豬流感的生物學特性及診斷方法

趙顯威 邵善英 鄒紅梅 胡翠清

豬流感病毒是正黏液病毒，可引起地方性豬群流行性感冒。世界衛生組織將此前被稱為豬流感的新型致命病毒更名為H1N1甲型流感。豬流感是具有高度傳染性的豬只呼吸系統傳染病，其特點為發病急驟，突然發燒及傷風，康復和發病一樣快。豬流感病毒與感染人類的流感病毒同屬，此病毒具人畜共同感染的特性，豬群發生豬流感通常與豬場引進新豬群有關。

一、豬流感的生物學特性

1.抗原性 根據流感病毒的表面和內部抗原特性，流感病毒可分為A、B 和C三個亞型。豬流感病毒屬于A 型流感病毒屬，A型流感病毒能夠引起豬急性呼吸道傳染病。A型和B型病毒的內部抗原為核蛋白和基脂蛋白，性質穩定，可用血清學方法區分。豬流感病毒的抗原性較強，被感染的動物一般都能產生較高水平的抗體。

2.血凝特性 其血凝譜相當廣泛，在適當條件下，豬流感病毒能凝集包括雞、兔、牛等動物和人的紅細胞。豬流感病毒的血凝活性并不一致，同一代次、同一亞型、不同毒株的血凝價相差很大。豬流感病毒的血凝活性容易被破壞，血凝素具有熱不穩定性，60℃處理10分鐘即可滅活。

3.增殖特性 犢牛腎細胞、胎豬肺細胞、豬腎細胞、雞胚成纖維細胞、人二倍體細胞等動物細胞的豬流感病毒的感受性都很高，通過研究，雞胚對豬流感病毒的易感性高于細胞。因此，通常采用雞胚進行病料培養。病毒接種細胞，也能產生細胞病變，表現為細胞圓縮和脫落。但細胞經連續傳代，病毒對細胞的感染性會降低，豬流感疫苗的生產通常采用雞胚培養。

二、豬流感的診斷方法

豬流感的診斷可通過剖檢觀察，也可從病豬的樣品中分離和培養豬流感病毒。豬流感病毒的快速、準確的檢測方法為抗原檢測，由于病毒的敏感性比較高高，所以通常被認為是豬流感診斷的“金標準”。目前，檢測常用的方法有血凝試驗和血凝抑制試驗、酶聯免疫吸附試驗、免疫熒光技術和免疫組化技術。

1.血凝試驗和血凝抑制試驗?血凝素蛋白存在于豬流感病毒表面，但一些動物（雞、豚鼠和人的O型血等）血凝素受體附著在紅細胞表面，由于豬流感病毒粒子的吸附作用使紅細胞產生凝集現象，稱為血凝試驗，相應的抗血清可抑制豬流感病毒的吸附凝集作用，稱血凝抑制試驗。方便、快捷、易于操作及敏感性、特異性好是血凝試驗和血凝抑制試驗特有的優勢，常被用于培養物中豬流感病毒的檢測。

2.免疫組化檢測 研究者用中性甲醛固定含有豬流感病毒的組織，然后通過石蠟包埋組織，進行免疫組化研究。研究者在確認含有病毒的30例組織中，通過免疫組化技術檢測到28例組織含有豬流感病毒。

3.酶聯免疫吸附試驗 操作簡便、特異性強、敏感性高，易于直接用眼觀察，可進行大量樣本的檢測，適于基層和現場的快速檢測。酶聯免疫吸附試驗是近代血清學檢測上革命性、標志性的新成果。研究者通過建立雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗，可檢測出禽源、馬源、豬源和人源的A型流感病毒。抗原捕獲酶聯免疫吸附試驗，能將純化病毒的最低檢測量減少至1納克/毫升。

4.分子診斷技術 傳統的診斷方法操作比較繁瑣，而且診斷的重復性差。在傳統方法的基礎上，對病毒進行分離和亞型鑒定，然后用分子生物學技術進行快速診斷，主要有聚合酶鏈式反應（PCR）、熒光定量PCR、基因芯片和蛋白芯片等技術，上述技術特異性強、診斷速度快、靈敏性高，已廣泛應用于實驗室的病毒診斷。

5.免疫熒光技術 主要用于樣品的快速檢測，敏感性強、特異性高是其最大優點。研究者通過使用單克隆抗體的間接免疫熒光技術對豬鼻上皮細胞中的豬流感病毒抗原進行檢測，特異性熒光出現在感染細胞的細胞漿和細胞核內。另外，免疫熒光技術與雞胚分離病毒一樣敏感，能在短短的數小時內快速分析出診斷結果。