國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定依達(dá)拉奉注射液含量結(jié)果的對(duì)比研究

孫瑩 林大專 孫全樂(lè) 張凌贏

依達(dá)拉奉注射液是日本三菱東京制藥株式會(huì)社開(kāi)發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)用藥, 于2001年在日本首次上市, 隨后國(guó)內(nèi)多家企業(yè)相繼上市仿制藥。在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定項(xiàng)下, 國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)均采用高效液相色譜法, 但日本標(biāo)準(zhǔn)采用的是內(nèi)標(biāo)法,國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)采用的是外標(biāo)法, 為了比較國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉含量結(jié)果的一致性, 我們按照日本標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)分別對(duì)同一廠家的三批依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉的含量進(jìn)行了測(cè)定, 以其確定國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的可行性。

1 儀器與試藥

1.1 主要儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(Agilent 1200可變波長(zhǎng)檢測(cè)器(VWD), Agilent 1200數(shù)據(jù)站, P/N-7725i手動(dòng)進(jìn)樣器, G1354A四元梯度泵及G1316A柱溫箱(美國(guó)Agilent公司產(chǎn)品)。

1.2 主要試藥 依達(dá)拉奉對(duì)照品(南通飛宇生物科技有限公司, 批號(hào)FY24810511, 規(guī)格：100mg, 含量≥99%)；依達(dá)拉奉注射液(吉林省某藥業(yè)股份有限公司：2013063001、2013063002、2013063003)；甲醇 (美國(guó) Fisher公司 , 色譜純 )；醋酸銨(北京化工廠, 分析純)；乙腈(美國(guó)Fisher公司, 色譜純)；醋酸(北京化工廠, 分析純)；氨水(北京化工廠, 分析純)；對(duì)氨基苯甲酸乙酯(阿拉丁化學(xué)試劑上海有限公司,分析純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

2.1.1 國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)［1］Kromasil5～C18 柱 (250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相為0.05 mol/L醋酸銨溶液(用冰醋酸調(diào)節(jié)pH=4.0±0.1)-乙腈(75:25)；流速1.0 ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng) 254 nm ；進(jìn)樣量 20 μl。

對(duì)照品溶液的制備：取依達(dá)拉奉對(duì)照品適量, 精密稱定,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每毫升中約含依達(dá)拉奉20 μg的溶液。

供試品溶液的制備：精密量取依達(dá)拉奉注射液0.70 ml,加流動(dòng)相稀釋至50 ml。

2.1.2 日本標(biāo)準(zhǔn)［2］Kromasil5-C18 柱 (150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相為稀乙酸(1→100)-甲醇(3:1)加入氨試液調(diào)節(jié)pH至5.5；流速1.5 ml/min；柱溫50℃；檢測(cè)波長(zhǎng)240 nm ；進(jìn)樣量 20 μl。

對(duì)照品溶液的制備：取依達(dá)拉奉對(duì)照品適量, 精密稱定,加內(nèi)標(biāo)溶液2.50 ml, 用甲醇稀釋至50 ml。

供試品溶液的制備：精密量取依達(dá)拉奉注射液0.50 ml,加內(nèi)標(biāo)溶液2.50 ml, 用甲醇稀釋至50 ml。

內(nèi)標(biāo)溶液的制備：精密稱定氨基苯甲酸乙酯約0.5 g, 用甲醇稀釋至250 ml。

2.1.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在上述色譜條件下, 分別精密量取依達(dá)拉奉對(duì)照品和供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀, 理論板數(shù)以依達(dá)拉奉峰計(jì)算分別為2552(國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn))和5436(日本標(biāo)準(zhǔn) )。

2.2 含量測(cè)定方法

2.2.1 國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn) 精密量取依達(dá)拉奉對(duì)照品及供試品溶液各20μl注入液相色譜儀, 記錄色譜圖, 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉的含量。

2.2.2 日本標(biāo)準(zhǔn) 取本品適量, 約相當(dāng)于依達(dá)拉奉3 mg, 精密加入對(duì)氨基苯甲酸乙酯溶液10 ml, 加甲醇稀釋至20 ml, 作為供試品溶液；取依達(dá)拉奉對(duì)照品75 mg, 精密稱定, 用甲醇定量稀釋至50 ml量瓶中, 精密量取2 ml, 精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10 ml, 加甲醇稀釋至20 ml, 作為對(duì)照品溶液。取供試品和對(duì)照品溶液各2 μl, 注入液相色譜儀, 以峰面積計(jì)算。

2.3 結(jié)果

2.3.1 國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)

