pshuttle-Egr-1-hSmac質粒聯合X線照射對乳腺癌MDA-MB-435細胞增殖的抑制作用

梁 碩,王志成,李艷博,,郭彩霞,龔守良,林承赫

(1.吉林大學公共衛生學院衛生部放射生物學重點實驗室,吉林長春 130021;2.首都醫科大學公共衛生與家庭醫學學院,北京 100069;3.吉林大學第一醫院核醫學科,吉林長春 130021)

pshuttle-Egr-1-hSmac質粒聯合X線照射對乳腺癌MDA-MB-435細胞增殖的抑制作用

梁 碩1,王志成1,李艷博1,2,郭彩霞2,龔守良1,林承赫3

(1.吉林大學公共衛生學院衛生部放射生物學重點實驗室,吉林長春 130021;2.首都醫科大學公共衛生與家庭醫學學院,北京 100069;3.吉林大學第一醫院核醫學科,吉林長春 130021)

目的:構建pshuttle-Egr-1-hSmac質粒并轉染人乳腺癌MDA-MB-435細胞,觀察其抑制腫瘤細胞的輻射增敏作用。方法:轉染pshuttle-Egr-1-hSmac質粒的MDA-MB-435細胞經過2 Gy X線照射不同時間(4、8、12、24和48 h)和0.5～5.0 Gy X線照射后24 h收集細胞,采用RT-PCR和Western blotting法檢測Smac mRNA及其蛋白表達。將細胞分為對照組、pshuttle質粒組、pshuttle-Egr-1-hSmac質粒組、2 Gy組、pshuttle＋2.0 Gy組和pshuttle-Egr-1-hSmac＋2.0 Gy組,MTT法檢測各組細胞增殖;克隆形成實驗檢測細胞存活能力;AnnexinⅤ-FITC雙染法檢測細胞凋亡;PI單染法檢測細胞周期。結果:對照組和pshuttle質粒組MDA-MB-435細胞中Smac mRNA無表達,而pshuttle-Egr-1-hSmac質粒組MDA-MB-435細胞Smac m RNA表達水平隨時間延長逐漸升高,于24和48 h時表達水平最高;經0.5～5.0 Gy X線照射后24 h MDA-MB-435細胞Smac m RNA表達水平隨照射劑量增加而逐漸增加,在2.0和5.0 Gy X線照射后Smac m RNA表達水平最高。pshuttle-Egr-1-hSmac質粒組4、8、12和24 h后Smac蛋白表達水平逐漸升高,24 h后表達水平最高。經過0、0.5、1.0、2.0和5.0 Gy X線照射后24 h Smac蛋白表達水平逐漸升高,尤其以5.0 Gy X線照射時表達水平最高。MTT法檢測時程效應,2.0 Gy、pshuttle＋2.0 Gy和pshuttle-Egr-1-hSmac＋2.0 Gy質粒組24、48和72 h細胞A490值明顯低于對照組(P＜0.01);劑量效應,pshuttle-Egr-1-hSmac質粒組1.0～5.0 Gy X線照射后, MDA-MB-435細胞A490值明顯低于0 Gy X線照射(P＜0.05或P＜0.01)。pshuttle-Egr-1-hSmac質粒組細胞存活分數明顯低于對照組(P＜0.01)。pshuttle-Egr-1-hSmac＋2.0 Gy組細胞凋亡率明顯高于2.0 Gy組(P＜0.01), G0/G1期和S期細胞百分率明顯低于2.0 Gy照射組(P＜0.01),G2/M期細胞百分率明顯高于2.0 Gy組(P＜0.01)。……