超高效液相色譜法測定氨氯地平貝那普利膠囊中兩種成分的含量*

王亞靜，鄧紅，張蜀，黃學峰

(1.廣東藥學院藥物研究所/廣東省藥物新劑型重點實驗室，廣州 510006；2.廣東麗峰藥業有限公司，廣州 510931)

超高效液相色譜法測定氨氯地平貝那普利膠囊中兩種成分的含量*

王亞靜1，鄧紅1，張蜀1，黃學峰2

(1.廣東藥學院藥物研究所/廣東省藥物新劑型重點實驗室，廣州 510006；2.廣東麗峰藥業有限公司，廣州 510931)

目的 建立氨氯地平貝那普利膠囊中兩種成分的含量測定方法。方法采用超高效液相色譜(UPLC)法,色譜柱為BEH-C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流動相為甲醇∶水∶甲酸=65∶35∶1;流速為0.2 mL·min-1;檢測波長為240 nm;柱溫為30℃;進樣量為2 μL。結果苯磺酸氨氯地平與鹽酸貝那普利可達到較好分離,苯磺酸氨氯地平(按氨氯地平計)質量濃度在5.14～51.40 μg·mL-1內與峰面積呈良好的線性關系(r=0.999 9),鹽酸貝那普利的質量濃度在19.92～199.24 μg·mL-1內與峰面積呈良好的線性關系(r=0.999 9)。苯磺酸氨氯地平與鹽酸貝那普利的平均回收率分別為100.3%(n=9)和99.3%(n=9)。結論該法快速、準確,適用于氨氯地平貝那普利膠囊的含量測定。

氨氯地平,苯磺酸；貝那普利,鹽酸；色譜法,超高效液相；含量測定

苯磺酸氨氯地平(amlodipine besylate,AB)是第二代長效的雙氫吡啶類鈣拮抗藥,可通過舒張冠狀血管和全身血管,增加冠脈血流量降低血壓,臨床主要用于治療高血壓和心絞痛[1-2]。為了減少靶器官損傷,提高療效,可將血管緊張肽轉換酶抑制藥與鈣拮抗藥聯合用藥治療高血壓,安全有效,具有良好的耐受性[3-5]。鹽酸貝那普利(benazepril hydrochloride,BH)在肝內可水解為貝那普利拉(benazeprilat)。貝那普利拉是一種競爭性的血管緊張肽轉換酶抑制藥,可降低血管阻力,減少醛甾酮分泌,增高血清腎素活性,還可通過抑制緩激肽降解使血管阻力降低,產生降壓作用[6]。復方氨氯地平貝那普利膠囊由諾華制藥公司研制,于1995年獲美國食品藥品管理局(FDA)批準上市,國內尚無該復方制劑上市。開發復方氨氯地平貝那普利膠囊具有良好的臨床應用和市場經濟價值,建立超高效液相色譜法測定復方膠囊中氨氯地平和鹽酸貝那普利的含量,適用于復方氨氯地平貝那普利膠囊的質量控制。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 超高效液相色譜儀(美國Waters公司)；分析柱為ACQUITY BEH C18(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm；美國Waters公司)。CP225D型電子分析天平(德國Sartorius公司)；BS224S型電子分析天平(德國Satorius公司)。

1.2 試劑 復方氨氯地平貝那普利膠囊(廣東麗峰藥業有限公司,規格:氨氯地平2.5 mg/鹽酸貝那普利10 mg,批號:1201101,1201102,1201103),苯磺酸氨氯地平、鹽酸貝那普利、貝那普利拉對照品(中國食品藥品檢定研究院,批號:100768-200501,100374-200903, 100771-201001),甲醇(色譜純,德國默克公司),甲酸(色譜純,天津科密歐化學試劑有限公司),水(屈臣氏雙蒸水)。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 分別稱取苯磺酸氨氯地平對照品約31.6 mg(約相當于氨氯地平25 mg)與鹽酸貝那普利對照品約100 mg,精密稱定,置于100 mL量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,得對照品貯備液。精密量取對照品貯備液1.0 mL,置于10 mL量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得(實際配得混合對照溶液濃度為含氨氯地平25.70 μg·mL-1,鹽酸貝那普利99.62 μg·mL-1)。取貝那普利拉對照品約2 mg,精密稱定,置于10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,濾過,即得。

2.1.2 供試品溶液 取本品膠囊內容物,研細,取適量(氨氯地平2.5 mg,鹽酸貝那普利10.0 mg),精密稱定,置于100 mL量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,濾過,即得。

