CYP2D6*10基因型與接受他莫昔芬治療乳腺癌患者的生存率的相關(guān)性研究

魏 影，徐 喆

（安徽省馬鞍山市婦幼保健院藥劑科，安徽 馬鞍山 243011）

CYP2D6*10基因型與接受他莫昔芬治療乳腺癌患者的生存率的相關(guān)性研究

魏 影，徐 喆

（安徽省馬鞍山市婦幼保健院藥劑科，安徽 馬鞍山 243011）

目的 研究 CYP2D6*10基因型對接受他莫昔芬（tamoxifen，TAM）治療乳腺癌患者的生存率相關(guān)性的影響。方法 選擇該院乳腺外科2008—2003年收治的257名接受 TAM治療乳腺癌患者。調(diào)查 TAM使用情況和生存狀態(tài)等相關(guān)資料；采集患者外周靜脈血5 mL或石蠟切片用于DNA提取；用PCR技術(shù)檢測CYP2D6*10基因多態(tài)性；查明CYP2D6*10基因多態(tài)性與患者的生存率相關(guān)性的關(guān)系。結(jié)果 該次研究中，攜帶CYP2D6*10／*10患者占15%（38／257），CYP2D6野生型（Wt）／* 10患者占41%（105／257）和CYP2D6Wt／Wt占44%（114／257）。各CYP2D6*10基因型的臨床病理參數(shù)之間沒有相關(guān)性差異。在中國CYP2D6*10／*10基因型對接受TAM治療乳腺癌患者的DFS和OS的影響CYP2D6Wt／Wt和CYP2D6Wt／*10基因型是類似（P＞0.05），不存在相關(guān)性。結(jié)論 研究結(jié)果顯示，CYP2D6*10基因型與接受 TAM治療乳腺癌患者的生存率之間沒有相關(guān)性。

CYP2D6；CYP2D6*10；乳腺癌；他莫昔芬

乳腺癌輔助內(nèi)分泌治療是乳腺癌綜合治療中的重要方式，TAM又名三苯氧胺，為人工合成的非膽固醇類抗雌激素藥物，是內(nèi)分泌輔助治療乳腺癌的基礎(chǔ)藥物。TAM與雌激素受體結(jié)合后，誘導(dǎo)改變受體的三維空間構(gòu)型，阻止受體與DNA上雌激素有關(guān)反應(yīng)成分相結(jié)合，使轉(zhuǎn)錄等過程不能正常進(jìn)行，阻止雌激素發(fā)揮作用，抑制激素依賴性乳腺腫瘤細(xì)胞的生長，達(dá)到治療乳腺癌的作用［1］。

CYP2D6是催化 TAM生成 4-羥-N-去甲基他莫昔芬（Endoxifen）的關(guān)鍵酶。CYP2D6由 497個氨基酸組成，有100多種等位基因變異，這些變異可以產(chǎn)生體內(nèi)酶活性的差異變化。CYP2D6變異等位基因引起其酶活性的下降，所以導(dǎo)致乳腺癌患者對 TAM輔助治療和預(yù)防效果下降。現(xiàn)在主要研究的是CYP2D6*2，*3，*4，*5，*6，*7，*8，*9，*10，*12，*14，*17，*29，*41和*XN，其中患者中普遍存在CYP2D6*5和CYP2D6*10（100C＞T），Endoxifen代謝轉(zhuǎn)化率活性較低［1-3］。

中國人中CYP2D6對最常見的等位基因是CYP2D6* 10突變率為57%，基因突變引起酶活性降［4］。CYP2D6 Wt／Wt和 CYP2D6 Wt／*10對 Endoxifen的催化活性高于CYP2D6*10／*10。CYP2 D6基因多態(tài)性與TAM引發(fā)不良反應(yīng)，研究表明接受 TAM輔助治療乳腺癌患者，引起癌癥復(fù)發(fā)率和潮紅等不良反應(yīng)發(fā)生率升高［5］。在本研究旨在了解CYP2D6*10基因多態(tài)性與接受 TAM治療的乳腺癌患者臨床生存率的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇本院乳腺外科 2008—2003年收治的267名乳腺癌病人，平均年齡 58.4歲。收集受試者臨床資料：姓名、年齡、腫瘤大小、臨床分期等。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) 受試者納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）女性；（2）經(jīng)病理切片確診為原發(fā)乳腺惡性腫瘤；（3）ER為陽性；（4）乳腺癌TNM分期為 0～I(xiàn)V期；（5）服用2～5年TAM（20 mg· d-1），無服用其它藥物。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本收集及基因組 DNA提取 對入選患者，采集其外周靜脈血3 mL，EDTA抗凝，用常規(guī)苯酚-氯仿法提取血液樣本 DNA，-80℃保存。對于無法采集外周靜脈血的患者收集其石蠟組織切片，用 Invitrogen purelink genomic DNA kit提取 DNA，-80℃冰箱保存。

