檸檬無菌播種試驗

麥麗瑤等

摘要

[目的]研究檸檬[Citrus limon （L.） Burm. f.]種子萌發的適宜處理方法。[方法]以不同種皮剝離程度的檸檬種子（不剝種皮、只剝外種皮、剝除內外種皮）為試材，應用不同消毒劑[4%（V/V）藍月亮、0.1%升汞]消毒不同時間（7、15、23 min），進行檸檬播種試驗。[結果]0.1%升汞消毒8 min的效果優于4% （V/V）藍月亮消毒15 min，但差異性不大；種子在剝除內、外種皮后萌發率、生長勢情況都好于只剝外種皮和未剝除種皮的。[結論]考慮到升汞具有致癌變、致突變性等危害，在試驗操作中不提倡使用，故以4%（V/V）藍月亮處理15 min為檸檬種子消毒的最佳方式。該研究可為檸檬組織培養及柑橘無病毒苗木培育提供參考依據。

關鍵詞檸檬；無菌播種；消毒方法；種皮

中圖分類號S666.5文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）06-01639-02

Abstract[Objective] The aim was to study the suitable treatment method of lemon seeds germination. [Method] Lemon seeds of without stripping the testa， only peeling the episperm， and peeling endotesta and episperm were sterilized by 4% （V/V） blue moon and 0.1% HgCl2 for 7， 15， 23 respectively， and then conducted on its sowing test. [Result] The disinfection effect of 0.1% HgCl2 for 8 min was better than that of 4% （V/V） blue moon for 15 min， but they had no significant difference. The germination rate and growth potential of lemon of peeling endotesta and episperm were superior to those of only peeling the episperm. [Conclusion] HgCl2 dose not advocate using in test process because of its damage of sending canceration and mutagenicity， so the best treatment method of lemon seeds is 4% （V/V） blue moon for 15 min. The study provides a reference basis for tissue culture of lemon and breeding of no virus seedlings of orange.

Key words Lemon； Aseptic sowing； Sterile technique； testa

檸檬[Citrus limon （L.） Burm. f.]為常綠小喬木，原產東南亞，我國四川、廣西、云南等地均有栽培。檸檬含有豐富的營養元素，是營養價值和藥用價值極高的水果之一。柑橘苗木的育苗方法有嫁接、壓條、扦插、實生、組織培養等，通過無菌播種人工培養，能夠在短期內獲得大量幼小植株，是現階段經濟有效的快速繁殖方法，也是工廠化育苗中莖尖微嫁接脫毒小苗的重要來源。無菌播種試驗采用的消毒方法多為0.1%升汞消毒10 min，播種方法有撒播法、涂布法和稀釋法。散播法的優點是簡單易行，不易染菌，種子萌發快；涂布法的優點是種子在瓶內分布較均勻；稀釋法的優點是種子經稀釋后撒播，密度容易掌握，種子分布均勻，利用率高[1]。至今為止，與無菌播種相關的報道多為蘭科植物和其他觀賞類花卉，且多集中于對適合其生長的培養基、添加激素或其他天然提取物、培養時間等方面的研究，而關于檸檬無菌播種中最佳消毒時間、最佳消毒藥劑、內外種皮剝離等影響其種子萌發的因素的研究少有報道[2-4]。為此，筆者研究檸檬種皮不同剝離程度（不剝種皮、只剝外種皮、剝除內外種皮）及不同消毒劑（4%（V/V）藍月亮、0.1%升汞）消毒不同時間對檸檬種子萌發的影響，探討種子萌發的適宜處理方法，以期為檸檬組織培養及柑橘無病毒苗木培育提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 培養基及種子準備

配制MS培養基（培養基中加入瓊脂8.0 g/L及蔗糖35.0 g/L），用1 mol/L NaOH或HCl溶液把pH調至5.8，加熱溶解瓊脂后趁熱分裝20～25 ml培養基于規格為30 mm×150 mm的平底試管中，高壓蒸氣滅菌鍋121 ℃滅菌20 min，冷卻，備用。