2.3.1.1 線性試驗(yàn) 精密稱定干燥至恒重的依達(dá)拉奉對(duì)照品適量, 加流動(dòng)相制成990 μg/ml的貯備液, 分別精密量取上述貯備液 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml置 50 ml容量瓶中, 加流動(dòng)相稀釋至刻度。精密量取上述溶液20 μl, 注入液相色譜儀, 記錄色譜圖及峰面積。以溶液濃度(X)為橫坐標(biāo), 相應(yīng)峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸, 得回歸方程Y=52.07x+50.59(r=0.9992)。依達(dá)拉奉在 11.88～27.72 μg/ml范圍內(nèi), 濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.1.2 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液各20 μl, 連續(xù)進(jìn)樣6次, 記錄各次測(cè)定的依達(dá)拉奉峰面積, 峰面積RSD值為0.74%。

2.3.1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液, 分別于0、2、4、8、12 h依法測(cè)定, 峰面積RSD值為0.6%, 供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.1.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取批號(hào)為2013063001樣品6份, 按供試品溶液制備方法制備, 依法測(cè)定, 結(jié)果六份樣品溶液的平均含量為96.8%, RSD值為0.7%。

2.3.1.5 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的供試品溶液9份, 每份0.6 ml, 置50 ml量瓶中, 分別精密加入對(duì)照品溶液(19.8 μg/ml)4.5、9.5、14.5 ml, 制成高、中、低三個(gè)濃度的溶液 ,各3份, 依法測(cè)定, 計(jì)算回收率, 平均回收率為100.3%, RSD為0.462%。

2.3.1.6 樣品測(cè)定 取本品三批樣品依法測(cè)定, 平均含量95.0%(占標(biāo)示量的100%)RSD為0.122%。

2.3.2 日本標(biāo)準(zhǔn)

2.3.2.1 線性試驗(yàn) 精密稱定干燥至恒重的依達(dá)拉奉對(duì)照品適量, 加流動(dòng)相制成990 μg/ml的貯備液, 分別精密量取上述貯備液0.56、0.65、0.46、0.85、0.95 ml置50 ml容量瓶中,分別加對(duì)氨基苯甲酸乙酯溶液2.5 ml, 加甲醇稀釋至刻度。精密量取上述溶液20 μl, 注入液相色譜儀, 記錄色譜圖及峰面積。以溶液濃度(X)為橫坐標(biāo), 相應(yīng)依達(dá)拉奉峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸, 得回歸方程Y=48.120x+14.080(r=0.9994)。依達(dá)拉奉在11.088～18.81μg/ml范圍內(nèi), 濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2.2 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品溶液(含內(nèi)標(biāo)液)各20 μl, 連續(xù)進(jìn)樣6次, 記錄各次測(cè)定的依達(dá)拉奉峰面積, 峰面積RSD值為0.95%。

2.3.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液(含內(nèi)標(biāo)液),分別于0、2、4、8、12 h依法測(cè)定, 依達(dá)拉奉峰峰面積RSD值為0.7%, 供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取批號(hào)為2013063001樣品6份, 按2.1.2日本標(biāo)準(zhǔn)供試品溶液制備方法制備, 依法測(cè)定,結(jié)果六份樣品溶液的平均含量為98.5%, RSD值為0.327%。

2.3.2.5 回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的供試品溶液9份, 每份0.1 ml, 置50 ml量瓶中, 分別精密加入對(duì)照品溶液(990 μg/ml)0.5、0.6、0.7 ml, 制成高、中、低三個(gè)濃度的溶液,各3份, 再分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液(1→500)2.5 ml, 依法測(cè)定,計(jì)算回收率, 平均回收率為100.2%, RSD為0.526%。

2.3.2.6 樣品測(cè)定 取本品三批樣品依法測(cè)定, 平均含量(占標(biāo)示量的100%)為98.2%, RSD為0.305%,

2.3.3 結(jié)果分析與討論

3 討論

本項(xiàng)研究依據(jù)文獻(xiàn)比較了國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定含量結(jié)果的一致性, 通過(guò)F檢驗(yàn)和t檢驗(yàn), 得出兩種方法的精密度和測(cè)定的依達(dá)拉奉含量平均值之間沒(méi)有顯著性差異, 說(shuō)明作為含量測(cè)定方法二者可以互相代替, 尤其是日本標(biāo)準(zhǔn)(內(nèi)標(biāo)法)操作比較繁瑣、費(fèi)時(shí)耗材高, 所以國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)(外標(biāo)法)完全可以替代日本原標(biāo)準(zhǔn)用于依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉含量的控制。

［1］ 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.依達(dá)拉奉注射液標(biāo)準(zhǔn)(試行).YBH03182005.

［2］ 厚生省.日本藥局方.第 11 改正解說(shuō)書 (一部) , 1986:56.

［3］ 古鐵波, 陳貴平.高效液相色譜法測(cè)定依達(dá)拉奉注射液中依達(dá)拉奉及有關(guān)物質(zhì)的含量.中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥, 2013, 20(21):61-65.

［4］ 齊瑩.HPLC法測(cè)定依達(dá)拉奉注射液的含量.黑龍江科技信息,2013(3):19.