2011至2013年唐山市豐南區手足口病病原學監測結果分析

劉偉 姚向暉

手足口病(hand－foot-mouth-disease，HFMD)近幾年有全球性流行的趨勢，由于該病無法在一次感染后獲得終生免疫且引發手足口病的腸道病毒有20多種。所以對于重癥病例、聚集性病例、疑難病例實驗室檢測顯得尤為重要。目前國內手足口病的病原體以柯薩奇病毒A組16型(CA16)和腸道病毒71型(EV71)為主［1］。為了解豐南地區手足口病病原體的分布特征，為手足口病的診斷和預防措施提供科學依據，現將2011至2013年唐山市豐南區HFMD的病原學監測結果進行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011至2013年唐山市豐南區醫療機構就診的手足口病患兒的咽拭子標本，標本采用冷鏈運送至實驗中心立刻檢測或－70℃凍存待檢。

1.2 主要儀器與試劑 DA7600PCR擴增儀DYY-6C型水平電泳儀GAS7100B型凝膠成像儀，人腸道病毒(HEV)RNA、EV71RNA、CA16RNA檢測試劑盒由廣州中山大學達安基因股份有限公司提供，引物由上海之江生物科技有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 核酸提取嚴格按照說明書操作，運用Trizol試劑裂解沉淀法提取腸道病毒RNA。

1.3.2 Real Time RT-P CR擴增操作均按照試劑盒說明書進行，反應體系25 μl，每次實驗均設置陰性對照和陽性對照擴增程序:40℃25 min，1個循環;94℃3 min，1個循環;93℃ 15 s～55℃ 45 s，共40個循環;72℃ 7 min;4℃保存。

1.3.3 檢測擴增產物用0.5×TBE緩沖液配制2.5%瓊脂糖凝膠，加樣后110 V電壓持續電泳50 min，用凝膠成像儀對PCR產物條帶進行分析，以DL2000marker作為參照標準在紫外燈下觀察特異性核酸條帶，有目的片段條帶出現即判為陽性。

1.4 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，計量資料以表示，采用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2011至2013年豐南地區手足口流行情況 豐南地區的手足口病疫情已開始實施網絡直報，數據顯示，2011年報告發病強度較高，病例數達1714 例，2012和2013年處于較低發態勢，分別為377和399例。手足口病發病數有明顯的季節性，4月發病率逐漸增加，至6、7月達到峰值，呈單峰型。見圖1。

圖1 豐南區2011至2013年手足口各自然月病例分布

2.2 不同類型病例檢測結果 檢測的2490 例病例標本中，總腸道病毒核酸陽性2081份，陽性率83.57%，其中EV71陽性634例，陽性率25.46%，CA16陽性1026 例，陽性率41.20%，非EV71、CA16的其他腸道病毒陽性421例，陽性率16.91%。見表1。

表1 豐南區2011至2013年不同類型手足口病病例病毒核酸檢測情況 份(%)

2.3 手足口病重癥病例發病情況 本研究結果顯示3年中豐南區共報告手足口病重病例129例，無死亡病例，高峰集中在每年7、8月份。2011年108例，總腸道病毒核酸陽性100例，陽性率 92.60%，其中EV71陽性63例，陽性率58.33%，CA16陽性20例，陽性率18.52%，非EV71、CA16的其他腸道病毒陽性17例，陽性率15.74%。2012年10例，總腸道病毒核酸陽性8例，陽性率80%，其中EV71陽性5例，陽性率50%，CA16陽性2例，陽性率20%，非 EV71、CA16的其他腸道病毒陽性1例，陽性率10%。2013年11例，總腸道病毒核酸陽性10例，陽性率90.91%，其中EV71陽性7例，陽性率63.64%，CA16陽性2例，陽性率18.18%，非EV71、CA16的其他腸道病毒陽性1例，陽性率9.09%。見表1。

2.4 不同年齡患者手足口病例分布 2490例手足口病例患者年齡最小5個月，最大14歲，5歲以下患者2195例，占構成比88.15% 。見圖2。

圖2 豐南區不同年齡手足口病例分布圖

3 討論

3.1 豐南區2011年的手足口發病病例明顯偏高，重癥病例也較多，原因可能是個別鄉鎮居民居住條件較差，衛生習慣較差，很多患兒在患病初期家長不夠重視使病情加重，或有些鄉鎮醫院醫療條件相對落后，不能給與有效治療。2011年后區疾控中心針對暴發嚴重的鄉鎮重點進行手足口病的宣傳，防控工作進一步加強，使得此后兩年疫情明顯好轉，重癥病例也大大減少。

3.2 手足口病由新西蘭科學家首次報道，次年加拿大科學家從患者中分離出柯薩奇病毒，目前已知引起手足口病的腸道病毒有多種(型)其中以EV71和CA16最為常見，曾有報道我國1985年前手足口病的主要病原體是 EV71［2］，玉林、青島和重慶［3－5］等地有報道稱該地區引發手足口的主要病原體為EV71和CA16，EV71為優勢病毒株，但我們的研究結果顯示豐南區手足口的患者主要感染病原體為CA16，說明不同地區流行的手足口疫情主要病原體不盡相同，同時姜法春等［4，6］報道同一地區不同年份或季節報告的手足口病例感染的病原體優勢菌株也有變化，但所有文獻和研究資料均顯示在我國流行的手足口疫情 EV71和CA16在病原學中占有重要的位置。

3.3 研究中發現雖然CA16檢出率更高，但在重癥病例中EV71的陽性率三年均在50%以上，遠遠高于CA16，這表明EV71的感染更易引起重癥手足口病。此前有大量報道稱EV71病毒感染性強，致病率高，易引起神經毒性，侵犯肺心腦［3，4，7］。我們的研究中得到同樣的結論，因此對于EV71的感染更應引起高度重視。由于各種病原體所致的手足口病在臨床上難以區別，利用分子生物學技術進行病原學檢測，能快速準確的感染病原，有望對臨床診斷和治療提供幫助。

3.4 手足口病的流行具有明顯的年齡性和季節性，本次研究顯示夏季是手足口病暴發的高峰，重癥病例也多發于此季節，溫暖潮濕的氣候更適于此類病毒的滋生與傳播。感染該病的患者大多數為兒童，且5歲以下多發，占總數的88.15%。因此我們要加強夏季幼兒園和學校的疫情防護工作，避免在個別教育場所的大規模傳染。同時增強幼兒和家長的自我保健意識，尤其5歲以下兒童要加強自身防護，減少疾病的發生。

1 朱汝南，錢淵，鄧潔，等.北京市兒童手足口病與腸道病毒71型和柯薩奇病毒A組16型感染有關.中華流行病學雜志，2007，28:1004-1008.

2 汪飛鵬，陳真，劉世蕓，等.2010年池州地區手足口病病原學分析.預防醫學情報雜志，2012，3:178-180.

3 葉瑞國，龐曉瀘，蔣寧，等.2010-2011年玉林市手足口病病原學檢測結果分析.預防醫學論壇，2012，18:697-698.

4 姜法春，郝畢，董禮燕，等.青島地區2007-2011年手足口病病原學分析.中華疾病控制雜志，2013，17:153-155.

5 趙華，趙春芳，陳應瓊，等.重慶市2009年手足口病病原學分析.現代預防醫學，2011，38:2384-2385.

6 李詠梅，張文卿，孫華.2008-2010年淄博地區70例手足口病患兒病原學分析.山東醫藥，2011，51:79-80.

7 羅文英，謝群，朱偉民，等.郴州市2009年46例臨床診斷為手足口病的病原學分析.現代預防醫學，2011，38:1130-1131.