金黃色葡萄球菌對紅霉素及克林霉素的耐藥性的分析

路永生

每一種細菌都是有一定的耐藥性的, 隨著人類技術的不斷發展, 人們所發掘到的抗生素的種類越來越多, 這一成就有利也有弊, 抗菌藥物的廣泛的使用, 使得葡萄菌屬已經成為了醫院和社區引起化膿感染的主要來源, 在臨床治療金黃色葡萄球菌屬的感染中, 作者大多選用林可酰胺類、大環內酯類以及鏈陽菌素B類等抗菌藥物進行治療, 需要特別注意的是克林霉素, 由于自身的滲透能力比較強的優點, 所以被選為對與頭孢菌素以及青霉素過敏的首選的替代藥物, 而且隨著病原菌的耐藥性的不斷增加, 現有的抗菌藥物已經呈現出比較高的耐藥性, 除此之外, 紅霉素的應用還能誘導出現克林霉素耐藥的現象, 減少治療的效果［1］。所以在現在的醫療體系當中, 誘導型克林霉素耐藥已經引起了許多人的關注,所以, 本文中主要分析了金黃色葡萄球菌屬對于紅霉素以及克林霉素的耐藥性, 使醫務工作人員更加合理的使用抗菌藥物, 更加徹底的治療細菌的感染。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗中所采用的菌株均為本院在2012年6月～2013年4月臨床送檢的各類標本中分離出來的金黃色葡萄球菌160株(其中mecA基因陽性菌株為132株), 凝固酶陰性金黃色葡萄球菌180株(其中mecA基因陽性菌株為115株)。在采取的所有菌株均需經過ATB Expression細菌分析儀鑒定和確認。

1.2 儀器與試劑 35℃恒溫箱, ATB Expression細菌分析儀,ID32 STAPH細菌鑒定卡, 克林霉素藥敏紙片(2 μg), 紅霉素藥敏紙片(15 μg), M-H瓊脂。

1.3 藥敏紙片與藥敏試驗 血漿凝固酶膠乳試劑是法國生物梅里埃公司的產品, 而頭孢西丁、克林霉素以及紅霉素紙片是英國Oxoid公司的產品。采用的紙片擴散法藥敏試驗是按照美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)規程來對金黃色葡萄球菌以及里昂金黃色葡萄球菌來進行操作的, 對于不同的藥物, 作用效果也是不同的, 頭孢西丁的抑制圈≤21 mm為耐藥、≥22 mm為敏感；其他凝固酶陰性金黃色葡萄球菌抑制圈≤24 mm為耐藥、≥25 mm為敏感。對于D-試驗的操作, 需要將0.5麥氏單位濃度的金黃色葡萄球菌屬涂抹于M-H瓊脂板上面, 涂抹應盡量均勻, 兩種紙片邊緣之間的距離為15 mm, 在35℃的恒溫箱中孵育16～18 h。對于結果的判讀應該根據NCCLS進行判斷, 標準是紅霉素為14～22 mm, 克林霉素則為15～20 mm。D-試驗陽性或者說是紅霉素對克林霉素具有誘導耐藥性的現象是克林霉素紙片的抑菌環在靠近紅霉素紙片一側出現了平面截斷的現象, 也就是克林霉素紙片的抑菌環看似一個大寫的D［2,3］。

1.4 基因的檢測 采用的均為聚合酶鏈反應(PCR)法。進行模板DNA的制作：將在血平板上培養了一夜的細菌菌落懸浮于2 ml 0.85%的NaCl溶液當中, 濃度為5個麥氏單位。以速度為13000 r/min進行1 min的離心, 取出沉淀, 懸于200 μl的裂解緩沖液當中, 并在沸水中煮10 min左右, 然后在13000 r/min進行2 min的離心, 最后取出上清液保存在-20℃備用。

2 結果

2.1 耐藥的表型 340株金黃色葡萄球菌屬對紅霉素和克林霉素的耐藥表型情況, 見表1。

2.2 耐藥基因類型的分布 在具有誘導耐藥性的葡萄菌屬中檢測紅霉素核糖體甲基化酶基因, 見表2。

表1 金黃色葡萄球菌屬對紅霉素和克林霉素不同耐藥表型(n)

表2 89株D-試驗陽性的葡萄菌屬中紅霉素耐藥基因類型分布構成比(n, %)

3 討論

在最近幾年來, 大環內酯類對葡萄菌屬的活性不斷降低,在本次試驗中對6種耐藥基因進行了檢測, 在數據中可以看出, 紅霉素核糖體甲基化酶基因ermC是誘導耐藥的主要基因, ermC基因主要見于MRCNS, ermA主要見于MRCNS, sat4見于MSSA和MRCNS, 而對于ermB來說是很少見的。

D-試驗在臨床試驗中主要是用于紅霉素對克林霉素的誘導耐藥性的檢測, 目的在于避免在使用克林霉素治療時的失誤的現象, 影響治療的效果, 也浪費了藥物。在現在的微量稀釋法以及機器法藥敏試驗中, 對于此種誘導耐藥機制尚不能檢測出來, 所以需要進行D-檢驗, 使藥物的耐藥范圍縮小, 得出的結果才有可信度［4］。因為耐藥性的存在, 為了避免在臨床上出現不合理使用克林霉素的現象, 所以需要在確定使用的藥物之前對藥物在臨床實驗室進行正規的D-試驗的檢驗, 從而保證克林霉素的耐藥性能夠準確的檢測出來,使醫生有具體的指導來使用抗菌藥物。

［1］ 魏緒廷, 楊霞.葡萄球菌屬對紅霉素和克林霉素的誘導耐藥性研究.中華醫院感染雜志, 2008, 18(7):921-922.

［2］ 曲海霞.葡萄球菌對克林霉素誘導型耐藥的檢測與分析.中外健康文摘, 2010, 7(28):140.

［3］ 黃烈, 林廣城.葡萄球菌屬對紅霉素和克林霉素的誘導耐藥性研究.中外檢驗醫學雜志, 2007, 17(2):121-124.

［4］ 趙瑞珍.D試驗檢測葡萄球菌屬中克林霉素誘導型耐藥.中外醫院感染學雜志, 2006, 16(9):977-979.