1.3.2 PCR擴(kuò)增 根據(jù)NCBI基因庫中CYP2D6的 DNA序列，設(shè)計(jì)CYP2D6*10引物序列，引物由上海生工合成。上游引物：5＇-CCA TTT GGT AGT GAG GCA GGT AT-3＇；下游引物：5＇-CACCAT CCA TGT TTG CTT CTG GT-3＇。20 μL PCR反應(yīng)體系：10×PCR buffer 2 μL，d NTP（2.5 mM）1 μL，上下游引物各 （10 μmol·L-1）0.5 μL，Taq DNA polymerase（5 U·μL-1）0.5 μL，DNA模板（100 ng）2.0 μL，ddH2O至20 μL。PCR擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性10 min，95℃ 30 s、57℃ 45 s、72℃45 s，循環(huán)35次，最后72℃延伸10 min，4℃保溫。10 μL PCR產(chǎn)物，加入 HphⅠ限制性內(nèi)切酶（上海生工公司購買）37℃ 1 h。結(jié)果取5 μL PCR產(chǎn)物，于2.5%瓊脂糖凝膠（含有溴化乙錠），在紫外燈下觀察產(chǎn)物。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用 SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，χ2檢驗(yàn)，t檢驗(yàn)分別驗(yàn)證入選人群是否符合 Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，并比較各組及各亞組基因型頻率和等位基因頻率，用 Logistic回歸模型計(jì)算優(yōu)勢比（OR）及 95%置信區(qū)間（95%CI）表明不同基因型組對生存率的風(fēng)險。統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)概率檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CYP2D6*10基因型和患者的特點(diǎn) 入選的257患者平均年齡為58.4歲。114名患者為CYP2D6 Wt／Wt，大約為44.36%；105名患者為CYP2D6 Wt／*10，大約為40.85%；38名患者為CYP2D6*10／*10，大約為14.79%。經(jīng) Hardy-Weinberg遺傳平衡定律檢驗(yàn)，其等位基因在兩組分布符合遺傳平衡，樣本具有群體代表性。患者其他基本情況見表1。

表1 CYP2D6*10基因型和患者的特點(diǎn)［n（%）］

2.2 CYP2D6*10基因多態(tài)性對患者無病生存率的影響本次研究發(fā)現(xiàn)，CYP2D6*10／*10對接受TAM治療乳腺癌患者的無病生存率（Disease-free survival，DFS）的影響與CYP2D6Wt／Wt和CYP2D6Wt／*10基因型是類似，無統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義（P＞0.05），具體見圖1。將 CYP2D6*10基因各基因型納入 Logistic回歸分析，結(jié)果見表2。

圖1 CYP2D6*10基因型對患者的 DFS的影響

2.3 CYP2D6*10基因多態(tài)性對患者總生存率的影響 本次研究發(fā)現(xiàn)，CYP2D6*10／*10對接受 TAM治療乳腺癌患者的總生存率（Overall survival，OS）的影響與 CYP2D6Wt／Wt和CYP2D6Wt／*10基因型是類似，無統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義（P ＞0.05）具體見圖2。將CYP2D6*10基因各基因型納入Logistic回歸分析，結(jié)果見表2。

圖2 CYP2D6*10基因型對患者的 OS的影響

3 討論

目前研究發(fā)現(xiàn) CYP2D6的基因突變超過100種，基因突變可以引起酶的活性及數(shù)量的變化，從而造成人類對特定藥物代謝及療效的差異，且呈現(xiàn)明顯的個體及種族差異。在白種人中，CYP2D6*3，*4和*5是無效等位基因突變型。在接受TAM治療的乳腺癌患者中，CYP2D6*4／*4基因型患者的復(fù)發(fā)率較高。另一組研究顯示，在德國攜帶 CYP2D6*4，*5 和*41等位基因型患者具有更高的復(fù)發(fā)率和更短 DFS［6］。另一方面，有兩項(xiàng)研究報道正好相反，攜帶CYP2D6*4等位基因患者有更好的治療效果［7］。也有研究報道，接受TAM治療的乳腺癌患者的 OS與 CYP2D6*4缺乏相關(guān)性［8］。

