固有抗性風險是高水平的[7]。為減緩防治葡萄霜霉病農藥抗藥性的產生，建議生產上輪換使用其他類型藥劑。另外，為了保證取得良好的防效，施藥時間應在葡萄霜霉病的發病初期，并間隔7～10 d輪換用藥。

參考文獻：

[1]Duso C，Pozzebon A，Capuzzo C，et al. Grape downy mildew spread and mite seasonal abundance in vineyards：evidence for the predatory mites Amblyseius andersoni and Typhlodromus pyri[J]. Biological Control，2003，27（3）：229-241.

[2]廉俊平，張引平. 淺談葡萄霜霉病的發生與防治[J]. 農業技術與裝備，2011（4）：34-35.

[3]湯細. 葡萄霜霉病離體接種方法的研究[J]. 微生物學通報，1994，21（6）：373-374.

[4]農藥田間藥效實驗準則（二）[M]. 北京：中國標準出版社，2004：409-413.

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[7]Ishii H，Fraaije B A，Sugiyama T，et al. Occurrence and molecular characterization of strobilurin resistance in cucumber powdery mildew and downy mildew[J]. Phytopathology，2001，91（12）：1166-1171.

[8]Sierotzki H，Parisi S，Steinfeld U，et al. Mode of resistance to respiration inhibitors at the cytochrome bc1 enzyme of Mycosphaerella fijensis field isolates[J]. Pest Management Science，2000，56（10）：833-841.楊德亮，徐鳳，劉秀，等. 地黃耐百草枯的有效成分分析[J]. 江蘇農業科學，2014，42（1）：100-102.