橄欖根黃酮提取及生物活性測定

賢景春，張雪燕

（泉州師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，福建泉州362000）

橄欖根黃酮提取及生物活性測定

賢景春，張雪燕

（泉州師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，福建泉州362000）

采用乙醇浸提法對橄欖根中黃酮進(jìn)行提取，并測定其生物活性。探究濃度，料液比，提取時間和溫度對黃酮提取的影響，并用正交法進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，最佳提取參數(shù)是乙醇濃度為50%，溫度60℃，時間90min，料液比1∶20（g∶mL）。在此條件下提取黃酮含量為61.92mg/g，且橄欖根提取物對羥基自由基有一定的清除能力。

橄欖根；黃酮；抗氧化性

橄欖根為橄欖科植物橄欖 Canarium album（Lour.）Raeusch.的根，又名青果根，黃欖根，山欖根，白欖根。原產(chǎn)中國，生于低海拔的雜木林中。主要分布于福建、臺灣、廣東、海南、廣西、四川、貴州、云南等地。《中華本草》中記載，欖根性平，微苦，主要功效為祛風(fēng)濕，舒筋絡(luò)，利咽喉。用于風(fēng)濕痹痛，手足麻木，腳氣，咽喉腫痛，民間常用于腰腿疼痛的治療等[1]。黃酮類化合物是經(jīng)植物光合作用產(chǎn)生的一大類化合物，廣泛存在于藥用植物、水果和蔬菜中，特別是高等植物的花、葉、根中較多。植物中的黃酮類化合物是一種天然的抗氧化劑，具有抗腫瘤，廷緩衰老，增強(qiáng)心血管功能，增強(qiáng)免疫力等[2]。本研究采用乙醇浸提法提取橄欖根中的總黃酮，并測定其生物活性，為橄欖根保健食品提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

橄欖根：購于泉州藥店；蘆丁：南京替斯艾么中藥研究所；無水乙醇、30%雙氧水：上海聯(lián)試化工試劑有限公司；硝酸鋁：天津市水大化學(xué)試劑開發(fā)中心；亞硝酸鈉：上海聯(lián)試化工試劑有限公司；七水合硫酸亞鐵：汕頭市西隴化工有限公司；水楊酸：天津市化工研究所；HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市鴻科儀器廠；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵：鄭州長城科工貿(mào)有限公司；電子天平：上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司；721E型可見分光光度計(jì)：上海元析儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

量取0.10 mg/mL的蘆丁對照液（0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL）分別置于10.00 mL容量瓶中，再分別加入0.30 mL 5%的亞硝酸鈉、0.30 mL 10%的硝酸鋁、4.00 mL 4%的氫氧化鈉溶液，混合均勻，用60%的乙醇溶液定容。搖勻靜置后，在波長510 nm處測定其吸光度[3]。

1.2.2 總黃酮含量測定

稱取1.000 0 g（洗滌、烘干、粉碎、過40目篩）橄欖根粉末，置于50 mL小燒杯中，在不同的條件下浸提。趁熱抽濾，將濾液轉(zhuǎn)移到50 mL容量瓶中，用乙醇液定容。從中移取1.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入0.30 mL 5%的亞硝酸鈉、0.30 mL 10%的硝酸鋁、4.00 mL 4%的氫氧化鈉溶液并定容至刻度。搖勻靜置后，在510 nm處測定其吸光度。以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液作為對照，計(jì)算出提取液中總黃酮的含量[4]。

1.2.3 參數(shù)優(yōu)化

對植物中黃酮提取影響因素較多，主要有溶劑濃度、料液比、提取時間和溫度。對這4個因素進(jìn)行考查研究，在不同條件（定三變一）下浸提，確定因素水平后再進(jìn)行正交試驗(yàn)，以獲取最佳提取參數(shù)[5]。

1.2.4 活性測定

參照Fenton反應(yīng)的方法[6]，在10 mL容量瓶中加入1 mL 9 mmol/L的硫酸亞鐵，8.8 mmol/L雙氧水，9 mmol/L的水楊酸—乙醇溶液，用蒸餾水定容。恒溫37℃，在510 nm處測吸光度A0。在上述系統(tǒng)中，分別加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL的橄欖根提取液，測定其吸光度AX。清除率=（A0-AX）/A0×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

按照1.2.1的方法繪制的工作曲線如圖1。

回歸方程為：A=0.001 95+5.402 39X，r=0.999 57。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve

2.2 乙醇濃度對提取率的影響

在料液比為1∶20，溫度為60℃，乙醇濃度30%、40%、50%、60%、70%條件下，提取為90 min，結(jié)果如圖2。

由圖2可知，隨著乙醇濃度的增加，提取率也逐漸加大，在濃度為60%時出現(xiàn)最大值。之后隨濃度的增加逐漸減少。

圖2 乙醇濃度對黃酮提取的影響Fig.2 Effect of ethanol concentration on total flavone extraction

2.3 料液比對提取率的影響

在乙醇濃度60%，溫度為60℃，料液比為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30（g：mL），提取90 min，結(jié)果見圖3。

圖3 料液比對黃酮提取的影響Fig.3 Effect of rate of solid to solution on total flavone extraction