檸檬果實購自超市。從新鮮的果實中剝取種子。用1 mol/L NaOH溶液浸泡5 min，以軟化種子表面的果膠，用清水反復沖洗直至果膠去除干凈，備用。

1.2方法

1.2.1

不同消毒時間對檸檬無菌萌發的影響。在超凈工作臺上將剝去內外種皮的檸檬種子置于濃度4% （V/V）的藍月亮溶液中分別浸泡7、15、23 min（記為處理A1、A2、A3），再用無菌水沖洗4～5次，每次1～2 min。然后播種于MS培養基上，播種時胚根朝下，種子的1/2插入培養基中，每試管3粒。每處理播種5管，3次重復。置于溫度為26 ℃、空氣相對濕度為80%的培養箱中，暗培養15 d，每隔3 d觀察并統計一次種子的污染率。

1.2.2

不同消毒方法及種皮不同剝離程度對檸檬種子無菌萌發的影響。

設6個處理：B1和C1剝除外種皮及內種皮；B2和C2僅剝除外種皮；B3和C3不剝種皮。B1、B2和B3處理組用4%（V/V）藍月亮消毒劑消毒15 min，C1、C2和C3處理組用0.1%升汞消毒劑消毒8 min。在超凈工作臺上將檸檬種子按照上述要求分類處理，然后按上述處理分別置于4% （V/V）的藍月亮溶液中浸泡15 min和0.1%升汞消毒劑消毒8 min，再用無菌水沖洗種子4～5次，每次1～2 min。最后將種子播于MS培養基上，播種時胚根朝下，種子的1/2插入培養基中，每試管3粒。每種處理播種5管，3次重復。置于溫度為26 ℃、空氣相對濕度為80%的培養箱中，暗培養15 d，每隔3 d觀察并統計一次種子污染率。

2 結果與分析

3結論與討論

檸檬無菌播種研究是一項基礎性工作，可以為檸檬的莖尖嫁接、育苗、大批量獲得無菌黃化苗等研究的進一步開發利用提供理論依據。對于檸檬種子無菌播種，消毒劑的選取以及消毒時間的確定很重要。不同消毒時間對檸檬種子萌發、污染率及長勢都有顯著的影響。消毒時間過短過長都會影響種子的生長和發育。該試驗中，4%（V/V）藍月亮消毒15、23 min，在播種3 d后萌發率均達到了1000%；4%（V/V）藍月亮消毒7 min，播種6 d后萌發率為93.3%。綜合發芽勢、芽長、根系長度等因素，4%（V/V）藍月亮消毒15 min處理為最優處理。

最優處理，不剝種皮處理種子在MS培養基中極難發芽，用4%（V/V）藍月亮消毒15 min和01%升汞消毒8 min，培養15 d的發芽率僅分別為21.4%和4.4%；而僅剝除外種皮處理發芽率居中。

因此，建議在研究和生產上進行檸檬無菌播種時剝除內外種皮。

在無菌條件下研究消毒劑及消毒劑消毒時間對檸檬萌發的影響還未見報道，該研究對快速獲得無菌苗及組織培養材料有重要意義。該試驗選取了常用的2種消毒劑0.1%升汞和4%（V/V）藍月亮。其他消毒劑效果如何，消毒時間為多少最恰當，對結果有何影響，如何使種子萌發效率更高等，還有待于進一步研究。

參考文獻

[1]

陳超，王桂蘭，喬永旭，等. 蝴蝶蘭無菌播種方法的比較研究[J].北方園藝，2006（1）：35-36.

[2] 邵和平，張寧寧，張瓊，等. 卡特蘭的無菌播種及組培快繁技術研究[J]. 江蘇農業科學，2013，41（5）： 50-52.

[3] 姚麗娟，陳義增，徐曉薇，等.大花蕙蘭無菌播種技術試驗[J].浙江林業科技， 2006，26（2）： 30-33.

[4] 王芬，徐步青，劉幸佳，等.春蘭種子無菌播種萌發過程及其影響因素[J].浙江農林大學學報，2013，30（1）： 136-140.