2.1.3 系統適用性溶液 按照“2.1.2”項下方法稱取膠囊內容物細粉后,加水約40 mL,95℃水浴2 h,放冷至室溫,加水稀釋至刻度,搖勻,濾過,即得。

2.1.4 陰性對照溶液 按處方組成制備除主藥外的陰性樣品,按“2.1.2”項下的制備方法處理即得。

2.2 色譜條件 色譜柱為ACQUITY BEH C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)；流動相為甲醇∶水∶甲酸=65∶35∶1；流速為0.2 mL·min-1；檢測波長為240 nm；柱溫為30℃；進樣量為2 μL。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性與系統適用性實驗 分別取“2.1”項下的供試品溶液、對照品溶液、陰性對照溶液和系統適用性溶液,按“2.2”項下色譜條件進樣檢測,記錄色譜圖。可見陰性對照對樣品測定無干擾,系統適用性溶液所得的色譜圖中氨氯地平、鹽酸貝那普利與水解產物貝那普利拉的理論板數均＞4 000,分離度符合要求。見圖1。

a.貝那普利拉溶液;b.系統適用性溶液;c.混合對照品;d.供試品;e.陰性對照;1.貝那普利拉;2.鹽酸貝那普利;3.苯磺酸氨氯地平圖1 5種溶液的UPLC色譜圖a.benazeprilat solution；b.solution of system suitability；c. mixed reference；d.sample；e.negative control；1.benazeprilat；2. benazepril hydrochloride；3.amlodipine besylateFig.1 UPLC Chromatograms of five kinds of solution

2.3.2 線性關系考察 精密量取對照品貯備液適量,分別加流動相稀釋,搖勻,配制成氨氯地平濃度為5.14,12.85,25.70,38.55,51.40 μg·mL-1,鹽酸貝那普利濃度為19.92,49.81,99.62,149.43, 199.24 μg·mL-1的系列對照品溶液。在“2.2”項下色譜條件下,分別進樣檢測,記錄色譜圖。以對照品質量濃度(C,μg·mL-1)為橫坐標,以對照品峰面積(A)為縱坐標,繪制標準曲線,得氨氯地平的回歸方程:A= 23 400C-8 499.1,r=0.999 9；鹽酸貝那普利的回歸方程:A=11 726C-4 595.4,r=0.999 9。結果表明,苯磺酸氨氯地平(按氨氯地平計算)與鹽酸貝那普利質量濃度分別在5.14～51.40,19.92～199.24 μg·mL-1范圍內峰面積呈良好的線性關系。

2.3.3 精密度實驗 取同一供試溶液,連續重復進樣6次,記錄峰面積。氨氯地平峰面積的RSD為0.09%,鹽酸貝那普利峰面積的RSD為0.07%,表明該方法精密度良好。

2.3.4 重復性實驗 取同批(批號:1201101)氨氯地平貝那普利膠囊,按“2.1.2”項下方法平行制備6份供試品溶液,依法測定,以外標一點法計算含量；測得氨氯地平和鹽酸貝那普利相當于標示量的百分含量分別為101.6%和104.0%,RSD分別為1.88%和2.19%(n=6),表明該方法重復性良好。

2.3.5 穩定性實驗 取同一供試品溶液,分別于0, 2,4,6,8 h進樣測定。在室溫條件下,峰面積無明顯變化,氨氯地平和鹽酸貝那普利兩組分峰面積8 h內的RSD分別為0.19%和0.22%。

2.3.6 加樣回收實驗 取已知含量的氨氯地平貝那普利膠囊內容物(批號:1201101,含氨氯地平和貝那普利分別為9.01,36.89 mg·g-1),研細,分別精密稱取適量(約相當于氨氯地平/貝那普利1/4,1.25/5,1.5/6 mg各3份),分別置100 mL量瓶中,依次加入“2.1.1”項下的混合對照品溶液4,5,6 mL(各3份),按“2.1.1”項下的方法制備低、中、高3個不同濃度的溶液,按“2.2”項下色譜條件進樣檢測,測定含量,計算氨氯地平和鹽酸貝那普利的平均回收率(n=9)分別為100.3%(RSD=1.2%)和99.3%(RSD=1.1%)。見表1。

表1 氨氯地平和鹽酸貝那普利回收率實驗測定結果Tab.1 Results of recovery experiment of amlodipine and hydrochloride benazepril

