紫外分光光度法測定荷葉中總黃酮含量

王莉

浙江省長興縣中醫院 浙江長興 313100

紫外分光光度法測定荷葉中總黃酮含量

王莉

浙江省長興縣中醫院 浙江長興 313100

目的:建立一種測定荷葉中總黃酮類化合物成分含量的測定方法。方法:采用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，Na2NO2－Al(NO3)3－NaOH為顯色劑，測定波長為506nm。結果:在0.208－1.248mg/ml質量濃度范圍內，對照品蘆丁的吸收度與濃度線性關系良好，r=0.9995，平均回收率96.86%，RSD=0.71(n=5)。結論:分光光度法操作簡便，靈敏度高，重現性好，可用于準確測定荷葉中的總黃酮的含量。

荷葉;紫外分光光度法;總黃酮

Folium Nelumbinis;UV spectrometry;Total Flavonoid

荷葉(Folium Nelumbinis)為睡蓮科蓮屬植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn.)的葉片。我國大部分地區均產。6～7月份花未開放時采收，除去葉柄，曬至七八成干，對折成半圓形，曬干。亦用鮮葉，或初生嫩葉(荷錢)。荷葉苦、澀，平。歸心、肝、脾經。具有清熱解暑，升陽，止血。主治暑熱煩渴，頭痛眩暈，脾虛腹脹，大便泄瀉，吐血下血，產后而露不凈，赤游火丹。將荷葉采用扣鍋煅法煅成荷葉炭，增強其收澀及化瘀止血作用，用于多種出血癥。現代藥理實驗也充分表明:荷葉及其炮制品具有抑菌，防止膽囊膽固醇結石的形成，調節血脂，抑制脂肪酶，抗氧化和止血作用［1］。荷葉主要含有黃酮類，蓮堿、原荷葉堿、荷葉堿等多種生物堿類，維生素C，有機酸，多糖，揮發油等多種化合物。荷葉主產于湖南、福建、江蘇、浙江、南方各地，可謂分布廣泛，資源豐富。荷葉中黃酮類成分是荷葉的重要活性成分之一，荷葉黃酮將以其資源豐富，價格低廉，藥用價值顯著等優勢被人們認可，將成為一種非常有應用前途的藥物。

1 儀器與試藥

島津UV－2550紫外分光光度計，電子分析天平，電熱恒溫干燥箱，托盤天平，超聲波清洗機，荷葉藥材購自浙江中醫藥大學飲片廠，蘆丁(對照品，購自中國上海試劑二廠)，其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 蘆丁對照品溶液的制備［2］

用電子分析天平精密稱取蘆丁對照品(120℃常壓干燥至恒重)0.0104 g置于50ml容量瓶中，加少量甲醇溶解，并用甲醇定容至刻度，搖勻后靜置，配成對照品溶液(蘆丁濃度0.228mg/ml)。

2.2 荷葉供試品溶液的制備［3］

取荷葉絲，烘干并將其粉碎，稱取1g，置具有塞得錐形瓶中，加入甲醇50ml，稱定重量，于40℃超聲清洗機中提取30min，放冷，并用甲醇補足重量，過濾后進行離心，制得供試品溶液。

2.3 測定溶液的制備

取2.2制得的供試液1ml，置于25ml容量瓶中，加蒸餾水至6ml，再加5%亞硝酸鈉溶液1ml，混勻，放置6min;加10%硝酸鋁溶液1ml，混勻，放置6min;加1mol/l氫氧化鈉溶液10ml，以甲醇定容至25ml，混合均勻，放置15min，得測定溶液。

2.4 測定波長的選擇

取蘆丁對照品溶液和供試液各1ml，分別置于25ml容量瓶中，按2.3方法制備對照品溶液及供試品測定液。以不加對照品溶液或供試品的相應溶液為空白對照，在250－700波長范圍內進行連續波長掃描，結果對照品及供試品測定液在450－550nm范圍有最大吸收。故對450－550nm范圍進行進一步的連續波長掃描，結果表明對照品及供試品液均在506nm有最大吸收，故選擇506nm為測定波長。