在料液比較小時，隨溶劑量的增加，提取率也在增加，當(dāng)料液比約為1∶20時出現(xiàn)了最大值，之后提取率逐漸減少。

2.4 提取時間對提取率的影響

乙醇濃度為60%，料液比為1∶20，溫度為60℃，提取不同的時間，測試結(jié)果見圖4。

圖4 提取時間對提取率的影響Fig.4 Effects of time on total flavone extraction

由圖4可看出，隨提取時間的延長，黃酮類化合物的溶出量在逐漸加大，當(dāng)時間為90 min時效果最佳。之后再延長時間提取提取率便逐漸減少。

2.5 溫度對提取率的影響

乙醇濃度為60%，料液比為1∶20，在不同的溫度下，提取90 min，結(jié)果如圖5所示。

圖5 溫度對黃酮提取率的影響Fig.5 Effects of temperature on total flavone extraction

由圖5可知，溫度較低時，提取率較小，隨溫度的不斷升高，提取率不斷加大，當(dāng)溫度60℃時出現(xiàn)最大值。之后再升高溫度，提取率卻不斷下降。

2.6 正交試驗(yàn)

據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)，確定了四因素三水平表見表1和L9（34）的正交試驗(yàn)，結(jié)果見表2。

表1 因素水平表Table 1 Factor and level of experiment

表2 L9（34）的正交設(shè)計(jì)及極差分析結(jié)果Table 2 Orthogonal experimental L9（34）and analytical result of polar difference

由表2可以看出，四個因素對提取效果影響的大小順序是：A>C>B>D，即乙醇濃度對黃酮提取影響最大，其次是溫度，料液比，影響最小的是提取時間。最佳提取條件為A1B2C2D2。在此條件下進(jìn)行3組平行試驗(yàn)，提取總黃酮含量為61.92 mg/g，與正交試驗(yàn)結(jié)果中的最優(yōu)組接近。

2.7 抗氧化性試驗(yàn)

參照1.2.4的方法，橄欖根提取物對羥基自由基的清楚作用見圖6。

圖6 對羥基自由基的清除效果Fig.6 Scavenging effects on hydroxyl radical

提取液的體積較小時清除率較小，提取液的體積增加，對羥基自由基的抑制能力也隨之增強(qiáng)。

3 結(jié)論

對天然植物黃酮提取別影響因素較多，其中影響較大的是溶劑濃度、提取溫度、時間和料液比。通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)表明，對橄欖根中黃酮提取影響最大的是乙醇濃度。最佳工藝參數(shù)乙醇濃度60%，料液比1∶20（g∶mL），提取溫度60℃，時間90 min。在此條件下提取，黃酮含量可達(dá)61.92 mg/g，黃酮含量較高[7]。提取液對羥基自由基的清除作用很強(qiáng)，當(dāng)提取液的體積為5 mL時，清除率為71%，高于一般的植物[8]。

[1]孫麗麗,郭麗冰,廖華衛(wèi).氣相色譜一質(zhì)譜法分析橄欖根揮發(fā)油成分[J].國際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報,2008,14(6):63-66

[2]李張偉,劉宇輝,張珠珠.橄欖黃酮的提取及其抗氧化作用的研究[J].廣東化工,2007,34(12):37-40,89

[3]黃鎖義,黎海妮,余美料,等.益母草總黃酮的提取及鑒別[J].時珍國醫(yī)國藥,2005,16(5):398-399

[4]宮玉婷,王鈺,阿不都拉·阿巴斯.梓樹果實(shí)中黃酮類化合物提取工藝研究[J].食品科學(xué),2008,29(4):193-195

[5]黃秀香,賴紅芳,劉云英．正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選石南藤黃酮苷的提取工藝[J]．應(yīng)用化工,2009,9,38(7):1040-1042

[6]林丹英,尤婷婷,黃鎖義.茼蒿總黃酮提取及對羥自由基清除作用[J].中國野生植物資源,2007,26(5):57-59

[7]賢景春.刺莧總黃酮提取工藝研究[J].食品工業(yè)科技,2012,33(1): 250-255

[8]賢景春,鄭鑫源,陳明真.少花龍葵多酚超聲提取工藝及其抗氧化性研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,10(8):275-277

Study on of Extracting Total Flavone and Antioxidant Activity from Canarium Album（Lour.）Raeusch

XIAN Jing-chun，ZHANG Xue-yan
（The College of Chemistry and Life Science，Quanzhou Normal College，Quanzhou 362000，F(xiàn)ujian，China）

This paper aims to extract total quantity flavone from Canarium album （Lour.）Raeusch and to study resistance to oxidation.This research discussed the method of extracting total quantity of flavone and the effect of concentration of menstruum，temperature，time，ratio of material to liquid.Meanwhile，the best conditions for extraction were chosen after complete rthogonal analysis.The best parametersare 50%ethanol as extractant，temperature on 60℃，extraction time by 90 min，ratio of materialto liquid on 1∶20.In this case，the yield of extraction can reach up to 61.92 mg/g，The Solanum photeinocarpum have the strong antioxidative effect.

Canarium album（Lour.）Raeusch；flavone；oxidative stability

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.19.010

2013-07-18

泉州市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2007N4）

賢景春（1955—），女（漢），教授，本科，主要從事配位化學(xué)研究。