中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)染色對(duì)急性白血病鑒別診斷的研究

鄒茂賢 逄婷 何金花 韓澤平

番禺中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東廣州 511400

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)染色對(duì)急性白血病鑒別診斷的研究

鄒茂賢*逄婷 何金花 韓澤平

番禺中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東廣州 511400

目的:通過中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)染色，探討急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)與急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者NAP的陽性率及積分鑒別診斷的價(jià)值，以提高急性白血病診斷的準(zhǔn)確性和及時(shí)性。方法:應(yīng)用偶氮偶聯(lián)法⑴對(duì)105例急性白血病，包性急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)41例、急性髓系細(xì)胞白血病(AML)64例，90例正常對(duì)照組進(jìn)行NAP陽性率及積分進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，算出相關(guān)性、特異性及差異性。結(jié)果:急性淋巴細(xì)胞白血病NAP陽性率和積分比急性髓性白血病、正常對(duì)照組明顯增高，有顯著差異(P＜0.01);急性髓性白血病比急性淋巴細(xì)胞白血病、正常對(duì)照組明顯降低，有顯著差異(P＜0.01)。結(jié)論:NAP對(duì)急性白血病有重要的鑒別作用。

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶;急性白血病;鑒別

NAP主要存在于中性成熟粒細(xì)胞(包括中性桿狀核粒細(xì)胞和分葉核粒細(xì)胞)胞漿內(nèi)，故中性成熟中性粒細(xì)胞胞漿呈陽性，其他細(xì)胞基本呈陰性。

1 資料與方法

1.1 資料105例急性白血病，2008年1月－2013年6月的標(biāo)本，均來自番禺區(qū)中心醫(yī)院，這些病例都是經(jīng)過骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、流式細(xì)胞術(shù)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)等檢測(cè)確診的病例，符合WHO的診斷標(biāo)準(zhǔn)⑵及國內(nèi)診斷標(biāo)準(zhǔn)⑶。90例正常對(duì)照組為隨機(jī)正常體檢者(不分性別、年齡)，從正常血常規(guī)(EDTA抗凝)管中新鮮制作的血涂片。

1.2 試劑:珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的NAP染色試劑盒(編號(hào): BA－4117)。操作步驟:干燥涂片，滴加A液固定涂片30秒，蒸餾水沖洗，甩干;滴加工作液15分鐘上，蒸餾水沖洗，甩干;搖勻E液復(fù)染1～2分鐘，蒸餾水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果是成熟中性粒細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)藍(lán)色顆粒為陽性細(xì)胞并進(jìn)行積分計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)方法:(－)0分，細(xì)胞漿中無陽性染色顆粒; (+)1分，細(xì)胞漿中含少量顆粒或呈彌漫淺藍(lán)色;(++)2分，細(xì)胞漿中含中等量的顆粒或呈彌漫藍(lán)色;(+++)3分，細(xì)胞漿中含較多顆粒或呈彌漫較深藍(lán)色;(++++)4分，細(xì)胞漿中充滿粗大顆粒或呈彌漫深藍(lán)色。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)，數(shù)據(jù)采用單因素方差分析檢驗(yàn)，P＜0.05有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 正常對(duì)照組、ALL組、AML組的NAP陽性率和積分的測(cè)定為減少片間差異，無論正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，依據(jù)片中細(xì)胞的多少，至少數(shù)200個(gè)以上的細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)在不少的情況下，一般數(shù)500個(gè)細(xì)胞，再求平均值，如果一張片細(xì)胞數(shù)過少，就采用計(jì)數(shù)多張片，以減少隨機(jī)誤差。正常男性、女性以及年齡之間NAP的陽性率和積分，結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。正常對(duì)照組、ALL組、AML組的NAP陽性率和積分見表1。

表1

2.2 正常對(duì)照組、ALL組、AML組的NAP陽性率和積分進(jìn)行單因素方差分析檢驗(yàn)，結(jié)果顯示三者之間有顯著性差異，P＜0.01。見表2。

ALL的NAP陽性率和積分明顯高于正常組及AML組(P＜0.01)，AML的NAP陽性率和積分明顯低于正常組及ALL組(P＜0.01)。

表2

3 討論

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶(NAP)是中性粒細(xì)胞的標(biāo)志酶，主要存在于成熟中性粒細(xì)胞(中性分葉核、中性桿狀核)內(nèi)，是其胞質(zhì)特殊顆粒釋放的一種在堿性條件(pH9.3～9.6)能催化各種醇和酚的單磷酸酯水解的非特異性水解酶。NAP活力可反映成熟粒細(xì)胞的成熟程度和功能，隨著細(xì)胞的成熟，酶的活性也逐漸增強(qiáng)。當(dāng)中性粒細(xì)胞活化后，NAP陽性率及積分升高在病理情況下，NAP活性的變化常有助于某些疾病的診斷和鑒別診斷。急性白血病在一般情況下，運(yùn)用過氧化物酶(POX)染色、特異性酯酶染色與非特異性酯酶染色能鑒別出ALL與AML。但對(duì)于早期的AML，POX染色往往呈陰性反應(yīng)，易誤為ALL，對(duì)于這種急性白血病，我們?cè)谄綍r(shí)日常工作中，常限于困惑，特別是對(duì)于實(shí)驗(yàn)室無細(xì)胞流式檢測(cè)、染色體及基因檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室，更處于被動(dòng)，這對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確診斷和臨床治療都帶來阻礙。但如果聯(lián)合NAP染色，絕大多數(shù)情況下就能較好地鑒別出ALL還是AML，前者NAP明顯增高，后者NAP明顯降低。因此NAP對(duì)急性白血病的分型診斷具有重要意義。但AML中對(duì)于M7型及M0因病例太少，因此不能確定是否也具有顯著差異性，同時(shí)NAP對(duì)鑒別單核系還是粒系無明顯鑒別作用，統(tǒng)計(jì)無明顯差異性(P＞0.05)，因而本實(shí)驗(yàn)也未將各型急髓細(xì)分出來。

［1］譚齊賢.臨床血液學(xué)和血液檢驗(yàn)［M］.第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003.47－49.

［2］Elaine S Jaffe，Nancy Lee Harris，Harald Stein，James W Vardiman.Pathology and Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues［M］.France:IARCPress Lyon，2001.

［3］張之南.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)［M］第3版.北京:科學(xué)出版社，2007.

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1009－6019(2014)09－0172－01