2.4 樣品測定 取本品3批膠囊內容物研磨成細粉,依法測定,記錄峰面積,計算氨氯地平和鹽酸貝那普利的含量,結果見表2。

3 討論

楊爽等[7]報道,采用HPLC法測定本復方片劑的含量,流動相較復雜,需加入氯化鉀緩沖液和高氯酸鈉,本實驗參考文獻[8],曾采用甲醇∶水為流動相,結果氨氯地平與鹽酸貝那普利分離度達到要求,但峰形較差,且鹽酸貝那普利與水解產物貝那普利拉不能達到基線分離,加入甲酸后,峰形得到改善,與貝那普利拉分離度達到要求,經實驗最后確定甲醇∶水∶甲酸=65∶35∶1為流動相。

表2 3批樣品測定結果Tab.2 Determination results of three batches of samples %

采用UPLC檢測,分析時間短且分離度好,經方法學研究表明,本方法簡單、準確,能有效控制氨氯地平鹽酸貝那普利膠囊的質量。

[1] 馬永義.苯磺酸氨氯地平的質量研究[D].長春:吉林大學,2006.

[2] 劉巍,張慶.液相色譜-串聯質譜法測定人血漿苯磺酸氨氯地平與阿托伐他汀鈣濃度[J].醫藥導報,2010,29 (6):698-701.

[3] 高寒梅,梁金文,郭龍枝.貝那普利聯用氨氯地平對高血壓患者血壓、左室肥厚和心功能的影響[J].中國實用醫藥,2010,19(5):21-22.

[4] 黎雪玲.貝那普利聯合氨氯地平治療高血壓的降壓效果[J].中西醫結合心腦血管病雜志,2013,1(11):12-13.

[5] CHRYSANT,STEVEN G.Blood pressure effects of high-dose amlodipine-benazeprilcombinationinblackandwhite hypertensive patients not controlled on monotherapy[J]. Drugs in R﹠D,2012,12(2):57-64.

[6] 宋蓉,李一石.鹽酸貝那普利及其主要代謝物在健康中國人中的研究[D].北京:中國協和醫科大學,2006.

[7] 楊爽,汪磊,朱萌.HPLC法測定復方鹽酸貝那普利片中鹽酸貝那普利和苯磺酸氨氯地平的含量[J].沈陽藥科大學學報,2010,27(9):733-736.

[8] 黃一玲,田蕾,蔣娟娟.氨氯地平對貝那普利及其代謝物藥動學的影響[J].中國新藥雜志,2007,16(20):1705-1708.

DOI 10.3870/yydb.2014.04.024

Content Determination in Amlodipine Besylate and Benazepril Hydrochloride Capsules by UPLC

WANG Ya-jing1,DENG Hong1,ZHANG Shu1,HUANG Xue-feng2
(1.Institute of Materia Medica,Guangdong Pharmaceutical University,Guangdong Provincial Key Laboratory of Advanced Drug Delivery,Guangzhou 510006,China;2.Guangdong Lifeng Pharmacy Ltd.,Guangzhou 510931,China)

Objective To establish a method for the determination of the content of benazepril hydrochloride and amlodipine besylate capsules.MethodsUltra performance liquid chromatography(UPLC)was adopted in this study.The analytical column was BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)and the mobile phase was methanol-water-formic acid(65∶35∶1 in volume)at a flow rate of 0.2 mL·minL-1.The ultraviolet(UV)detection wavelength was 240 nm,the column temperature was 30℃,and the injection volume was 2 μL.ResultsAmlodipine besylate could be well separated from Benazepril hydrochloride under the conditions mentioned above.The linear relationship between the concentration and area of chromatographic peak were established in the range of 5.14-51.40 μg·mL-1for amlodipine besylate and in the range of 19.92-199.24 μg·mL-1for benazepril hydrochloride(r=0.999 9).The average recoveries of amlodipine besylate and benazepril hydrochloride were 100.3%and 99.3%(n=9),respectively.ConclusionThe method is simple,specific,accurate and suitable for the determination of the content of amlodipine besylate and benazepril hydrochloride capsules.

Amlodipine,besylate;Benazepril,hydrochloride;Chromatography,ultra performance liquid;Determination

R972.4;R927.2

A

1004-0781(2014)04-0493-03

2013-07-24

2013-10-31

*廣東省科技廳企業科技特派員工作站建設項目(2011B090600033)

王亞靜(1988-),女,河北石家莊人,在讀碩士,主要從事藥物制劑及質量分析方面的研究。電話:020-39352507；E-mail：wangyajing04@163.com。

鄧紅(1968-),女,廣東清遠人,教授級高級工程師,學士,主要從事藥物制劑及質量分析方面的研究。電話: 020-39352507,E-mail：dengh361@sohu.com。