2.5 標準曲線繪制

用電子分析天平精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6ml分別置于6個容量瓶中，按2.3的方法制成測定液，以不加標準溶液的相應溶液作為空白對照，在波長506nm處測定吸光度值，記錄吸光度值并以吸光度為縱坐標，蘆丁濃度為橫坐標，得蘆丁標準曲線圖。結果見圖1

圖1 蘆丁標準曲線

2.6 方法學考察

2.6.1 線性關系考察［4］

本法中，蘆丁在0.208－1.248mg/ml范圍呈良好線性關系，回歸方程為Y=0.43966X－0.00427，相關系數r=0.9995。

2.6.2 重復性試驗

分別稱取5份干燥荷葉樣品，按照2.2及2.3的方法平行制成5份供試液，以不加供試液的相應溶液為空白，按線性關系考察項下方法測定，記錄吸光度值，并計算總黃酮含量及RSD值，結果見表1

表1 重復性試驗結果

2.6.4 穩定性試驗

用電子分析天平稱取干燥荷葉1.0018g，按2.2及2.3的方法制成供試液和測定液，首次測定后，每隔5min測定1次，記錄吸光度值(波長506nm處)，考察其顯色后的穩定性。結果見表2

表2 穩定性試驗結果

2.6.5 精密度試驗

稱取干燥粉碎后的荷葉樣品，按2.2及2.3的方法平行制備5份測定液，按線性關系考察項下方法測定，記錄吸光度值，并計算總黃酮含量及RSD值，結果如表3

表3 精密度試驗結果

2.6.6 加樣回收率試驗

取精密度試驗中一份供試液各0.5ml，分別置于5個25ml容量瓶中，依次加入蘆丁對照品準液2ml，在按2.3的方法制成測定液，按線性關系考察項下方法測定，記錄吸光度值，并計算測定液總黃酮濃度、回收率及RSD，結果如表4

表4 加樣回收率試驗結果

3 結論

3.1 荷葉是一種資源廣泛，營養價值高，藥用價值顯著的天然原料，采用紫外分光光度法測定荷葉中總黃酮的含量具有重要意義。

3.2 本實驗采用紫外可見分光光度法測定絡荷葉中總黃酮的精密度、穩定性、重復性良好，加樣回收率合格，為荷葉中總黃酮的含量測定提供了一種簡便可行的方法。

3.3 與高效液相色譜法測定荷葉中總黃酮含量［5］相比，紫外可見分光光度法含量分析方法的穩定性，加樣回收，精密度都不如高效液相色譜法。故在進行定量分析時建議采用高效液相色譜法。

［1］任貽軍，張宏琳.荷葉的藥理作用研究進展［A］.湖北:中國藥業，2009，(20):75－76.

［2］劉利，潘一江.不同桑種桑葉總黃酮含量分析［J］.農業工程科學，2008，24(1):188－491.

［3］靳素榮，徐曌.超聲提取荷葉黃酮的工藝研究［J］.食品科技，2007，(10):97－99.

［4］周群，傅海瀅，白佳偉，藜藜.紫外分光光度法測定絡石藤中總黃酮含量［J］.時珍國醫國藥，2007，18(2):351－352.

［5］周蘭香，黃阿根，謝凱舟，錢建亞.分光光度與HPLC法測定荷葉總黃酮的研究［J］.中草藥，2002，33(1):35－37.

R446

B

1009－6019(2014)09－0009－02

Determination of Content of Total Flavonoid in Folium Nelumbinis by UV spectrometry Abstract:Objective To establish a method for the determination of the content of total flavonoid in Folium Nelumbinis.Methods Rutin standard colored with Na2NO2－Al(NO3)3－NaOH had a maximum absorbance at 506nm by UV spectrometry.Results The absorbency and concentrztion of rutin had good linear in the range of 0.208－1.248mg/ml(r=0.9998)。The average recovery rate was 96.86%，RSD=0.71(n=5).Conclusion The method is easy，highly accurate，reproducible and can be applied to determine total flavonoid in Folium Nelumbinis accurately.