表2 CYP2D6*10基因型與患者生存率相關(guān)性的 Logistic回歸分析

亞洲人群中最常見的突變體是 CYP2D6*10，其主要的突變位點(diǎn)是C100＞T，使其代謝酶的表達(dá)活性降低。體外實(shí)驗(yàn)證明 CYP2D6*10突變型純合子產(chǎn)生一種不穩(wěn)定的代謝酶，其半衰期更短，活性更低。韓國研究發(fā)現(xiàn)，每天服用TAM的總劑量為20 mg，共計(jì) 8周以上的乳腺癌患者，攜帶CYP2D6*10／*10型患者的穩(wěn)態(tài) Endoxifen的血漿濃度明顯低于其他基因型的患者。一項(xiàng)有關(guān)中國人乳腺癌患者的研究顯示［9］：在 TAM治療的乳腺癌患者中，與 CYP2D6Wt／*10型或 Wt／Wt型患者相比，*10／*10型的患者臨床預(yù)后較差。在韓國接受 TAM治療的轉(zhuǎn)移性乳腺癌人群中，CYP2D6*10／*10基因頻繁是最好［10］。同時有報道，對中國接受 TAM治療的乳腺癌患者的DFS進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)攜帶CYP2D6*10／*10基因型的患者最差。報道的CYP2D6* 10的基因型與接受 TAM治療乳腺癌患者的DFS具有相關(guān)性。在另方面，CYP2D6*10的基因型與接受 TAM治療乳腺癌患者缺乏相關(guān)性。同時發(fā)現(xiàn) CYP2D6*10的基因型與接受 TAM治療乳腺癌患者的 DFS無相關(guān)性。

研究發(fā)現(xiàn)，對攜帶 CYP2D6*4／*4基因型的患者 Endoxifen的血藥濃度，比 CYP2D6*4野生型低。在 CYP2D6 *10／*10患者血漿中 Endoxifen和4-羥基他莫昔芬濃度較低［11］。然而，TAM和 endoxifen對乳腺癌患者的最佳治療濃度尚存在爭議。Oxford研究發(fā)現(xiàn)，高劑量的 TAM（30～40 mg·d-1）與正常劑量（20 mg·d-1）相比在 DFS和 OS沒有顯著差異。此外，，低劑量的 TAM（1和 5 mg·d-1）與標(biāo)準(zhǔn)劑量（20 mg·d-1）對 Ki-67的表達(dá)基本一致。因此，這表明，可能低劑量的 TAM對乳腺癌患者也有治療效果。雖然CYP2D6*10／*10基因型患者的 Endoxifen血漿濃度顯示偏低，但可能仍然有足夠的活性物質(zhì)對乳腺癌患者產(chǎn)生一定 的療 效［12］。

本次研究，因?yàn)椴±鄬^少，復(fù)發(fā)或死亡病例的數(shù)量有限，可能是很難準(zhǔn)確估計(jì) CYP2D6*10基因型與接受TAM治療乳腺癌患者的生存率的相關(guān)性。本次研究認(rèn)為，在中國CYP2D6*10／*10基因型對接受 TAM治療乳腺癌患者的DFS和OS的影響CYP2D6Wt／Wt和CYP2D6Wt／* 10基因型是類似（P＞0.05），可能不存在相關(guān)性，需要進(jìn)一步研究。

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Association between CYP2D6*10 genotype and survival of breast cancer patients receiving tamoxifen treatment

WEI Ying，XU Zhe
（Department of Pharmacology，Ma’anshan Municipal Health Hospital For Women and Children，Ma’anshan，Anhui 243011，China）

Objective To explore the association between between CYP2D6*10 genotype and survival of breast cancer patients receiving tamoxifen（TAM）treatment.Methods Basic clinical feature，survival state and blood samples，paraffin sections were collected from 257 breast cancer patients receiving TAM treatment.CYP2D6*10 allele of breast cancer patients were checked by means of Polymerase Chain Reaction（PCR）.We observed the association between CYP2D6*10 genotype and survival of breast cancer patients receiving tamoxifen（TAM）treatment.Results Fifteen percent（38／257）of the patients carried the CYP2D6*10／*10 genotype，41% （105／257）the CYP2D6 wild-type（Wt）／*10 genotype and 44% （114／257）the CYP2D6 wt／wt genotype.There were no discernible correlations between clinicopathologic parameters and the CYP2D6*10 genotype.We determined whether there was a correlation between the CYP2D6*10 genotype and survival and found out that the clinical outcome for patients carrying the CYP2D6*10／*10 genotype was similar to those with other genotypes.Conclusions Our results suggest that the CYP2D6*10 genotype is unlikely to have any clinical significance for prognosis of breast cancer patients receiving adjuvant TAM treatment.

CYP2D6；CYP2D6*10；breast cancer；tamoxifen

10.3969／j.issn.1009-6469.2014.05.057

2013-11-15，

2014-01-15）